使用 Agilent Bravo 平台自动提取血浆 中的代谢物

前言在血浆代谢组学分析中，正确的样品前处理策略对于获得高质量且可重现的结果至关重要。该策略必须能够淬灭代谢反应并有效提取出代谢物供 LC/MS 分析。遗憾的是，针对包括血浆在内的生物样品前处理，尚且没有经过验证的标准化方法，也没有自动化方案。基础研究和转化研究要处理大量样品，可能需要难以企及的人力投入，还可能出现样品处理不一致的问题。另外，血浆中的代谢物本质上是代谢和分解两个过程的产物，而这些过程由细胞和血液中的酶催化完成。要准确测定代谢物的相对浓度，最根本的就是要在采样时最大程度减弱甚至消除所有这些酶的残余活性1。综上所述，这些障碍可能会影响下游定量分析的准确度，以及分析结果的日间和实验室间一致性。为了克服这些障碍，我们为血浆代谢物分析开发了一套基于 Bravo 代谢组学样品前处理平台 (Bravo) 的自动化样品前处理方案。该方案在 LC/MS 分析之前通过沉淀血浆蛋白质淬灭酶活性，然后去除脂质并提取代谢物。通过对样品溶液进行改性，可阻止蛋白质内形成其维持分级超微结构所必需的分子内非共价键合，从而使蛋白质沉淀。添加破坏分子内静电相互作用的有机溶剂或其他试剂是两种常用的蛋白质沉淀策略。至于采样之后仍会持续进行并且可能改变代谢物浓度的分解和代谢过程，必须破坏蛋白质的超微结构，以便在沉淀蛋白质的同时抑制酶活性。最后，为了能够分析代谢物，蛋白质沉淀策略还必须保持代谢物溶解度，并与代谢物提取工作流程兼容。