玉米粉和喷浆玉米皮饲粮及山羊排泄物中蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的检测

喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质采食和消化、瘤胃发酵、甲烷排放和瘤胃微生物数量的影响动物营养学报２０２２，３４（９）：６００３⁃６０１１Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０２２．０９．０５３ 动 物 营 养 学 报４００６３４卷 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质采食和 消化 、瘤胃发酵 、甲烷排放和瘤胃 微生物数量的影响 郑雪玥 １，２ 文江南 １ 张秀敏 １ 马志远 １ 邓近平 ２ 王 敏 １∗ （１．中国科学院亚热带农业生态研究所 ，长沙 ４１０１２５；２．华南农业大学 ，广州 ５１０６４２） 摘 要 ：本试验旨在研究喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质采食和消化 、瘤胃发酵 、甲烷 排放和瘤胃微生物数量的影响 。采用单因素试验设计 ，选用 ２４只体况良好 、体重相近的湘东黑 山羊 ，随机分为 ２组 ，每组 １２只 。玉米粉组饲喂基础饲粮 ，喷浆玉米皮组饲喂以喷浆玉米皮替 代玉米粉的试验饲粮 。试验期 ４７ ｄ ，预试期 １０ ｄ ，正试期 ３７ ｄ 。结果表明 ：与玉米粉相比 ，喷浆 玉米皮可以显著提高山羊粗蛋白质 、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维采食量和消化率 （Ｐ ＜０．０５）；显著降低山羊甲烷的每天排放量 、采食每千克干物质排放量和采食每千克可消化干物质排放量 （Ｐ ＜０．０５）；显著增加山羊瘤胃 ｐＨ 、溶解态硫化氢和氨态氮浓度以及丙酸比例 （Ｐ ＜０．０５），显著降 低溶解态氢 、溶解态甲烷浓度和乙酸 ／丙酸以及氢的生成效率 （Ｐ ＜０．０５）；显著增加山羊瘤胃真菌 数量 （Ｐ ＜０．０５），显著降低瘤胃嗜淀粉瘤胃球菌数量 （Ｐ ＜０．０５）。由此可见 ，喷浆玉米皮替代玉米 粉可以增加山羊纤维摄入量 ，降低淀粉摄入量 ，有助于瘤胃真菌的增殖 ，抑制瘤胃嗜淀粉瘤胃球 菌的增殖 ，增加瘤胃溶解态硫化氢的产生 ，促进瘤胃发酵模式向丙酸型转变 ，降低山羊甲烷 排放 。 关键词 ：湘东黑山羊 ；喷浆玉米皮 ；瘤胃发酵 ；氢代谢 ；甲烷排放 中图分类号 ：Ｓ８２６ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１００６⁃２６７Ｘ （２０２２）０９⁃６００３⁃０９ 甲烷是畜牧业产生的主要温室气体之一 ，其 中反刍家畜甲烷排放量占家畜甲烷排放总量的 ９５％，是人类活动的最大排放源 ［１］。反刍家畜甲 烷排放也是饲粮能量损失的重要途径之一 ，占饲 粮摄入总能的 ２％～１２％［２］。因此 ，如何减少反刍 家畜胃肠道甲烷排放是当前研究的热点问题 。反 刍家畜瘤胃内的甲烷主要是通过氢营养 、甲基营 养和乙酸异化路径产生 ［３］，其中氢营养路径是甲 烷菌利用氢和二氧化碳合成 ，是甲烷生成的主要 路径 ，约占甲烷总量的 ８２％［４］。因此 ，在饲粮中补 充可以与甲烷菌竞争氢的添加剂 ，可以通过减少 瘤胃内氢参与合成甲烷 ，降低甲烷排放 ［５－７］。 喷浆玉米皮是湿法碾磨玉米籽粒生产淀粉的 重要副产物 ［８］，在生产过程中 ，通常会添加二氧化 硫控制发酵条件 ［９］。因此 ，与玉米粉相比 ，喷浆玉 米皮含有更多的纤维 、蛋白质和硫 。研究表明 ，硫 及其化合物可以作为氢受体与瘤胃甲烷菌竞争 氢 ，从而降低甲烷排放 ［１０］。我们推测 ，利用喷浆玉 米皮替代玉米粉会降低饲粮淀粉含量 ，增加纤维 和硫含量 ，从而改变饲粮性质 ，这可能会影响瘤胃 发酵和甲烷排放 。因此 ，本试验旨在利用喷浆玉 米皮替代玉米粉 ，研究其对山羊营养物质采食和 消化 、瘤胃发酵 、甲烷排放和瘤胃微生物数量的影 响 ，为喷浆玉米皮在山羊饲粮中的应用和减少反 收稿日期 ：２０２２－０３－１０ 基金项目 ：国家自然科学基金 （３１９２２０８０）；湖南省科技计划项目 （２０２２ＮＫ２０２１） 作者简介 ：郑雪玥 （１９９６—），女 ，内蒙古呼和浩特人 ，硕士研究生 ，从事动物营养学研究 。 