5种牧草蛋白质、脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维及由水稻秸秆和精料补充料组成的基础饲粮中蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量的检测

西藏地区不同牧草体外发酵特性研究动物营养学报２０１６，２８（６）：１８０４⁃１８１３Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ 李 斌等：西藏地区不同牧草体外发酵特性研究６期５０８１ ｄｏｉ ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１６．０６．０２３ 西藏地区不同牧草体外发酵特性研究 李 斌 １ 陈 亮 ２∗ 巴桑珠扎 １ 奥斯曼 １ 周传社 ２，３∗∗ （１．西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所 ，拉萨 ８５００００；２．中国科学院亚热带农业生态研究所 ，亚热带农业生态过程重点实验室 ，湖南省畜禽健康养殖工程技术中心 ，农业部中南动物营养与 饲料科学观测试验站 ，长沙 ４１０１２５；３．湖南畜禽安全生产协同创新中心 ，长沙 ４１０１２８） 摘 要 ：本文旨在利用体外产气法评定西藏地区不同牧草营养价值 。选取西藏地区 ５种常见 牧草 ，通过单因素试验设计 ，利用体外产气法评定 ５种牧草体外发酵 ４８ ｈ 累积产气量 、理论最大 产气量 （Ｖｆ ）、初始产气速率 （ＦＲＤ０）、达到最大产气量一半时所需时间 （ ｔ０．５）、体外干物质消失率 （ ＩＶＤＭＤ ）、体外中性洗涤纤维消失率 （ ＩＶＮＤＦＤ ）、ｐＨ 、氨态氮 （ＮＨ３⁃Ｎ ）浓度以及挥发性脂肪酸 （ＶＦＡ ）产量 。结果表明 ，体外发酵 ４８ ｈ 后 ，苇状羊茅体外 ４８ ｈ 累积产气量 、Ｖｆ 、ＦＲＤ０、ＩＶＤＭＤ 及甲烷 （ＣＨ４）、乙酸 、丙酸 、丁酸和总 ＶＦＡ 产量均显著高于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５），但其体外发 酵 ｐＨ 及乙酸 ／丙酸显著低于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）；紫花苜蓿体外 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度最高 ，显著高于 其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。综上分析 ，苇状羊茅体外发酵效果最佳 ，与其他试验牧草相比 ，更容易 被瘤胃微生物降解利用 。 关键词 ：西藏 ；牧草 ；体外发酵 中图分类号 ：Ｓ８１６．５ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１００６⁃２６７Ｘ （２０１６）０６⁃１８０４⁃１０ 草地畜牧业一直是西藏的重要经济基础 ，几 十年来一直占农业生产总值的 ６０％左右 ［１］。近年 来 ，随着西藏人口增加和畜牧业的进一步发展 ，传 统的单纯依赖天然草地和以作物秸秆为主的畜牧 业生产模式已不能满足牲畜对饲草的需求 ［２－３］。而随着家畜数量的不断增加 ，导致草畜之间矛盾 日益突出 ，生态环境不断恶化 ，严重影响西藏地区 畜牧生产系统的平衡 、稳定与发展 ［４］。因此 ，大规 模人工种植适合西藏特殊生长环境的牧草 ，对满 足西藏地区畜牧业生产对牧草的需求 、维持西藏 地区生态平衡稳定 、促进藏区经济发展等都具有 重要意义 。 近年来 ，学者对西藏地区牧草以及作物秸秆 的研究较多 。曲广鹏等 ［５］通过对西藏农区牧草和 饲草作物引种试验表明 ，燕麦 、多花黑麦草 、饲用 玉米 、绿麦 、红苋 ５种牧草适合在西藏农区及河谷 地区种植 ，但其并未对这 ５种牧草进行相关的营 养价值评价 。张中岳 ［６］对西藏地区 ２８种牧草的 营养价值及瘤胃降解特性进行了评价 ，为进一步 研究西藏牧草提供了宝贵的基础数据 。张吉等 ［７］研究了添加剂对西藏燕麦和箭筈豌豆混合青贮品 质的影响 ，结果表明添加糖蜜能显著提高混合青 贮的品质 。孙肖慧等 ［８］和李君风等 ［９］通过向西藏 地区燕麦和紫花苜蓿混合青贮中添加 ４％糖蜜或 ３．５％乙醇或 ０．４％乙酸获得优质青贮饲料 。赵庆 杰等 ［１０］通过向西藏青稞秸秆和多年生黑麦草混合 青贮中添加糖蜜和乳酸菌显著提高了混合青贮发 酵品质 。原现军 ［１１］对西藏作物秸秆与牧草混合青 贮进行了研究 ，均有效地提高了混合青贮的发酵 品质 。综上 ，目前对西藏地区牧草及作物秸秆的 研究多数集中在西藏地区青贮料的研究领域 ，而 对牧草干草瘤胃降解特性研究鲜有报道 。因此 ， 收稿日期 ：２０１５－１２－１１ 基金项目 ：国家自然科学基金项目 （３１３７２３４２）；中国科学院科技服务网络计划 （ＫＦＪ⁃ＥＷ⁃ＳＴＳ⁃０７１） 作者简介 ：李 斌 （１９８９—），男 ，黑龙江牡丹江人 ，硕士 ，从事西藏黄牛改良育种研究 。 Ｅ⁃ｍａｉｌ ：２７６５０４８２１＠ｑｑ．ｃｏｍ ∗同等贡献作者 本试验利用体外产气技术 ，对西藏拉萨地区常见 牧草的瘤胃体外发酵参数进行研究 ，并通过试验 数据分析 ，筛选出易被瘤胃微生物降解利用的牧 草 ，以期为西藏地区农牧业发展提供科学依据 。 １ 材料与方法 １．１ 试验材料 １．１．１ 样品采集及处理 试验牧草 （紫花苜蓿 、黑麦草 、芦苇 、苇状羊 茅 、燕麦 ）采集于西藏自治区贡嘎县岗堆镇吉纳村 草场 ，牧草经 ６５ ℃烘干 ２４ ｈ ，粉碎经 １ ｍｍ 孔径筛 后备用 。 １．１．２ 试验动物及饲粮 试验供体奶牛为健康状况良好 、体重 （５００±５０） ｋｇ 的 ３头装有永久瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛 ，试验奶牛由湖南省长沙市望城区白若铺镇胜和奶 牛养殖基地提供 。试验期间 ，奶牛饲粮参照 ＮＲＣ ［１２］标准配制 。基础饲粮由水稻秸秆和精料补 充料组成 ，饲粮精粗比为 ４０∶６０。饲粮营养水平测 定依照 Ｈａｌｌ 等 ［１３］，使用 Ｆｉｂｒｅｔｈｅｒｍ ＦＴ１２全自动纤 维仪 （ｇｅｒｈａｒｄｔ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ， Ｇｅｒｍａｎｙ ）测定中 性洗涤纤维 （ｎｅｕｔｒａｌ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ， ＮＤＦ ）和酸性 洗涤纤维 （ ａｃｉｄ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ， ＡＤＦ ）含量 ；按照杨 胜 ［１４］确定的常规方法测定干物质 （ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ，ＤＭ ）、粗蛋白质 （ ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ， ＣＰ ）含量 ，利用 ＩＣＰ⁃ＡＥＳ 法测定钙 （Ｃａ ）、磷 （Ｐ ）含量 ［１５］。试验饲 粮组成及营养水平见表 １。 １．２ 试验方法 １．２．１ 牧草营养成分分析方法 经处理后的粗饲料利用杨胜 ［１４］提供的饲料分 析方法分别对其进行 ＤＭ 、粗脂肪 （ＥＥ ）、粗纤维 （ＣＦ ）、ＮＤＦ 、ＡＤＦ 等营养成分含量进行测定 ；粗灰 分 （ ａｓｈ ）按 ＧＢ／Ｔ ６４３８—２００７方法进行测定 （表 ２）。 １．２．２ 体外发酵液配制 按照 Ｍｅｎｋｅ 等 ［１７］提供的方法配制厌氧缓冲 液 。于晨饲前采集 ３头瘘管牛瘤胃内容物 ，用 ８层 纱布过滤 ，滤液等体积混合后装入事先充满二氧 化碳 （ＣＯ２）并预热到 ３９．