LC-MSMS测定动物性食品中β-受体激动剂残留量

 本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定动物性食品中β-受体激动剂残留量的方法。各目标物在线性范围在0.5~50 μg/L间，相关系数R＞0.99。在空白猪肉基质中添加0.5、1、5μg/kg三个浓度混标，回收率在83.2%~110%之间，RSD在1.15%~6.80%。该分析方法灵敏度高，重复性好，准确度高，稳定可靠。可供相关行业检测人员参考使用。SSL-CA23-202 Excellence in ScienceLCMSMS-782 LC-MSMS 测定动物性食品中β-受体激动剂残 留量 LCMSMS-782 摘要：依据GB 31658.22-2022《食品安全国家标准动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联 质谱法》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用技术测定动物性食品中β-受体激动剂残留量的方法。采用内标 法建立校准曲线，在 0.5~50 ug/L浓度范围内线性关系良好，相关系数大于0.99。在 0.5、5、50 ug/L 三个浓度 下，各化合物的保留时间和峰面积的 RSD%分别在0.08~0.26%和0.67~7.35%之间，仪器精密度良好。对空白 猪肉样品进行了0.5、1、5 ug/kg 三个浓度水平的加标回收实验，回收率在 83.2%~110%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于动物性食品中β-受体激动剂残留量的快速检测。 关键词：三重四极杆液质联用仪动物性食品 β-受体激动剂 技术特点： 小各β-受体激动剂化合物灵敏度远高于标准要求。 ◇分析速度快，4.5分钟完成分析，优于标准方法。 β-受体激动剂是一类人工合成苯乙醇胺类药物，将其加入动物饲料中可提高饲料转化率，提高动物的肌 肉生长。已有研究证明，含有β-受体激动剂残留的动 物组织被人类食用后，会产生头痛、胸闷、心悸、恶心、肌肉震颤等症状，并诱发心脑血管系统的疾病，甚至导 致死亡。我国农业农村部250号公告明确规定，在食 用动物中禁止使用β-受体激动剂类药物。 本文参考 GB 31658.22-2022《食品安全国家标准 动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，使用岛津三重四极杆液质联用仪，建立 了动物性食品中β-受体激动剂残留量的检测方法，可 为相关从业人员提供参考。 实验部分 1.1仪器 岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8050，配置信息如下： 系统控制器：CBM-20A脱气机：DGU-20A5R 输 液 泵：LLC-30AD×2柱温箱：CTO-20AC 自动进样器：9SIL-30AC质谱1仪：LCMS-8050 色谱工作站：LLabsolutions Ver. 5.109 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱：Shim-pack GIST C18-AQ HP (50 mm x 2.1 mm l.D.， 1.9 um，岛津(上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30807-01) 流动相：A-2 mmol/L 甲酸铵-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇 进样体积：33uL 柱 温：40℃流 速：0.3 mL/min 洗针液：甲醇/水=1：1(v：v) 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为5%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 0.50 泵 B Conc 5 2.50 泵 B Conc 80 2.51 泵 B Conc 5 4.50 控制器 STOP 质谱条件 离子化模式：ESI+接口电压：4kV 接口温度：350°℃DL温 度：250°℃加热模块温度：400℃ 雾化气流速：3.0L/min 干燥气流充速速：：10.0L/min 加热气流速：10.0 L/min 碰 撞 气：氩气 扫描模式：多反应监测(MRM) 表2 MRM 参数 序号 中文名称 英文名 CAS 号 前体 离子 产物 离子 Q1 Pre Bias (V) CE(V) Q3 Pre Bias (V) 1 克仑特罗 ClenbuterolHydrochloride 21898-19-1 277.00 168.10203.00* -11.0-11.0 -30.0-17.0 -18.0-22.0 2 克仑特罗-D。 Clenbuterol-D。 129138-58-5 286.00 204.10* -14.0 -17.0 -16.0 3 莱克多巴胺 RactopamineHydrochloride 90274-24-1 302.00 106.95164.15* -10.0-10.0 -32.0-16.0 -22.0-13.0 4 莱克多巴胺-D3 Ractopamine-D6 Hydrochloride 1276197-17-1 305.10 167.15* -15.0 -16.0 -19.0 148.00* -13.0 -17.0 -12.0 5 沙丁胺醇 Salbutamol 18559-94-9 240.00 222.00 -14.0 -10.0 -18.0 6 沙丁胺醇-D3 Salbutamol-D：1219798-60-3 243.10 151.10* -12.0 -18.0 -17.0 160.00 -11.0 -16.0 -18.0 7 西马特罗 Cimaterol 54239-37-1 220.00 202.10* -13.0 -9.0 -16.0 8 