Ｅ⁃ｍａｉｌ ： ７７４９７７８２３＠ｑｑ．ｃｏｍ ∗通信作者 ：王 敏 ，研究员 ，Ｅ⁃ｍａｉｌ ：ｍｗａｎｇ＠ｉｓａ．ａｃ．ｃｎ 刍家畜胃肠道甲烷排放提供数据支撑 。 １ 材料与方法 １．１ 试验设计和饲养管理 试验选用 ２４只健康的山羊作为试验动物 ，随 机分成 ２组 ，分别饲喂玉米粉饲粮和喷浆玉米皮 饲粮 ，每组 １２只 。喷浆玉米皮饲粮是由喷浆玉米 皮完全替换玉米粉配制而成 ，试验饲粮组成及营 养水平见表 １。所有试验羊均在代谢笼内单独饲 喂 （０８：００和 １８：００），自由饮水 。试验期 ４７ ｄ ，预 试期 １０ ｄ ，正试期 ３７ ｄ ；最后 １９ ｄ 包括 ５ ｄ 饲粮 、粪便和剩料样品的收集 ，１２ ｄ 甲烷排放的测定和 ２ ｄ 瘤胃液的采集 。 Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｉｅｔｓ （ＤＭ ｂａｓｉｓ ） ｇ／ｋｇ 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 喷浆玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ 原料Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ２００．０ 喷浆玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ２００．０ 豆粕 Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ １３０．０ １３０．０ 花生秧 Ｐｅａｎｕｔ ｖｉｎｅ ６００．０ ６００．０ 麦麸 Ｗｈｅａｔ ｂｒａｎ ３０．０ ３０．０ 磷酸二氢钙 ＣａＨ２ＰＯ４ ８．０ ８．０ 玉米油 Ｃｏｒｎ ｏｉｌ ５．０ ５．０ 碳酸钙 ＣａＣＯ３ ２．０ ２．０ 食盐 ＮａＣｌ ５．０ ５．０ 预混料 Ｐｒｅｍｉｘ１） ２０．０ ２０．０ 合计 Ｔｏｔａｌ １ ０００．０ １ ０００．０ 营养水平 Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ２） 干物质 ＤＭ ８８１ ８８４ 粗灰分 Ａｓｈ １４１ １４９ 有机物 ＯＭ ８５９ ８５１ 粗蛋白质 ＣＰ １２２ １４５ 中性洗涤纤维 ＮＤＦ ３９７ ４６１ 酸性洗涤纤维 ＡＤＦ ２４４ ２６４ 硫 Ｓｕｌｆｕｒ １．０３ １．８５ 淀粉 Ｓｔａｒｃｈ １９３．０ ９７．３ 总能 ＧＥ／（ＭＪ／ｋｇ） １４．１ １４．３ １）每千克预混料含有 Ｏｎｅ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｐｒｅｍｉｘ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ：ＶＡ ３３３ ｍｇ ，ＶＤ３ ５ ｍｇ ，ＶＥ ８３８ ｍｇ ，Ｚｎ ９２２ ｍｇ ，Ｓｅ ５６ ｍｇ ，Ｉ ２ ２４７ ｍｇ ，Ｆｅ １ ３７７ ｍｇ ，Ｃｏ ２２７ ｍｇ ，Ｍｎ ２ １９６ ｍｇ ，Ｃｕ ８８９ ｍｇ 。 ２）营养水平为实测值 。 Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｖａｌｕｅｓ． １．２ 样品采集 在试验期的第 ２９～３３天 ，对每只山羊每天饲 粮 、剩料和粪便分别进行收集 ，其中饲粮每天收集 １００ ｇ ，剩料和粪便全部收集并称重 ，然后保存于 －２０ ℃冰柜 。每只山羊每天取 ２份 １％（质量比 ）的粪便样品 ，一份用 １０％（体积比 ）Ｈ２ＳＯ４进行酸 化 ，防止氮的损失 ；另一份不经过任何处理 。所有 上述样品在 ６５ ℃条件下烘干 ４８ ｈ ，然后粉碎 、过 筛 、保存 ，用于后续测定 。 在试验期的第 ４６～４７天采集瘤胃内容物 ，时 间为每天的晨饲前以及晨饲后 ２．５和 ６．０ ｈ 。采用 口腔胃管技术获取瘤胃内容物 １００ ｍＬ 并丢弃 ，以 避免唾液污染 ，然后采集 ２００ ｍＬ 备用 。