５ ℃的保温瓶中 ，迅速带 回实验室 ，与事先在 ３９．５ ℃恒温水浴锅中预热的 厌氧缓冲液混合 （Ｖ 缓冲液 ∶Ｖ 瘤胃液 ＝９∶１）。并持续通 入 ＣＯ２。 表 １ 试验饲粮组成及营养水平 （干物质基础 ） Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｉｅｔ （ＤＭ ｂａｓｉｓ ） ％ 项目Ｉｔｅｍｓ 含量 Ｃｏｎｔｅｎｔ 原料Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ 水稻秸秆 Ｒｉｃｅ ｓｔｒａｗ ４０．００ 玉米 Ｃｏｒｎ ３９．６０ 豆粕 Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ １９．１０ 磷酸氢钙 ＣａＨＰＯ４ １．００ 石粉 Ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ ０．３０ 预混料 Ｐｒｅｍｉｘ１） １．００ 合计 Ｔｏｔａｌ １００．００ 营养水平 Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ２） 干物质 Ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ７０．８８ 粗蛋白质 Ｃｒｕｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １７．９８ 酸性洗涤纤维 Ａｃｉｄ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ４２．９８ 中性洗涤纤维 Ｎｅｕｔｒａｌ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ２３．７２ 钙 Ｃａ ０．７２ 磷 Ｐ ０．３５ 泌乳净能 ７．７０ Ｎｅｔ ｅｎｅｒｇｙ ｆｏｒ ｌａｃｔａｔｉｎｇ ｃｏｗ／（ＭＪ／ｋｇ） Ｎｅｔ ｅｎｅｒｇｙ ｆｏｒ ｌａｃｔａｔｉｎｇ ｃｏｗ／（ＭＪ／ｋｇ ） １）每千克预混料含有 Ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｐｒｅｍｉｘ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ：ＶＡ ≥２ ０００ ０００ ＩＵ ，ＶＤ ≥３００ ０００ ＩＵ ，ＶＥ ≥３ ０００ ＩＵ ，Ｃｕ ≥３ ５００ ｍｇ ，Ｆｅ ≥１０ ０００ ｍｇ ，Ｚｎ ≥１０ ０００ ｍｇ ，Ｍｎ ≥９ ０００ ｍｇ ，Ｍｇ ≥９ ８００ ｍｇ ，Ｉ ≥９０ ｍｇ ，Ｓｅ ≥４０ ｍｇ ，Ｃｏ ≥３０ ｍｇ 。 ２）泌乳净能为计算值 ［１６］，其余为实测值 。 Ｎｅｔ ｅｎｅｒｇｙ ｆｏｒ ｌａｃｔａｔｉｎｇ ｃｏｗ ｗａｓ ａ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｖａｌｕｅ ［１６］， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｖａｌｕｅｓ． １．２．３ 体外培养 称取 （０．５００ ０±０．０００ ３） ｇ 粉碎的牧草秆于发 酵瓶中 ，置于 ３９．５ ℃恒温培养箱中预热 ，向发酵瓶 中加入发酵液前 ，向瓶中通入 ＣＯ２１ ｍｉｎ ，随后加 入 ５０ ｍＬ 发酵液 ，并持续通入 ＣＯ２，立即加上瓶塞 瓶盖 ，并使用针头放气 ，使内外压强保持一致 ，然 后迅速放回恒温培养箱 ，３９．５ ℃恒温静止培养 ４８ ｈ 。每种发酵底物设置 １２、２４、４８ ｈ ３个采样时 间点重复 ，每个采样时间点设置 ３个样品重复 。 １．２．４ 体外发酵总产气量测定 体外发酵产气量按王祚等 ［１８］提供方法进行 测定 。 利用 Ｗａｎｇ 等 ［１９－２０］提出的逻辑斯谛 －指数 （ＬＥ ）模型对累积产气量数据进行拟合 ： ； 其中 ：Ｖ 表示 ｔ 时间点底物的产气量 （ｍＬ ）；Ｖ ｆ 表示理论最大产气量 （ｍＬ ）；ｋ 表示产气分率 ；ｂ 和 ｄ 是曲线的形状指标 ，ｂ ＞０表示曲线为 ｓ 形 ，ｂ ＜０则表示曲线非 ｓ 形 。 ＦＲＤ０表示初始产气速率 （＜１２ ｈ ），ｔ ０．５表示达到最大产气量一半所需时间 。 表 ２ 牧草营养价值 Ｔａｂｌｅ ２ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｐａｓｔｕｒｅｓ ％ 项目 干物质 ＤＭ 粗脂肪 ＥＥ 粗纤维 ＣＦ 灰分 Ａｓｈ 中性洗涤纤维 ＮＤＦ 酸性洗涤纤维 ＡＤＦ Ｉｔｅｍｓ 紫花苜蓿 Ａｌｆａｌｆａ ９０．３８ ５．１３ ４５．７９ ５．６１ ６７．０４ ４７．３０ 黑麦草 Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ９２．２９ ９．５５ ２３．９４ １５．２１ ５７．１１ ３３．４５ 芦苇 Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ９２．５５ ４．０２ ３３．８５ １２．８９ ７０．１４ ４８．０４ 苇状羊茅 Ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ９０．５９ １．４１ １９．４９ ８．７５ ５２．２５ ３３．１５ 燕麦 Ｏａｔ ９０．０４ ５．３５ ３０．６１ ７．８４ ６８．７４ ４０．９２ １．２．５ 体外发酵相关参数测定 １．２．５．１ 甲烷测定及计算方法 分别于体外发酵中的 １２、２４、４８ ｈ 取出发酵 瓶 ，利用注射器从发酵瓶中抽取 ５ ｍＬ 气体 ，注入 事先已抽真空的集气瓶中 ，然后再注入 ２５ ｍＬ 高 纯度氮气 （Ｎ２）。利用安捷伦 ７８９０Ａ 型气相色谱 仪 （ＵＳＡ ）进行测量 ，载气使用高纯 Ｎ２，总压力 １３０ ｋＰａ ，总流量 ３０． ２ ｍＬ／ｍｉｎ ，柱流量 １．７ ｍＬ／ｍｉｎ ，线速度 ３９．８ ｃｍ／ ｓ ，分流比 １５，吹扫流 量 ３ ｍＬ／ｍｉｎ ，循环流量 ８ ｍＬ／ｍｉｎ ，氢气 （Ｈ２）流量 ４０ ｍＬ／ｍｉｎ ，空气流量 ４００ ｍＬ／ｍｉｎ ［２１］。甲烷产量 计算公式为 ： 其中 ：６是稀释倍数 ，Ｖ ｔ 指在发酵时间 ｔ 时 ，发 酵瓶中气体总体积 （ｍＬ ）；Ｃ 指在发酵时间 ｔ 时 ，所 测甲烷浓度 （％）；Ｖ 指在发酵时间 ｔ 时 ，所生产 ＣＨ４甲烷体积 （ｍＬ ）。 １．２．５．２ ｐＨ 测定方法 分别于体外发酵中的 １２、２４、４８ ｈ 取出发酵 瓶 ，发酵液经 ４００目尼龙布过滤 ，取 ５ ｍＬ 滤液 ，利 用 ｐＨ 计 （ＲＥＸ ＰＨＳ－３Ｃ ，上海仪器设备厂 ）立即测 定滤液 ｐＨ 。 １．２．５．３ 体外发酵氨态氮 （ＮＨ⁃Ｎ ）浓度 ３ 分别于体外发酵中的 １２、２４、４８ ｈ 取出发酵 瓶 ，发酵液经 ４００目尼龙布过滤 ，取 ４ ｍＬ 滤液 ，分 装到 ２个容积为 ２ ｍＬ 离心管中 ，放入 －２０ ℃冰箱 保存 ，分别用于测量 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度 。利用冯宗慈 等 ［２２］改进的比色法 ，使用紫外 ／可见分光光度计 （ＵＶ－２４５０）进行测定 。 １．２．５．４ 体外发酵挥发性脂肪酸 （ＶＦＡ ）含量 分别于体外发酵中的 １２、２４、４８ ｈ 取出发酵 瓶 ，每瓶取 ２ ｍＬ 发酵液 ，经 ２４ １００×ｇ 离心 １５ ｍｉｎ 后 ，取 １．５ ｍＬ 上清液于 ２ ｍＬ 离心管中 ，并加入 ０．１５ ｍＬ ２５％偏磷酸 ，放入 －２０ ℃冰箱保存 。样品 在常温条件下解冻 ，２４ １００×ｇ 和 ４ ℃条件下离心 １０ ｍｉｎ ，取 ０．６ ｍＬ 装与上机瓶中 ，利用气相色谱仪 （安捷伦 ７８９０Ａ ，美国 ）对样品中 ＶＦＡ 含量进行 测定 ［２３］。 １．２．５．５ 体外干物质消失率 （ ＩＶＤＭＤ ）测定及 计算方法 分别于体外发酵中的 １２、２４、４８ ｈ 取出发酵 瓶 ，发酵液经 ４００目尼龙布过滤 ，将过滤后的残渣 全部转移至石英坩埚中并用热蒸馏水反复冲洗 ，置于 １０５ ℃烘箱中烘干 ８ ｈ 以测定剩余干物质 ，并 计算其消失率 ： 其中 ：Ｍ １为发酵前干物质质量 ；Ｍ ２为发酵后 干物质剩余质量 。 １．２．５．６ 体外中性洗涤纤维消失率 （ ＩＶＮＤＦＤ ）测 定及计算方法 测定过干物质消失率后的剩余干物质 ，按照 Ｈａｌｌ 等 ［１３］提供的方法进行测定 ，并计算 ＩＶＮＤＦＤ ： ＩＶＮＤＦＤ （％）＝［１－（ｍ ２／ｍ １）］×１００。 其中 ：ｍ １为发酵前发酵底物中 ＮＤＦ 质量 ；ｍ ２为发酵后剩余干物资中 ＮＤＦ 质量 。 １．３ 数据分析 试验数据采用 ＳＡＳ ８．２的 ＭＩＸＥＤ 过程统计 ， 统计差异显著性定义为 Ｐ ＜０．０５。 ２ 结 果 ２．１ 不同牧草对体外产气量的影响 不同牧草体外发酵产气量如图 １。由图 １可 知 ，５种牧草体外发酵产气量在发酵初期 １～４ ｈ 均 无明显差异 ，第 ４ ｈ 后 ，各牧草体外产气量开始逐 渐上升 ，且由各曲线斜率可知 ，５种牧草体外发酵 产气速率也逐渐增大 ；在第 １２～２４ ｈ ，各曲线斜率 达到最大 ，体外发酵产气速率到达最大值 。体外 发酵 ３６ ｈ 以后 ，５种牧草曲线逐渐斜率变小 ，产气 速率逐渐趋于稳定 。同时由图 １可知 ，苇状羊茅 体外产气量在第 ４ ｈ 后始终高于其他牧草体外产 气量 。体外发酵 ２４和 ４８ ｈ 时 ，苇状羊茅体外产气 量分别为 ７２．１６、８８．１５ ｍＬ ，均高于其他 ４种牧草 ；芦苇体外产气最低 ，分别为 ３５．４４、４８．８４ ｍＬ ，均低 于其他牧草体外产气量 。 ５种牧草体外发酵 ４８ ｈ 体外累积产气量按苇状羊茅 、燕麦 、黑麦草 、紫花 苜蓿 、芦苇的顺序依次降低 。 图 １ 不同牧草对体外产气量的影响 Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅｓ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ２．２ 不同牧草对体外发酵产气参数及甲烷 （ＣＨ４）产量的影响 不同牧草对体外发酵产气参数及 ＣＨ４产量的 影响如表 ３所示 。由表 ３可知 ，５种牧草体外理论 最大产气量 （Ｖｆ ）、初始产气速率 （ＦＲＤ０）和 ＣＨ４产量均以苇状羊茅最高 ，均显著高于其他 ４种牧 草 （Ｐ ＜０．０５）。 ＦＲＤ０越高 ，意味着对应的达到最大 产气量一半时所需时间 （ ｔ０．５）越短 。而 ｔ０．５则以苇 状羊茅和紫花苜蓿最低 ，两者之间没有显著差异 （Ｐ ＞０．０５），但均显著低于其余 ３种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。 ２．３ 不同牧草对 ＩＶＤＭＤ 和 ＩＶＮＤＦＤ 的影响 不同牧草对 ＩＶＤＭＤ 以及 ＩＶＮＤＦＤ 的影响如 表 ４所示 。 ５种牧草之间 ＩＶＤＭＤ 均存在显著差 异 （Ｐ ＜ ０． ０５），其中苇状羊茅 ＩＶＤＭＤ 最高 （５６．２５％），显著高于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。 ５种牧草 ＩＶＤＭＤ 大小按苇状羊茅 、黑麦草 、燕麦 、紫 花苜蓿 、芦苇的顺序依次显著降低 （Ｐ ＜０．０５）。对 于 ＩＶＮＤＦＤ ，苇状羊茅 ＩＶＮＤＦＤ 显著高于紫花苜 蓿和芦苇 （Ｐ ＜０．０５），与燕麦和黑麦草无显著差异 （Ｐ ＞０．０５）；紫花苜蓿 ＩＶＮＤＦＤ 最低 （１４．０３％），显 著低于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。 ２．４ 不同牧草对体外发酵 ｐＨ 和 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度的 影响 不同牧草对体外发酵 ｐＨ 和 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度影响 见表 ５。 ５种牧草以紫花苜蓿体外发酵 ｐＨ 最高 ，其次为芦苇和燕麦 ，三者之间无显著差异 （Ｐ ＞０．０５），但均显著高于苇状羊茅和黑麦草 （Ｐ ＜０．０５）；５种牧草以苇状羊茅体外发酵 ｐＨ 最低 （６．３２），显著低于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。对于 体外发酵液中 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度 ，５种牧草相互之间存 在显著差异 （Ｐ ＜０．０５），紫花苜蓿 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度最高 （１８．６４ ｍｇ／ｄＬ ），显著高于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）；苇状羊茅 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度最低 （６．２６ ｍｇ／ｄＬ ）。５种牧草体外发酵 ４８ ｈ 后 ，发酵液中 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度 按紫花苜蓿 、燕麦 、黑麦草 、芦苇 、苇状羊茅的顺序 显著降低 。 ２．５ 不同牧草对体外发酵 ＶＦＡ 产量的影响 不同牧草对体外发酵 ＶＦＡ 产量的影响如表 ６所示 。 ５种牧草中 ，以苇状羊茅体外乙酸 、丙酸 、丁 酸和总 ＶＦＡ 产量最高 ，均显著高于其他 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）；而乙酸 ／丙酸则以苇状羊茅最低 ，显著 低于其余 ４种牧草 （Ｐ ＜０．０５）。 ３ 讨 论 ３．１ 不同牧草对体外产气量的影响 研究表明 ，５种牧草之间体外产气量均存在差 异 ，以苇状羊茅 ４８ ｈ 累积产气量最高 ，这可能是由 于不同牧草所含的碳水化合物不同所造成的 。牧 草体外发酵产气来源主要是碳水化合物 ，虽然牧 草所含 ＣＰ 在体外发酵时也会产生一部分气体 ，但 整个体外发酵过程中 ，ＣＰ 对体外产气量的贡献量 远低于碳水化合物 ［２４］，Ｃｏｎｅ 等 ［２５］对酪蛋白和淀 粉的体外发酵研究发现 ，发酵 ７２ ｈ 后蛋白质发酵 的产气量仅为碳水化合物的 ３０％。此外 ，本试验 所用 ５种牧草除紫花苜蓿为豆科外 ，其他 ４种牧草 均为禾本科牧草 ；种属不同可能也是粗饲料体外 产气量存在差异的原因之一 。有研究报道指出不 同类型粗饲料体外发酵产气特性有较大差异 ，通 常情况下 ，种内差异较小 ，种间差异较大 ［２４］。本试 验结果表明 ，粗饲料体外发酵在 ６～２４ ｈ 时 ，体外 产气量均急剧上升 ，３６ ｈ 以后趋于平缓 ，此结果与 刘书杰 ［２６］已报道结果有差异 。刘书杰 ［２６］利用阉 割牦牛对青海高原天然牧草营养价值进行评价时 报道 ，天然牧草在 １２～４８ ｈ 产气量的平均值急剧 上升 ，４８ ｈ 以后平均产气量的增加逐渐平缓 。两 者之间差异可能是由于发酵底物不同和发酵液成 分不同造成的 。 表 ３ 不同牧草对体外发酵产气参数和 ＣＨ４产量的影响 Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅｓ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ａｎｄ ＣＨ４ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ 项目 理论最大产气量 Ｖｆ ／ ｍＬ 初始产气速率 ＦＲＤ０ ／（１０－２ ｍＬ／ｈ） 达到最大产气量 一半时所需时间 ｔ０．