化学药中阿奇霉素干混悬剂含量检测方案

高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量 摘要 目的：建立高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量。方法：采用Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1 的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）为流动相，流速为0.35mL·min-1，柱温为30℃，检测长为215nm。结果：线性范围为467.70-1434.51µg·mL-1，r =0.999758，平均回收率（n=15）为99.9%（RSD=1.1%）；本方法重复性和精密度良好（RSD＜2.0%）。结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于阿奇霉素干混悬剂的含量测定。 关键词：阿奇霉素干混悬剂;高效液相色谱法;含量测定 Determination of azithromycin for suspension by HPLC Abstract Objective To establish a high-performance liquid chromatography(HPLC) method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18（150mm×2.1mm,5μm）.The mobile phase composed of 0.025 mol·L-1 Na2HP04(pH9.0)-acetonitrile(45：55).The flow rate was 0.35 mL·min-1 , and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51µg·mL-1,The average recovery(n=15) was 99.9% and RSD(n=15) was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15) was 0.6%;The repeatability and precision of the method were good （RSD＜2.0%）.Conclusion:This method is simple and believable with good repeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension. Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination 阿奇霉素(azithromycin)是一种15元氮环内酯类抗生素［１］，其抗菌谱与红霉素相似但抗菌作用更强,突出的优点是对碱稳定，半衰期长，有较高的生物利用度［２］，因此具有服药方便，疗程短，用药量少，疗效肯定等优点，其制剂阿奇霉素干混悬剂在国内外临床已广泛使用，本文参考有关文献［４］、［5］、［6］，采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便准确、重复性好，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定的方法之一。 1 仪器与试剂 海能LC7000液相色谱仪（LC7011 泵及LC7050自动进样器，LC7020紫外检测器）；；梅特勒 XS105电子天平；色谱柱 Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm）。 阿奇霉素工作对照品（含量946μg·mg-1，批号：0601，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素杂质A工作对照品（含量95.4%，批号：aza060801，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素干混悬剂(规格为100mg，批号：063070521、063070301、063070302，齐鲁制药有限公司)；乙睛为色谱纯，美国moker公司产品；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。 2 色谱条件 色谱柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流动相：0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）；流速：0.35mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：215nm；进样体积：20μL。 3 溶液制备 3.1 对照品溶液的制备 精密称定阿奇霉素对照品25mg和阿奇霉素杂质A对照品5mg，置同一25mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 3.2 供试品溶液的制备 取阿奇霉素干混悬剂，求出平均装量，将装量差异项下的内容物混匀，精密称取适量（约相当于阿奇霉素25mg），置25mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。 4 系统适用性试验 按上述色谱条件,进样对照品溶液20μL，结果理论塔板数按阿奇霉素峰计算不小于1500；阿奇霉素峰与阿奇霉素杂质A峰分离度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子不大于2.0，对照品溶液重复进样主峰面积的RSD<2.0%(n=5) 5 线性关系试验 按对照品溶液阿奇霉素浓度的50-150%制定5个不同浓度梯度，分别是50%、80%、100%、120%、150%，每个浓度梯度平行制备3份样品溶液，共15份样品溶液，每份样品都加入处方量辅料，用流动相溶解并定量稀释制成规定浓度，即得系列供试品溶液。按上述色谱条件，分别进样20μL，记录阿奇霉素峰面积，以浓度（μg·mL-1）为横坐标，以相应的阿奇霉素峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758 结果表明：在467.70-1434.51µg·mL-1范围内，阿奇霉素浓度与峰面积呈良好线性关系。 6 回收率试验 溶液制备同线性关系试验供试品溶液，按外标法以峰面积计算供试品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根据含量结果计算回收率，结果5种浓度回收率（ｎ＝3）分别为99.2%( RSD=0.5%),98.6%( RSD=0.9%),100.0%( RSD=0.3%), 101.2%( RSD=0.7%),100.7%( RSD=0.3%)；平均回收率（ｎ＝15）为99.9%( RSD=1.1%)。说明此方法得到的测定结果准确可靠。 7 精密度试验 7.1 重复性 取同一批(063070521)阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下方法制备所需溶液，平行测定6次的含量结果，RSD值为0.8%。 7.2 中间精密度 取3批阿奇霉素干混悬剂，在不同时间，由不同的化验员，按“3”项下方法制备所需溶液分别测定，二人测定的同批含量结果的相对平均偏差 063070521为0.8%，063070301为0.6%，063070302为1.6%。 8 稳定性试验 按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液（批号：063070521），每间隔1小时，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样13次，量取主峰面积，计算几次进样结果峰面积的RSD值。对照品溶液RSD为0.9%，样品溶液RSD为0.8%，表明对照品溶液和样品溶液至少在12h内稳定。 9 样品测定 取3批阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下分别进样20μL，按外标法计算含量，结果与抗生素微生物法比较见下表 批号 本法 药典法 (标示量%) (标示量%) 063070521 99.2 100.6 063070301 108.2 108.4 063070302 102.6 103.9 从表结果可看出本法与药典采用的抗生素微生物效价法测定阿奇霉素干混悬剂的含量无显著性差异。 10 讨论 10.1 本文参考有关文献［４］，对流动相的组成进行了探讨，发现采用本文的流动相即0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55），峰形稳定，分离较好。 10.2 溶剂的选择 由于阿奇霉素干混悬剂的辅料较多，故溶剂选择比较困难。本法采用流动相和乙腈试验对比，结果发现均可溶样，但因纯乙腈毒性较大且价格较贵，故最后溶剂定为流动相。 10.3 样品浓度选择 采用阿奇霉素浓度为1mg·mL-1时峰形对称，和相邻杂质峰分离较好；浓度过大，峰拖尾严重且辅料量大而不好过滤；浓度过小，准确度受影响。 10.4 干扰试验 将溶剂和按处方工艺配制不含阿奇霉素的空白辅料，按“3”项下方法制备空白供试液，记录色谱图，结果显示空白溶剂和空白辅料对本法测定无干扰。 10.5 测定条件流动相的流速±0.05ml，柱温度±5℃，乙腈相比例±5%，缓冲盐pH±0.4等进行小的变动，系统适用性均能达到试验要求，说明此方法适用范围较广。 所以，我们认为本法简便、准确、重现性好，样品溶液稳定，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定方法之一。 参 考 文 献 ［１］李荣凌，张先洲.阿奇霉素临床应用分析.中国医院药学杂志2006年第26卷第9期 ［２］张晔．高效液相色谱法测定阿奇霉素片的含量．中国药业2006年第15卷第17期 ［３］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京.化学工业出版社，2005：附录ⅪＡ ［４］The United States Pharmacopeial Convention.USP29-NF24 Page227 ［５］International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2A: Guideline on Validation of Analytical Procedures: Definitions and Terminology [FDA, March 1, 1995 (60 FR 11259)] ［６］International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2B: Guideline on the Validation of Analytical Procedures: Methodology [FDA, May 19, 1997 (62 FR 27463)]. PAGE - 1 -