EZsep™HLB固相萃取柱应用于水产中磺胺类药物残留量的检测

EZsep™ HLB固相萃取柱应用于水产中磺胺类药物残留量的检测前言磺胺类药物是应用最早的一类人工合成抗菌药物，具有抗菌谱广、疗效强、方便安全等优点，在水产养殖中应用非常广泛，但是磺胺类药物可通过食物链在人体内蓄积，导致细菌产生抗药性，危害人体健康，引起排尿和造血紊乱等不良后果。为了消费者健康，严格监控动物源性食品中的药物残留至关重要，为此需要可靠的分析方法来监测这些药物残留。本实验参考标准《农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》，使用EZsep™ HLB固相萃取柱净化样品，高效液相色谱进行检测，建立了水产中磺胺类药物残留量的分析方法。关键词水产；磺胺类；兽药残留；EZsep™HLB1 实验过程1.1 仪器与试剂 MPREP-SPE08固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；EZsep™ HLB固相萃取柱（150 mg/6mL），货号：PZ12603，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；MVP全自动高通量真空平行浓缩仪，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；LC-20AD液相色谱仪，岛津企业管理（中国）有限公司；冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂 ；甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；正己烷（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；乙酸乙酯（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；乙酸（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司；无水硫酸钠（分析纯），购自国药集团化学试剂有限公司，经 450℃灼烧4h，置于干燥器内备用；甲醇中14种磺胺类药物混标，100μg/mL，坛墨质检科技股份有限公司。1.2 工作液配制 取甲醇中14种磺胺类药物混标溶液1.0mL，用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为10μg/mL的磺胺类药物混标中间液。分别移取10μg/mL的磺胺类药物混标中间液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL用流动相稀释至10mL容量瓶中，得到浓度分别为0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0μg/mL的标准工作溶液。1.3 实验部分准确称取鱼肉试样5.0 g，置于50mL具塞离心管中，先加入25 mL乙酸乙酯，均质1min，然后加入5g无水硫酸钠，旋涡混匀1min，超声提取1min，8000r/min冷冻离心10 min，将乙酸乙酯层移到200 mL浓缩杯中。再向原离心管中加人25 mL乙酸乙酯，旋涡混匀1min，8000r/min冷冻离心10 min，将乙酸乙酯层合并于200 mL浓缩杯中，于30℃水浴中减压浓缩至近干。先用1mL甲醇溶解上述残渣，再加入2mL 1%乙酸溶液，涡旋混匀，超声1min，转移到新的50mL离心管中，再向浓缩杯中加人1mL甲醇和2mL 1%乙酸溶液，涡旋混匀，超声1min，转移合并于50mL离心管中。向离心管中加人8mL正已烷，涡旋混匀，8000r/min冷冻离心5min，弃上层正已烷层，再加入8mL正已烷重复操作一次，下层加水10mL稀释，混匀，待净化。EZsep™HLB固相萃取柱（150 mg/6mL，货号：PZ12603）依次用5mL甲醇、5mL水活化后，取待净化液上样，上样结束后依次用3mL水、2mL5%甲醇水溶液淋洗萃取柱，再用10mL甲醇洗脱萃取柱，收集洗脱液于30℃氮吹浓缩至近干，用流动相定容至1mL，混匀，用PTFE微孔滤膜过滤，高效液相色谱测定。1.4 LC分析色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）柱温：40℃流动相：A：2%乙酸溶液 B：乙腈 C:甲醇流速：0.6mL/min检测波长：270nm进样量：50μL表1  流动相梯度表时间/min流动相A/%流动相B/%流动相C/%0855101585510307020104570201045.18551055855102 实验结果见表2和附图3 结论 本实验使用EZsep™HLB固相萃取柱（150 mg/6mL，货号：PZ12603，北京莱伯帕兹检测科技有限公司）对鱼肉中磺胺类药物净化后进行测定，该方法的加标回收率在76.1%~92.0%之间，RSD在1.0%~4.6%之间。准确性和精密度均满足农业部958号公告-12-2007要求，实验方法稳定、可靠。4 参考文献 [1] 农业部958号公告-12-2007 水产品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法附图1  1.0μg/mL混标色谱图附图2  空白样品色谱图附图3  样品加标色谱图表2  加标回收率序号项目加标浓度mg/kg回收率（%）均值RSD123456%%1SD0.179.2 76.1 83.5 83.7 80.4 83.0 81.0 3.7 2sulfathiazole0.183.3 80.3 84.5 83.1 81.0 79.9 82.0 2.3 3SMR0.187.4 89.7 91.9 89.9 90.5 91.5 90.1 1.8 4SMD0.182.6 80.3 83.3 80.4 84.5 79.9 81.8 2.3 5SM20.190.3 89.0 90.9 89.8 87.5 88.5 89.3 1.4 6SMP0.187.2 87.8 87.9 92.0 88.3 87.2 88.4 2.0 7SCP0.180.1 82.2 82.4 82.3 82.9 81.6 81.9 1.2 8SMM0.179.1 88.2 88.9 87.9 90.5 87.1 87.0 4.6 9SMZ0.178.9 81.3 81.3 81.5 82.3 80.8 81.0 1.4 10sulfadoxine0.178.5 82.6 80.7 80.1 81.4 80.2 80.6 1.7 11SFZ0.190.2 86.7 88.7 86.4 89.4 86.5 88.0 1.9 12SDM0.179.7 81.2 80.1 82.2 80.7 79.8 80.6 1.2 13SQX0.182.8 84.6 83.2 83.1 84.2 82.3 83.4 1.0