５ ／ ｈ 甲烷 ＣＨ４ ／（ｍＬ／ｇ） Ｉｔｅｍｓ 紫花苜蓿 Ａｌｆａｌｆａ ５８．５４±１．６９ｄ ４．２６±０．０１ｂ １１．２０±１．４９ｃ １７．５４±１．３６ｂ 芦苇 Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ５６．３６±５．７５ｄ ３．２５±０．０１ｃ １８．９２±２．０６ａ １０．４１±１．２５ｄ 苇状羊茅 Ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ８８．４２±１．７４ａ ７．２６±０．０１ａ ８．７８±２．０７ｃ ２０．６３±１．９８ａ 燕麦 Ｏａｔ ７７．７８±２．４７ｂ ４．７０±０．０１ｂ １４．７３±０．４４ｂ １７．２１±１．５６ｂ 黑麦草 Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ７１．６８±１．２２ｃ ３．０７±０．０１ｃ １６．６９±１．９３ａｂ １５．５９±１．４３ｃ 同列数据肩标不同小写字母表示差异显著 （Ｐ ＜０．０５），相同或无字母表示差异不显著 （Ｐ ＞０．０５）。下表同 。 Ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ， ｖａｌｕｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （Ｐ ＜０．０５）， ｗｈｉｌｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｏｒ ｎｏ ｌｅｔｔｅｒ ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ ｍｅａｎ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （Ｐ ＞０．０５） ． Ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｂｅｌｏｗ． 表 ４ 不同牧草对 ＩＶＤＭＤ 和 ＩＶＮＤＦＤ 的影响 Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅｓ ｏｎ ＩＶＤＭＤ ａｎｄ ＩＶＮＤＦＤ ％ 项目 体外干物质消失率 体外中性洗涤纤维消失率 ＩＶＮＤＦＤ Ｉｔｅｍｓ ＩＶＤＭＤ 紫花苜蓿 Ａｌｆａｌｆａ ３０．６９±２．０１ｄ １４．０３±１．０３ｄ 芦苇 Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ２５．５８±２．３１ｅ １９．１３±２．３１ｃ 苇状羊茅 Ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ５６．２５±１．５２ａ ３９．８６±２．６１ａｂ 燕麦 Ｏａｔ ４１．０４±１．６３ｃ ３５．５５±２．０１ｂ 黑麦草 Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ５１．３８±１．５４ｂ ４０．２９±２．３６ａ 表 ５ 不同牧草对体外发酵 ｐＨ 及 ＮＨ３ ⁃Ｎ 浓度的影响 Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐＨ ａｎｄ ＮＨ３ ⁃Ｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ 项目Ｉｔｅｍｓ ｐＨ 氨态氮 ＮＨ３ ⁃Ｎ ／（ｍｇ／ｄＬ） 紫花苜蓿 Ａｌｆａｌｆａ ６．５９±０．１２ａ １８．６４±１．０２ａ 芦苇 Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ ６．５６±０．３２ａ １０．１１±１．０９ｄ 苇状羊茅 Ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ６．３２±０．２５ｃ ６．２６±０．６５ｅ 燕麦 Ｏａｔ ６．５６±０．２１ａ １５．７６±１．２８ｂ 黑麦草 Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ６．４７±０．２３ｂ １３．８４±１．９６ｃ 表 ６ 不同牧草对体外发酵 ＶＦＡ 产量的影响 Ｔａｂｌｅ ６ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅｓ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ＶＦＡ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ 项目 乙酸 丙酸 丁酸 总挥发性脂肪酸 乙酸 ／丙酸 Ａ／Ｐ Ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ／ Ｐｒｏｐａｎｏｉｃ ａｃｉｄ／ Ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ／ Ｔｏｔａｌ ＶＦＡ／ Ｉｔｅｍｓ （ｍｍｏｌ／Ｌ） （ｍｍｏｌ／Ｌ） （ｍｍｏｌ／Ｌ） （ｍｍｏｌ／Ｌ） 紫花苜蓿 Ａｌｆａｌｆａ ２１．５７±２．３５ｂ ６．５７±０．５６ｂｃ １．７７±０．０８ｃ ３０．９９±２．３０ｂ ３．２８±０．６５ａ 芦苇 Ｐｈｒａｇｍｉｔｅｓ １７．６１±２．３１ｄ ５．５２±０．５２ｃ １．８１±０．１０ｃ ２５．４８±２．５１ｃ ３．２７±０．４１ａ 苇状羊茅 Ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ２７．８５±２．９６ａ １３．６０±０．９６ａ ３．６７±０．１５ａ ４６．０２±３．０１ａ ２．０９±０．３６ｃ 燕麦 Ｏａｔ １８．６１±１．３２ｃ ６．２１±０．８７ｃ ２．５１±０．０６ｂ ２９．８２±３．１２ｂｃ ２．９８±０．１２ｂ 黑麦草 Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ ｒｙｅｇｒａｓｓ ２２．８０±１．３０ｂ ７．７６±０．２３ｂ ２．３６±０．１７ｂ ３３．７４±２．６５ｂ ２．９７±０．２１ｂ ３．２ 不同牧草对体外发酵产气参数及 ＣＨ４产量的 影响 在体外发酵过程中 ，发酵底物为瘤胃微生物 所利用的程度可以通过体外发酵累积产气量来反 映 ［２７］。本试验中 ，各牧草之间理论最大产气量存 在明显差异 ，这可能是由于不同牧草可溶性非结 构性碳水化合物与 ＣＰ 的比例不同所造成的 。汤 少勋等 ［２４］研究报道 ，当可溶性非结构性碳水化合 物与 ＣＰ 之间的比例越大时 ，理论最大产气量越 高 ；比例越小时 ，理论最大产量越低 ，亦即随着牧 草中非结构性碳水化合物含量的增加 ，体外发酵 增强 。高巍等 ［２８］研究表明 ，青贮玉米秸秆及苜蓿 干草中性洗涤可溶物 （ＤＮＳ ）的产气量占饲草累积 产气量的绝大部分 。 ＦＲＤ０表示体外发酵 １２ ｈ 之前产气速率 ，ｔ０．５表 示体外累积产气量达到最大值一半时所需时间 ，通常情况下 ，ＦＲＤ０越大 ， ｔ０．５越小 ［２９］。在本试验 中 ，牧草中以苇状羊茅 ＦＲＤ０最大 ，其 ｔ０．５也最小 。Ｍｕｃｋ 等 ［３０］研究报道 ，体外发酵过程中 ６５％～７０％产气量在发酵初期 ９～１０ ｈ 内产生 ，而本试验中 ，除苇状羊茅外 ，其余 ４种牧草体外发酵产气量达 到总产气量 ５０％时所需时间为 １０～１９ ｈ 之间 ，明 显高于 Ｍｕｃｋ 等 ［３０］所报道的结论 ，可能是由于两 者体外培养方式以及发酵底物的不同而导致 ＦＲＤ０和 ｔ０．５上存在差异 。 