取 １０ ｍＬ 瘤胃内容物样品用于测定 ｐＨ 和溶解态硫化氢浓 度 ；取 ２份 ３５ ｍＬ 瘤胃内容物样品于 ５０ ｍＬ 注射 器 ，用于测定溶解态氢和溶解态甲烷浓度 ；取 ３份 １０ ｍＬ 瘤胃内容物样品进行液氮速冻 ，然后置于 －８０ ℃冰箱保存 ，用作后续测定微生物数量 ；最后 取 ２份 １０ ｍＬ 瘤胃内容物样品 ，４ ℃、１２ ０００×ｇ 离 心 １０ ｍｉｎ ，取上清 １． ５ ｍＬ ，然后添加偏磷酸 ０．１５ ｍＬ （２５％，质量体积比 ）进行酸化处理 ，－２０ ℃保存 ，用于测定挥发性脂肪酸和氨态氮 浓度 。 １．３ 试验样品分析 参考前期报道的方法 ［１１－１２］，测定剩料 、饲粮和 粪便样品的常规营养成分 ，其中 ，酸化处理的粪便 样品用于测定粗蛋白质含量 ，非酸化处理的粪便 样品用于测定干物质 、粗灰分 、中性洗涤纤维 、酸 性洗涤纤维 、淀粉含量和能量 。在试验期的第 ３４～４５天 ，利用呼吸代谢舱和超便携温室气体分析仪 （ＧＧＡ－３０ｐ ，Ｌｏｓ Ｇａｔｏｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 公司 ，美国 ）测定 山羊甲烷和二氧化碳排放量 ［１３］。利用便携式 ｐＨ 计 （上海奥豪斯仪器有限公司 ）测定瘤胃内容物 ｐＨ 。使用带有微型传感器的硫化氢电极测定瘤胃 溶解态硫化氢浓度 。根据前期报道的方法提取瘤 胃内容物中的溶解态气体 ，然后使用气相色谱仪 （Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｃ．公司 ，美国 ）进行测定 ，并计算出溶解 态氢和溶解态甲烷浓度 ［１４］。瘤胃挥发性脂肪酸组 分的测定流程参考 Ｗａｎｇ 等 ［１５］，并根据挥发性脂 肪酸组成及浓度计算出氢的生成效率 ［１６］。参考 Ｗｅａｔｈｅｒｂｕｒｎ ［１７］报道的方法测定氨态氮浓度 。按 照 Ｍａ 等 ［１８］报道的方法提取微生物 ＤＮＡ ，并采用 琼脂糖凝胶电泳 （０． ８％）和紫外分光光度计 （ＮＤ１０００，ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ， Ｉｎｃ．公司 ，美 国 ）对 ＤＮＡ 进行质量和定量检测 ，然后将 ＤＮＡ 样 品稀释到 １０ ｎｇ／μ Ｌ ，利用前期报道的引物 ，采用实 时荧光定量 ＰＣＲ 技术对选定的微生物种类进行定 量分析 ［１９］。 １．４ 数据计算和分析 试验数据利用 ＳＰＳＳ ２１．０软件的一般线性模 型进行单因素方差分析 ，结果以平均值和均值标 准误 （ＳＥＭ ）表示 ，Ｐ ≤０．０５表示差异显著 ，０．０５＜Ｐ ≤０．１０表示有升高或降低的变化趋势 ，Ｐ ＞０．１０表示差异不显著 。 ２ 结 果 ２．１ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质 采食和消化的影响 由表 ２可知 ，与玉米粉相比 ，喷浆玉米皮可以 显著提高山羊中性洗涤纤维 、酸性洗涤纤维和粗 蛋白质采食量 （Ｐ ＜０．０５），显著降低淀粉采食量 （Ｐ ＜０．０５）。与玉米粉相比 ，喷浆玉米皮可以显著 提高山羊粗蛋白质 、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤 维消化率 （Ｐ ＜０．０５），显著降低干物质 、有机物和淀 粉消化率 （Ｐ ＜０．０５）。 表 ２ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质采食和消化的影响 Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｐｌａｃｉｎｇ ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ｗｉｔｈ ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ｏｎ ｆｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ｇｏａｔｓ 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ 均值标准误 Ｐ值 Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 喷浆玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ＳＥＭ Ｐ⁃ｖａｌｕｅ 采食量 Ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ／（ｇ／ｄ） 干物质 ＤＭ ４８１ ４７９ ３．