西马特罗-D7 Cimaterol-D7 1228182-44-2 227.10 161.20* -11.0 -17.0 -13.0 9 齐帕特罗 Zipaterol Hydro- 119520-05-7 261.90 185.10* -11.0 -24.0 -20.0 chloride 201.90 -11.0 -20.0 -21.0 10 齐帕特罗-D7 Zipaterol-D7 1217818-36-4 269.00 185.20* -13.0 -23.0 -15.0 11 氯丙那林 Clorprenaline 3811-25-4 214.00 118.10 -10.0-13.0 -26.0-18.0 -23.0-28.0 12 氯丙那林-D7 Clorprenaline-D7 / 221.00 155.10* -11.0 -17.0 -18.0 13 特布他林 Terbutalinehemisulfate salt 23031-32-5 226.10 107.10 -10.0 -32.0 -19.0 152.10* -10.0 -17.0 -30.0 14 特布他林-D。 Terbutaline-D。 1189658-09-0 235.10 155.20* -13.0 -16.0 -18.0 143.20 -10.0 -24.0 -17.0 15 西布特罗 Cimbuterol 54239-39-3 234.00 160.20* -13.0 -14.0 -13.0 16 西布特罗-D。 Cimbuterol-Dg 1246819-04-4 243.10 161.20* -13.0 -15.0 -19.0 17 马布特罗 Mabuterol Hy-drochloride 54240-36-7 311.00 202.00 -12.0 -33.0 -22.0 237.10* -10.0 -19.0 -26.0 LCMSMS-782 18 马布特罗-D。 Mabuterol-D。Hydrochloride 1353867-83-0 320.00 238.20* -16.0 -18.0 -19.0 293.00* -12.0 -19.0 -23.0 19 溴布特罗 Brombuterol 41937-02-4 366.70 349.00 -12.0 -12.0 -28.0 20 溴布特罗-D。 BroMbuterol-D。 1353940-55-2 375.80 294.05* -11.0 -19.0 -23.0 21 班布特罗 BambuterolHydrochloride 81732-46-9 368.40 72.20 294.20* -12.0 -12.0 -31.0 -18.0 -16.0 -23.0 22 班布特罗-D。 Bambuterol-D。Hydrochloride 1794810-59-5 376.90 295.30* -11.0 -20.0 -17.0 203.00 -11.0 -18.0 -22.0 23 克仑丙罗 ClenproperolHydrochloride 75136-83-3 263.10 245.00* -11.0 -13.0 -17.0 24 克仑丙罗-D7 Clenproperol-D， 1173021-09-4 270.00 204.10* -14.0 -19.0 -16.0 25 妥布特罗 TulobuterolHydrochloride 56776-01-3 228.00 118.10154.00* -10.0-10.0 -28.0-17.0 -22.0-28.0 26 妥布特罗-D。 Tulobuterol-D。Hydrochloride 1325559-14-5 237.00 155.20* -13.0 -16.0 -18.0 121.10* -10.0 -23.0 -23.0 27 利托君 Ritodrine 26652-09-5 287.90 150.10 -10.0 -19.0 -16.0 Clencyclohex- 132.10 -10.0 -33.0 -25.0 28 克仑赛罗 erol Hydrochlo- 1435934-75-0ride 319.00 203.00* -11.0 -21.0 -22.0 29 克仑赛罗-D10 Clencyclohex- erol-D10 1346599-61-8 329.00 203.10* -10.0 -22.0 -25.0 30 马喷特罗 Mapenterol Hy- 54238-51-6 325.00 217.10 -10.0 -27.0 -23.0 drochloride 237.00* -12.0 -18.0 -26.0 31 克仑潘特 ClenpenterolHydrochloride 37158-47-7 291.00 132.10203.00* -10.0-10.0 -30.0-17.0 -25.0-22.0 HydroxyMethyl 132.10 -10.0 -30.0 -25.0 32 羟甲基克仑特罗 ClenbuterolHydrochloride 37162-89-3 293.00 203.00* -10.0 -19.0 -21.0 33 羟甲基克仑特罗-D6 Clenbuterol-Dr 八 1346601-00-0 298.90 203.10* -10.0 -17.0 -16.0 *代表定量离子对 ■样品前处理 图1 样品前处理步骤图 ■结果与讨论 3.1标准样品谱图 克仑丙罗 利托君 羟甲基克仑特罗 图2 部分β-受体激动剂标准品 MRM 色谱图(0.5ug/L) 3.2校准曲线和灵敏度 配制0.5、1、2、5、20、50 ug/L的系列标准工作液，其中同位素内标的浓度均为 5 ug/L， 以定量离子峰面 积比为纵坐标，浓度比为横坐标，绘制校准曲线如图3所示。根据0.5 ug/L标样数据，以3倍信噪比、10倍信噪 比计算检出限、定量限，结果如表3所示。 