反刍动物瘤胃中 ＣＨ４是由瘤胃中碳水化合物 经瘤胃微生物厌氧发酵所生成的 ［３１］。在瘤胃代谢 过程中 ，瘤胃中 ＣＨ４的生成是瘤胃发酵能量损失 的主要原因之一 ，据报道 ，６％～１５％的饲料能量以 ＣＨ４的形式散失 ［３２］。瘤胃中 ＣＨ４的生成与饲粮 中 ＣＰ 、ＡＤＦ 、ＮＤＦ 、无氮浸出物 （ＮＦＥ ）以及 ＩＶＤ⁃ＭＤ 相关 ［３３］。在本研究中 ，不同牧草之间体外发 酵 ＣＨ４产量存在显著差异 ，其中 ，以苇状羊茅体外 ＣＨ４产量最高 ，与刘树军等 ［３４］研究结果一致 ，这种 差异可能是不同粗饲料中可发酵的碳水化合物类 型以及与 ＣＨ４生成相关的牧草成分含量的不同所 致 ［３５］。有报道指出牧草纤维物质含量是影响 ＣＨ４产量的一个重要因素 ［３６］，这可能是由于富含纤维 物质的饲料能促进一些纤维分解菌和 ＣＨ４合成菌 的共生引起的 ，这类微生物可以偶联碳水化合物 的降解产物 ，利用氢气还原 ＣＯ２以合成 ＣＨ４［３７］。 ３．３ 不同牧草对 ＩＶＤＭＤ 和 ＩＶＮＤＦＤ 的影响 ＩＶＤＭＤ 和 ＩＶＮＤＦＤ 是体现瘤胃发酵过程中 粗饲料利用率的重要指标 ［１８］。粗饲料在瘤胃中的 降解实际上是微生物以及微生物分泌的酶相互作 用的结果 ，而降解率的高低与营养物质的结构 、微 生物对底物的附着能力以及微生物分泌酶的催化 能力有关 ［６］。在本试验中 ，不同牧草 ＩＶＤＭＤ 存在 明显差异 ，其中 ，牧草以苇状羊茅 ＩＶＤＭＤ 最高 。这中差异可能是由于牧草富含非结构性碳水化合 物以及可消化的有机物含量不同造成的 ，苇状羊 茅非结构性碳水化合物和可消化有机物含量高于 其他牧草 ，此种结果也暗示苇状羊茅很容易被瘤 胃微生物降解利用 ；而芦苇的 ＩＶＤＭＤ 最低 ，可能 由于其结构不利用微生物的附着及生长所造 成的 。 由于 ＮＤＦ 的降解性影响动物的生长性能 ，并 且牧草在反刍动物瘤胃中的降解率差异比较大 ，因此 ，牧草中 ＮＤＦ 的降解率是评定牧草品质的一 个重要指标 。本研究中 ，牧草以苇状羊茅 ＩＶＮＤＦＤ 最高 ，而其他牧草的 ＩＶＮＤＦＤ 也存在明显差异 ，造 成这种差异的原因可能与微生物与底物的吸附能 力以及底物的结构有关 ，相对于其他牧草 ，苇状羊 茅可能更容易吸附纤维降解菌 。 Ｆｅｒｎａｎｄｏ 等 ［３８］报 道细菌与底物的吸附能力是影响底物消化率的重 要因子 ，徐俊等 ［３９］研究报道 ，苜蓿茎被瘤胃微生物 降解的速率及程度受其组织结构及组分影响 ，同 时其指出微生物对植物组织的吸附方式的不一致 性也可能是造成不同底物纤维降解率不同的原因 之一 。 ３．４ 不同牧草对体外发酵 ｐＨ 和 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度的 影响 瘤胃 ｐＨ 是评价瘤胃内环境的重要指标之一 ，维持瘤胃正常 ｐＨ 是保证瘤胃正常发酵的前提 ，而 正常奶牛瘤胃液 ｐＨ 的正常范围为 ５．５～７．５［４０］，在 本试验中 ，５种发酵底物体外发酵液 ｐＨ 范围为 ６．３２～６．５９，均在正常范围内 。已有报道指出 ，当 ｐＨ 大于 ５．７时 ，瘤胃微生物具有最大生长速 度 ［４１］，由此可知 ，本试验中粗饲料体外发酵均有利 于微生物的生长 。瘤胃 ｐＨ 的大小受反刍动物唾 液分泌 ，有机酸的生成 、吸收和排出等多种因素影 响 ，但其波动的根本原因在于饲粮结构 ［４２］，本试验 中 ，牧草以苇状羊茅体外发酵液中 ｐＨ 最低 ，可能 是由于发酵产生较高的 ＶＦＡ 所造成的 。牧草体外 发酵液 ｐＨ 大小与各粗饲料对应体外发酵 ＶＦＡ 总 量基本保持一致 。 瘤胃中 ＮＨ３⁃Ｎ 是瘤胃微生物合成微生物蛋白 和机体蛋白的主要原料 ，也是微生物生长的重要 氮源 ，其浓度在一定程度上可以反应出瘤胃中蛋 白质降解与合成之间的平衡状态 ［４３］。 Ｓｕｗａｎｌｅｅ 等 ［４４］研究指出 ，瘤胃中 ＮＨ３⁃Ｎ 的最佳浓度范围为 ６．２～２７．５ ｍｇ／ｄＬ ，而在本试验中 ，５种发酵底物体 外发酵液中 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度范围为 ６． ２６ ～１９．７４ ｍｇ／ｄＬ ，均在所报道的最佳浓度范围内 。同 时 ，牧草之间体外 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度均存在显著差异 ，这 种差异可能是由于不同牧草蛋白质含量不同所造 成的 。其中 ，牧草以紫花苜蓿体外 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度最 高 ，且显著高于其他牧草 ，这可能是由于紫花苜蓿 为豆科植物 ，其他牧草为禾本科植物造成的 。已 有报道指出豆科植物的蛋白质含量大于禾本科植 物的蛋白质含量 ［６］，由此可知 ，豆科的紫花苜蓿的 蛋白质含量高于禾本科的其他牧草 ，因此体外发 酵 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度高于其他牧草 。 ３．５ 不同牧草对体外发酵 ＶＦＡ 产量的影响 ＶＦＡ 主要是由瘤胃微生物对饲料营养物质进 行厌氧发酵而得到的终产物 ［４５］，是反刍动物赖以 生存 、保持正常生长 、泌乳和繁殖的主要能源 ，可 提供反刍动物总能量需要的 ７０％～８０％，因而在反 刍动物碳水化合物营养中占有重要地位 ［４６］。 ＶＦＡ 的种类主要有乙酸 、丙酸 、丁酸 、戊酸 、异丁酸 、异 戊酸等 ，而对动物代谢最为重要的是乙酸 、丙酸 、丁酸 ，三者约占瘤胃 ＶＦＡ 总量的 ９５％，其中又以 乙酸是产量最大的 ＶＦＡ ，喂粗料饲粮时占 ＶＦＡ 总 产量的 ７０％～７５％［４７］。 在本试验中 ，不同牧草体外 ＶＦＡ 产量及其组 成均存在明显差异 ，牧草中苇状羊茅体外乙酸 、丙 酸 、丁酸以及总 ＶＦＡ 的产量均显著高于其他牧 草 ，但乙酸 ／丙酸却相对较低 ；芦苇体外总 ＶＦＡ 含 量相对较低 ，但其乙酸 ／丙酸相对较高 ，这种差异 可能是由不同牧草所含可发酵有机物以及 ＮＤＦ 含 量不同所引起的 。郭冬生等 ［４７］研究报道 ，ＶＦＡ 的 生成量主要取决于可发酵有机物 ，李旺 ［４８］研究报 道 ，饲料中矿物元素也会影响到 ＶＦＡ 的产量 ，同 时指出 ＶＦＡ 的组成受饲料中 ＮＤＦ 和非 ＮＤＦ 的影 响较大 。此外 ，不同来源植物细胞壁体外发酵 ＶＦＡ 产量也存在显著差异 ；张元庆等 ［４９］研究报道 ６种不同来源植物细胞壁发酵产生总 ＶＦＡ 含量及 其除丁酸含量外的其他 ＶＦＡ 组分均存在显著性 差异 。 ４ 结 论 ①体外发酵 ４８ ｈ 后 ，苇状羊茅体外产气量 、Ｖｆ 、ＦＲＤ０、 ＩＶＤＭＤ 及 ＣＨ４、乙酸 、丙酸 、丁酸 、总 ＶＦＡ 产量均显著高于其他 ４种牧草 。 ②体外发酵 ４８ ｈ 后 ，苇状羊茅体外发酵 ｐＨ 及乙酸 ／丙酸显著低于其他试验牧草 ，紫花苜蓿体 外 ＮＨ３⁃Ｎ 浓度最高 ，为 １８．６４ ｍｇ／ｄＬ ，显著高于其 他试验牧草 。 ③综合不同牧草体外产气参数 、体外发酵指 标和降解率发现 ，以苇状羊茅体外发酵效果最佳 ，与其他试验牧草相比 ，更容易被瘤胃微生物降解 利用 。 致谢 ： 感谢南京农业大学草业学院邵涛教授为本试验提供牧 草试验材料 。 参考文献 ： ［ １］ 呼天明 ，边巴卓玛 ，曹中华 ，等 ．施行草地农业推进西 藏畜牧业的可持续发展 ［ Ｊ ］ ．家畜生态学报 ，２００５， ２６（１）：７８－８０． ［ ２］ 边巴卓玛 ，呼天明 ，吴红新 ．依靠西藏野生牧草种质 资源提高天然草场的植被恢复效率 ［ Ｊ ］ ．草业科学 ，２００６，２３（２）：６－８． ［ ３］ 姜文清 ，周志宇 ，秦彧 ，等 ．西藏牧草和作物秸秆热值 研究 ［ Ｊ ］ ．草业科学 ，２０１０，２７（０７）：１４７－１５３． ［ ４］ 赵禹臣 ，孟庆翔 ，参木有 ，等 ．西藏高寒草地冷暖季牧 草的营养价值和养分提供量分析 ［ Ｊ ］ ．