３ ０．６８ 有机物 ＯＭ ４１３ ４０８ ２．８ ０．２１ 粗蛋白质 ＣＰ ５７．６ ６７．０ ０．４５ ＜０．０１ 淀粉 Ｓｔａｒｃｈ ９１．６ ４５．７ ０．３７ ＜０．０１ 中性洗涤纤维 ＮＤＦ １８２ ２２１ １．５ ＜０．０１ 总能 ＧＥ ６．８０ ６．７６ ０．０４６ ０．５７ 酸性洗涤纤维 ＡＤＦ １１８ １２６ ０．９ ＜０．０１ 消化率 Ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ／（ｇ／ｋｇ） 干物质 ＤＭ ６６１ ６４４ ３．６ ＜０．０１ 有机物 ＯＭ ６７４ ６５２ ３．８ ＜０．０１ 粗蛋白质 ＣＰ ６９９ ７３６ ６．６ ＜０．０１ 中性洗涤纤维 ＮＤＦ ５４４ ５９１ １０．４ ＜０．０１ 淀粉 Ｓｔａｒｃｈ ８５４ ６８８ ２．７ ＜０．０１ 酸性洗涤纤维 ＡＤＦ ４８７ ５４１ １３．８ ０．０１ 物质排放量和采食每千克可消化干物质排放量 （Ｐ ＜０．０５），对二氧化碳的每天排放量 、采食每千克 干物质排放量和采食每千克可消化干物质排放量 无显著影响 （Ｐ ＞０．０５）。 由表 ３可知 ，与玉米粉相比 ，喷浆玉米皮可以 显著降低山羊甲烷的每天排放量 、采食每千克干 表 ３ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊甲烷和二氧化碳排放的影响 Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｐｌａｃｉｎｇ ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ｗｉｔｈ ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ｏｎ ｍｅｔｈａｎｅ ａｎｄ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｇｏａｔｓ 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ 均值标准误 Ｐ值 Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 喷浆玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ＳＥＭ Ｐ⁃ｖａｌｕｅ 甲烷排放 Ｍｅｔｈａｎｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ 每天排放量 Ｄａｉｌｙ ｅｍｉｓｓｉｏｎ／（ｇ／ｄ） １２．８ １０．３ ０．６４ ０．０１ 采食每千克干物质排放量 Ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｆｅｅｄ ２６．６ ２１．６ １．３３ ０．０２ ｉｎｔａｋｅ ／（ｇ／ｋｇ） 采食每千克可消化干物质排放量 Ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ／（ｇ／ｋｇ） ４０．３ ３３．５ ２．０８ ０．０３ 二氧化碳排放 Ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ 每天排放量 Ｄａｉｌｙ ｅｍｉｓｓｉｏｎ／（ｇ／ｄ） 采食每千克干物质排放量 ４１９ ４０９ ３７．６ ０．８５ Ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ８７０ ８５３ ７７．０ ０．