通过提高温度可以诱导双链核酸分离成单链。在一定温度下,碱基对之间的氢 (H)键会断裂。热解链实验利用了核碱基之间H 键数量的差异。例如,DNA 核苷酸的腺苷与胸腺嘧啶 (A=T) 之间以及鸟嘌呤与胞嘧啶 (GΞC) 之间的 H 键,或 RNA 中腺苷与尿嘧啶 (A=U) 和 G 与 C 碱基之间的H 键。由于 GΞC 核苷酸含有三个氢键,解离 GΞC 所需的热能大于双键碱基对。含有更多 GΞC 对的 DNA 和 RNA 将在更高的温度下解链。因此,解链温度 (T m )可以准确指示样品中的碱基对组成(GΞC与 A = T/U = T的比率)。在核酸的药物发现、开发和生产过程中,Tm 通常被研究人员和制造商用作二级鉴定测试(QC 检查)。解链温度通常通过紫外-可见分光光度法测量,因为在核酸的最大吸收峰 260 nm 处,单链核酸的吸光度高于双链核酸[1]。以鲱鱼精子 DNA 为例,图 1 显示,与 25 °C 相比,260 nm处的吸光度在 90 °C 时明显更高。