动物营养学 报 ，２０１２，２４（１２）：２５１５－２５２２． 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法测定饲料中多 种微量元素的方法研究 ［ Ｊ ］ ．畜牧与饲料科学 ，２０１０，３１（４）：１０９－１１２． ［１６］ 刘玉杰 ，李向林 ，何峰 ．基于饲养标准的家畜单位折 算方法 ［ Ｊ ］ ．草地学报 ，２００９，１７（４）：５００－５０４． ［１７］ ＭＥＮＫＥ Ｋ Ｈ ，ＳＴＥＩＮＧＡＳＳ Ｈ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｅｒ⁃ｇｅｔｉｃｆｅｅｄ ｖａｌｕｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｒｕｍｅｎ ｆｌｕｉｄ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ，１９８８，２８（７）：５５． ［１８］ 王祚 ，周传社 ，汤少勋 ，等 ．两种酵母对奶牛瘤胃体外 发酵特性的影响 ［ Ｊ ］ ．农业现代化研究 ，２０１４，３５（２）：２１８－２２４． ［１９］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＴＡＮＧ Ｓ Ｘ ，ＴＡＮ Ｚ Ｌ．Ｍｏｄｅｌｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ： ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｇｉｓｔｉｃ⁃ｅｘｐｏ⁃ｎｅｎｔｉａｌ （ＬＥ ） ｅｑｕａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｏｄｅｌｓ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２０１１，１６５：１３７－１５０． ［２０］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＪＡＮＳＳＥＮ Ｐ Ｈ ，ＳＵＮ Ｘ Ｚ ，ｅｔａｌ．Ａ ｍａｔｈｅ⁃ｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｔｏ ｄｅｓｃｒｉｂｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｈ２ ｇａｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ⁃ｇｙ ，２０１３，１８４：１－１６． ［２１］ ＬＩ Ｘ Ｚ ，ＬＯＮＧ Ｒ Ｊ ，ＹＡＮ Ｃ Ｇ ，ｅｔ ａｌ．Ｒｕｍｅｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃ⁃ｔｉｏｎ ｏｆ ＣＬＡ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ ｔｏ ｌｉｎｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｌａｔｅ ｏｒ ｆｕｍａｒａｔｅ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２０１０，１５５（２／３／４）：１３２－１３９． ［２２］ 冯宗慈 ，高民 ．通过比色测定瘤胃液氨氮含量方法的 改进 ［ Ｊ ］ ．畜牧与饲料科学 ，２０１０，３１（６／７）：３７． ［２３］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＳＵＮ Ｘ Ｚ ，ＪＡＮＳＳＥＮ Ｐ Ｈ ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｒａ⁃ｔｅｄ ｂｙ ｅｉｇｈｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｕｍｉｎａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２０１４，１９４：１－１１． ［２４］ 汤少勋 ，姜海林 ，周传社 ，等 ．不同牧草品种对体外发 酵产气特性的影响 ［ Ｊ ］ ．草业学报 ．２００５，１４（３）：７２－７７． ［２５］ ＣＯＮＥ Ｊ Ｗ ，ＧＥＬＤＥ ＶＡＮ Ａ Ｈ． Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，１９９９，７６：２５１－２６４． ［２６］ 刘书杰 ．利用体外产气法评定青海高原天然牧草营 养价值的研究 ［Ｄ ］ ．硕士学位论文 ．西宁 ：青海大学 ，２００７：１３． ［２７］ ＭＥＴＺＬＥＲ⁃ＺＥＢＥＬＩ Ｂ Ｕ ，ＳＣＨＥＲＲ Ｃ ，ＳＡＬＬＡＫＵ Ｅ ，ｅｔａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｍｉｘｅｄ ｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄａｉｒｙ ｃａｔｔｌｅ ｕｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｕｍｅｎ ｉｎｏｃｕｌａ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ，２０１２，９２（１２）：２４７９－２４８５． ［２８］ 高巍 ，王新峰 ，潘晓亮 ，等 ．玉米秸青贮与黄贮及苜蓿 干草的体外发酵动态消化研究 ［ Ｊ ］ ．石河子大学学 报 ：自然科学版 ，２００２，６（３）：２２２－２２５． ［２９］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＳＵＮ Ｘ Ｚ ，ＴＡＮＧ Ｓ Ｘ ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｒｉｖｉｎｇ ｆｒａｃ⁃ｔｉｏｎａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｇｉｓｔｉｃ⁃ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ （ＬＥ ）ｍｏｄｅｌ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｅａｒｌｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉ⁃ｍａｌ ，２０１３，７（６）：１－１０． ［３０］ ＭＵＣＫ Ｒ Ｅ ， ＦＩＬＹＡ Ｉ ， ＣＯＮＴＲＥＲＡＳ⁃ＧＯＶＥＡ Ｆ Ｅ． Ｉｎｏｃｕｌａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｌｆａｌｆａ ｓｉｌａｇｅ ： ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ⁃ｅｎｃｅ ，２００７，９０（１１）：５１１５－５１２５． ［３１］ 郭嫣秋 ，胡伟莲 ，刘建新 ．瘤胃甲烷菌及甲烷生成的 调控 ［ Ｊ ］ ．微生物学报 ，２００５，４５（１）：１４５－１４８． ［３２］ ＪＯＨＮＳＯＮ Ｋ Ａ ，ＪＯＨＮＳＯＮ Ｄ Ｅ．Ｍｅｔｈａｎｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｃａｔｔｌｅ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，１９９５，７３：２４８３－２４９２． ［３３］ 郭雪峰 ，金海 ，卢德勋 ，等 ．甲烷气体产生量与牧草营 养参数的相关性分析 ［ Ｊ ］ ．