８７ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ／（ｇ／ｋｇ） 采食每千克可消化干物质排放量 Ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ ｄｒｙ ｍａｔｔｅｒ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｆｅｅｄ ｉｎｔａｋｅ ／（ｇ／ｋｇ） １ ３１９ １ ３２５ １２０．０ ０．９７ ２．３ 玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃溶解气体和 挥发性脂肪酸浓度的影响 由表 ４可知 ，与玉米粉相比 ，喷浆玉米皮可以 显著增加山羊瘤胃 ｐＨ 、溶解态硫化氢和氨态氮浓 度以及丙酸比例 （Ｐ ＜０．０５），显著降低溶解态氢 、溶 解态甲烷浓度和乙酸 ／丙酸以及氢的生成效率 （Ｐ ＜０．０５）。 表 ４ 玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃溶解气体和挥发性脂肪酸浓度的影响 Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｐｌａｃｉｎｇ ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ｗｉｔｈ ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｇａｓｅｓ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｒｕｍｅｎ ｏｆ ｇｏａｔｓ 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ 均值标准误 Ｐ值 Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ＳＥＭ Ｐ⁃ｖａｌｕｅ ｐＨ ６．３３ ６．４５ ０．０３８ ０．０２ 溶解气体 Ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｇａｓｅｓ 溶解态氢 ｄＨ２ ／（μｍｏｌ／Ｌ） １．３０ ０．８３ ０．０７５ ＜０．０１ 溶解态甲烷 ｄＣＨ４ ／（ｍｍｏｌ／Ｌ） １．６３ １．３３ ０．０５０ ＜０．０１ 溶解态硫化氢 ｄＨ２Ｓ／（ｍｍｏｌ／Ｌ） ８８ １１６ ７．１ ０．０１ 氨态氮 ＮＨ３ ⁃Ｎ ／（ｍｍｏｌ／Ｌ） １２．２ １３．７ ０．４５ ０．０２ 总挥发性脂肪酸 ＴＶＦＡ／（ｍｍｏｌ／Ｌ） ８３．２ ８０．８ ２．７９ ０．５４ 乙酸 ／丙酸 Ａｃｅｔａｔｅ ／ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ ４．００ ３．６１ ０．０６７ ＜０．０１ 挥发性脂肪酸组成 Ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ／％ 乙酸 Ａｃｅｔａｔｅ ６６．６ ６６．４ ０．３２ ０．６６ 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ 均值标准误 Ｐ值 Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ＳＥＭ Ｐ⁃ｖａｌｕｅ 丙酸 Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ １７．０ １８．７ ０．２７ ＜０．０１ 丁酸 Ｂｕｔｙｒａｔｅ １１．５０ ９．４６ ０．２９２ ＜０．０１ 戊酸 Ｖａｌｅｒａｔｅ １．４３ １．６７ ０．０５２ ＜０．０１ 异丁酸 Ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ １．５６ １．７１ ０．０５４ ０．０６ 异戊酸Ｉｓｏｖａｌｅｒａｔｅ １．９０ ２．１２ ０．０７６ ０．０４ 氢的生成效率 Ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ １．３９ １．３３ ０．００９ ＜０．０１ ２．