图3 部分β-受体激动剂校准曲线 LCMSMS-782 表3β-受体激动剂相关系数和灵敏度 序号 化合物 相关系数 检出限 (ug/L) 定量限 (ug/L) 序号 化合物 相关系数r 检出限 (ug/L) 定量限 (ug/L) 1 克仑特罗 0.999 0.018 0.053 10 溴布特罗 0.998 0.004 0.013 2 莱克多巴胺 0.999 0.002 0.006 11 班布特罗 0.998 0.002 0.006 3 沙丁胺醇 0.999 0.006 0.017 12 克仑丙罗 0.998 0.092 0.277 4 西马特罗 0.999 0.150 0.450 13 妥布特罗 0.997 0.009 0.026 5 齐帕特罗 0.998 0.041 0.123 14 利托君 0.999 0.009 0.026 6 氯丙那林 0.999 0.010 0.029 15 克仑赛罗 0.997 0.226 0.679 7 特布他林 0.996 0.016 0.049 16 马喷特罗 0.998 0.011 0.032 8 西布特罗 0.999 0.010 0.031 17 克仑潘特 0.999 0.010 0.030 9 马布特罗 0.998 0.003 0.009 18 羟甲基克仑特罗 0.998 0.023 0.068 3.3重复性实验 取 0.5、5和50 ug/L标准工作液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果如表4所示：各化合物的保 留时间和峰面积的 RSD%分别在 0.08~0.26%和0.67~7.35%之间。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 化合物 RSD% (0.5 ug/L) RSD%(5ug/L) RSD%((50ug/L) 序号 R.T Area R.T Area R.T Area 1 克仑特罗 0.10 2.52 0.10 3.48 0.09 1.52 2 莱克多巴胺 0.11 3.33 0.11 0.67 0.10 1.23 3 沙丁胺醇 0.16 4.39 0.16 2.68 0.18 1.28 4 西马特罗 0.17 5.61 0.18 2.40 0.26 1.20 5 齐帕特罗 0.20 4.46 0.18 3.17 0.19 1.47 6 氯丙那林 0.09 5.08 0.09 1.46 0.09 1.61 7 特布他林 0.15 6.29 0.16 1.60 0.19 1.18 8 西布特罗 0.16 2.72 0.14 2.79 0.14 0.73 9 马布特罗 0.10 4.33 0.10 4.25 0.08 2.37 10 溴布特罗 0.10 5.56 0.09 2.62 0.09 0.95 11 班布特罗 0.12 5.07 0.10 5.52 0.10 2.10 12 克仑丙罗 0.12 5.28 0.12 3.21 0.10 2.02 13 妥布特罗 0.11 4.21 0.09 3.07 0.09 1.97 14 利托君 0.12 2.56 0.14 1.44 0.12 2.10 15 克仑赛罗 0.12 7.35 0.14 2.35 0.12 1.09 16 马喷特罗 0.11 2.02 0.10 1.10 0.09 2.45 17 克仑潘特 0.10 3.75 0.10 1.53 0.09 2.05 18 羟甲基克仑特罗 0.11 4.39 0.11 2.71 0.11 2.48 3.4加标回收率 将猪肉空白样品进行0.5、1、5 ug/kg三个浓度水平加标，按照前处理方法处理后上机，每个水平重复测定6次，结果如表5所示：平均回收率在 83.2%~110%之间， RSD 在1.15%~6.80%之间。 LCMSMS-782 表5添加回收率结果 (n=6) 序号 化合物 低浓度 (0.5 ug/kg) 中浓度(1 ug/kg) 高浓度 (5 ug/kg) 平均回收率(%) RSD(%) 平均回收率(%) RSD(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 克仑特罗 87.5 3.23 90.3 2.05 93.1 6.80 2 莱克多巴胺 110 2.28 104 2.88 95.4 4.98 3 沙丁胺醇 87.9 4.30 90.9 3.32 91.4 3.48 4 西马特罗 88.8 2.81 88.0 2.78 94.8 6.01 5 齐帕特罗 94.2 4.07 99.4 3.80 93.6 6.65 6 氯丙那林 105 1.53 103 2.06 92.0 3.97 7 特布他林 96.4 3.94 101 2.34 92.2 3.34 8 西布特罗 95.0 3.07 97.0 3.42 95.9 4.86 9 马布特罗 92.5 6.67 96.0 2.28 98.8 2.98 10 溴布特罗 96.3 3.97 97.0 3.44 93.8 3.32 11 班布特罗 92.9 4.01 90.4 2.46 95.4 5.78 12 克仑丙罗 93.8 5.65 94.8 4.47 92.9 3.36 13 妥布特罗 87.6 2.21 94.7 1.39 97.1 4.32 14 利托君 84.2 4.50 86.1 5.24 87.8 4.74 15 克仑赛罗 95.4 3.06 98.3 1.15 98.4 4.71 16 马喷特罗 94.0 2.46 88.9 4.65 85.3 2.85 17 克仑潘特 86.5 2.98 83.7 4.46 83.2 2.68 18 羟甲基克仑特罗 96.0 3.98 102 4.01 94.7 2.64 结论 本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定动物性食品中β-受体激动剂残留量的方法。各目标物在 线性范围在 0.5~50 ug/L间，相关系数R> 0.99。在空白猪肉基质中添加0.5、1、5 ug/kg 三个浓度混标，回收 率在 83.2%~110%之间， RSD 在1.15%~6.80%。该分析方法灵敏度高，重复性好，准确度高，稳定可靠。可供 相关行业检测人员参考使用。 岛津应用云