江西农业大学学报 ，２００９，３１（１）：３５－４０． ［３４］ 刘树军 ，李向林 ，何峰 ，等 ．奶牛常用饲草的体外发酵 ＣＨ４产量研究 ［ Ｊ ］ ．草地学报 ，２０１１，１９（５）：８５８－８６４． ［３５］ ＭＯＳＳ Ａ Ｒ ，ＧＩＶＥＮＳ Ｄ Ｉ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｌｋａｌｉ ｔｒｅａｔ⁃ｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｒｅａｌ ｓｔｒａｗｓ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｓｈｅｅｐ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，１９９４，４９：２４５－２５９． ［３６］ ＨＯＬＴＥＲ Ｊ Ｂ ，ＹＯＵＮＧ Ａ Ｊ．Ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｉｎ ｄｒｙ ａｎｄ ｌａｃｔａｔｉｎｇ Ｈｏｌｓｔｅｉｎ ｃｏｗｓ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ⁃ｅｎｃｅ ，１９９２，７５（８）：２１６５－２１７５． ［３７］ ＭＩＬＬＥＲ Ｔ Ｌ ，ＷＯＬＩＮ Ｍ Ｊ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｅ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ ｔｈｅ ｒｕｍｉｎａｎｔ ｆｏｒｅｓｔｏｍ⁃ａｃｈ ｂｙ ｈｙｄｒｏｘｙｌｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ⁃ＳｃｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉ⁃ｔｏｒｓ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２００１，８４：１４４５－１４４８． ［３８］ ＦＥＲＮＡＮＤＯ Ｗ Ｍ ，ＦＬＩＮＴ Ｓ ，ＢＲＥＮＮＡＮ Ｃ Ｓ ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｔｏ ｒｉｃｅ ｆｉｂｒｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ［ Ｊ ］ ．Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ⁃ｇｙ ，２０１２，２８（６）：２２９３－２３０２． ［３９］ 徐俊 ，侯玉洁 ，赵国琦 ，等 ．瘤胃微生物对苜蓿茎降解 特性及超微结构的影响 ［ Ｊ ］ ．动物营养学报 ，２０１４，２６（３） ：７７６－７８２． ［４０］ ＭＡＲＩＥ Ｋ Ｋ ，ＯＥＴＺＥＬ Ｇ Ｒ． Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｅ⁃ｖｅｎｔｉｎｇ ｓｕｂａｃｕｔｅ ｒｕｍｉｎａｌ ａｃｉｄｏｓｉｓ ｉｎ ｄａｉｒｙ ｈｅｒｄｓ ： ａ ｒｅ⁃ｖｉｅｗ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２００６，１２６（３）：２１５－２５５． ［４１］ ＶＡＮ ＨＯＵＴＥＲＴ Ｍ Ｆ Ｊ．Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏ⁃ｌｉｓｍ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｂｙ ｒｕｍｉｎａｎｔｓ ｆｅｄ ｒｏｕｇｈａ⁃ｇｅｓ ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ⁃ｇｙ ，１９９３，４３（３）：１８９－２５５． ［４２］ ＸＵ Ｓ ，ＨＡＲＲＳＩＯＮ Ｊ Ｈ ， ＣＨＡＬＵＰＡ Ｗ ， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｕｍｉｎａｌ ｂｙｐａｓｓ ｌｙｓｉｎｅ ａｎｄ ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｏｎ ｍｉｌｋ ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｃｔａｔｉｎｇ ｃｏｗｓ ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，１９９８，８１（４）：１０６２－１０７７． ［４３］ ＦＩＲＫＩＮＳ Ｊ Ｌ ，ＹＵ Ｚ ， ＭＯＲＲＩＳＯＮ Ｍ Ｒ．Ｒｕｍｉｎａｌ ｎｉ⁃ｔｒｏｇｅｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ： ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉ⁃ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄａｉｒｙ ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２００７，９０（１）：１－６． ［４４］ ＳＵＷＡＮＬＥＥ Ｓ ， ＷＡＮＡＰＡＴ Ｍ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｕｍｉｎａｌ ＮＨ３ ⁃Ｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｒｕｍｉｎａｌ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ， ｐｕｒｉｎｅ ｄｅｒｉｖａ⁃ｔｉｖｅｓ ， ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｉｃｅ ｓｔｒａｗ ｉｎｔａｋｅ ｉｎ Ｓｗａｍｐ Ｂｕｆｆａｌｏｅｓ ［ Ｊ ］ ． Ａｓｉａｎ⁃Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，１９９９，１２（６）：９０４－９０７． ［４５］ ＢＥＲＧＭＡＮ Ｅ Ｎ． Ｉｎｔｅｒｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｈｅｅｐ ｒｕｍｅｎ ［ Ｊ ］ ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ⁃ｔｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ，１９６５，９７：５３－５８． ［４６］ 王中华 ．反刍动物挥发性脂肪酸中间代谢 ［ Ｊ ］ ．草食 家畜 ，１９９５，２：２３－３３ ［４７］ 郭冬生 ，彭小兰 ．反刍动物挥发性脂肪酸消化代谢规 律刍议 ［ Ｊ ］ ．畜牧与饲料科学 ，２００５，１：１－３． ［４８］ 李旺 ．瘤胃挥发性脂肪酸的作用及影响因素 ［ Ｊ ］ ．中 国畜牧杂志 ，２０１２，４８（７）：６３－６６． ［４９］ 张元庆 ，魏吉安 ，孟庆翔 ．不同植物细胞壁的体外发 酵特征及其对甲烷产生的贡献 ［ Ｊ ］ ．畜牧兽医学报 ，２００６，３７（１０），９９２－９９８． Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐａｓｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｔｉｂｅｔ ＬＩ Ｂｉｎ１ ＣＨＥＮ Ｌｉａｎｇ２∗ ＢＡＳＡＮＧ Ｚｈｕｚａ１ ＡＯ Ｓｉｍａｎ１ ＺＨＯＵ Ｃｈｕａｎｓｈｅ２，３∗∗ （１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｔｉｂｅｔ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ， Ｌａｓａ ８５００００， Ｃｈｉｎａ ； ２． Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｇｒｏ⁃Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎ Ｓｕｂｓｔｒｏｐｉｃａｌ Ｒｅｇｉｏｎ ， Ｈｕｎａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ ＆Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ， Ｓｏｕｔｈ⁃Ｃｅｎｔｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｉｎ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｕｂｓｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ， Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２５， Ｃｈｉｎａ ； ３． Ｈｕｎａｎ Ｃｏ⁃Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓａｆｅｔｙ ， Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１０１２８， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｔｈｅ ａｒｔｉｃｌｅａｉｍｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｔｉｂｅｔ ｕｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏ⁃ｄｕｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｆｉｖｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｐａｓｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｔｉｂｅｔ ， ｔｈｅ ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ４８ｈ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ （Ｖ ）， ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｍａｘｉｍｕｍ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ （Ｖ ）， ｔｈｅ ｉｎｉｔｉａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｆ （ＦＲＤ ），ｔｈｅ ｅｌａｐｓｅｄ ｔｉｍｅ ｕｎｔｉｌ ｈａｌｆ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ （ ｔ ），ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｄｉｓａｐｐｅａｒａｎｃｅ００．５（ ＩＶＤＭＤ ），ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｎｅｕｔｒａｌ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｆｉｂｅｒ ｄｉｓａｐｐｅａｒａｎｃｅ （ ＩＶＮＤＦＤ ）， ｐＨ ， ａｍｍｏｎｉａｃａｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ （ＮＨ⁃Ｎ ）３ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ （ＶＦＡ ） ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｇａｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｂｙ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｆｔｅｒ ４８ ｈ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ， ｔｈｅ Ｖ ， Ｖ ，ｆ ＦＲＤ ，ｔ ， ＩＶＤＭＤ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ （ＣＨ ）， ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ， ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ ， ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ＶＦＡ ｐｒｏｄｕｃ⁃００．５４ｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｌｌ ｆｅｓｃｕｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐａｓｔｕｒｅｓ （Ｐ ＜０．０５）， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐＨ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｔｏ ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐａｓｔｕｒｅｓ （Ｐ ＜０．０５） ． Ｔｈｅ ＮＨ⁃Ｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉ⁃３ｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐａｓｔｕｒｅｓ （Ｐ ＜０．０５） ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｈａｔｔａｌｌｆｅｓｃｕｅ ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｍｏｒｅ ｅａｓｉｌｙ ｔｏ ｂｅ ｕｔｉｌｉｚｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｕｍｅｎ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｐａｓｔｕｒｅｓ．［Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ， ２０１６， ２８（６）：１８０４⁃１８１３］ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ： Ｔｉｂｅｔ ； ｐａｓｔｕｒｅ ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ∗Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄ ｅｑｕａｌｌｙ