４ 玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃微生物数量的 影响 由表 ５可知 ，与玉米粉相比 ，采食喷浆玉米皮 可以显著增加山羊瘤胃真菌数量 （Ｐ ＜０．０５），显著 降低瘤胃嗜淀粉瘤胃球菌数量 （Ｐ ＜０．０５），瘤胃原 虫数量呈现降低的变化趋势 （Ｐ ＝０．０９），对瘤胃细 菌 、甲烷菌 、普氏菌属 、栖瘤胃普雷沃氏菌 、反刍月 星单胞菌 、白色瘤胃球菌 、黄色瘤胃球菌和产琥珀 酸丝状杆菌数量无显著影响 （Ｐ ＞０．０５）。 表 ５ 玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃微生物数量的影响 Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｐｌａｃｉｎｇ ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ｗｉｔｈ ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ｏｎ ｒｕｍｅｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｇｏａｔｓ ｌｇ （拷贝数 ／ ｍＬ ） 项目 饲粮 Ｄｉｅｔｓ 均值标准误 Ｐ值 Ｉｔｅｍｓ 玉米粉 Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ 玉米皮 Ｃｏｒｎ ｇｌｕｔｅｎ ＳＥＭ Ｐ⁃ｖａｌｕｅ 细菌 Ｂａｃｔｅｒｉａ １２．３ １２．３ ０．０３ ０．７３ 原虫 Ｐｒｏｔｏｚｏａ １０．４ １０．３ ０．０７ ０．０９ 真菌 Ｆｕｎｇｉ ６．５２ ６．９９ ０．１５５ ０．０４ 甲烷菌 Ｍｅｔｈａｎｏｇｅｎｓ ８．６０ ８．６３ ０．０５４ ０．７４ 筛选的功能菌 Ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ 普氏菌属 Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｓｐｐ． １２．０ １２．０ ０．０３ ０．１７ 栖瘤胃普雷沃氏菌 Ｐ． ｒｕｍｉｎｉｃｏｌａ ９．３７ ９．３８ ０．０７０ ０．９３ 反刍月星单胞菌 Ｓ． ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ １０．９ １０．８ ０．０７ ０．１７ 嗜淀粉瘤胃球菌 Ｒ． ａｍｙｌｏｐｈｉｌｕｓ ８．０８ ７．５０ ０．０７４ ＜０．０１ 白色瘤胃球菌 Ｒ． ａｌｂｕｓ ７．９８ ７．８７ ０．１４６ ０．６１ 黄色瘤胃球菌 Ｒ． ｆｌａｖｅｆａｃｉｅｎｓ ８．４４ ８．５１ ０．１３６ ０．７２ 产琥珀酸丝状杆菌 Ｆ． ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ ８．６２ ８．９９ ０．２５８ ０．２１ ３ 讨 论 ３．１ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊营养物质 采食和消化的影响 喷浆玉米皮是玉米籽实加工成玉米淀粉的副 产物 ，往往含有较高含量的粗蛋白质和纤维 ［２０］，利 用喷浆玉米皮替代玉米粉可以提高饲粮粗蛋白 质 、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量 ，但会降低 饲粮淀粉含量 。孙健 ［２１］研究了玉米皮在瘤胃内的 降解特性及发酵参数 ，发现玉米皮在瘤胃中的降 解速率较慢 ，并且饲喂过多的玉米皮会降低营养 物质降解率 。同样 ，舒维成 ［２２］研究表明 ，饲粮干物 质降解率会随着喷浆玉米皮比例的增加而线性降 低 。与纤维相比 ，淀粉是更容易消化的碳水化合 物 ，不仅可以被瘤胃微生物降解 ，还可以被动物自 身的消化酶进行消化 ，而纤维往往只能被微生物 分解 ，纤维中存在的木质素会阻碍纤维素和半纤 维素的降解 ［２３］。因此 ，纤维的降解率往往低于淀 粉 ，这也是本试验中喷浆玉米皮显著降低山羊干 物质和有机物消化率的主要原因 。在本试验中 ，喷浆玉米皮会提高了纤维消化率 ，降低了淀粉消 化率 ，这可能是因为增加纤维摄入量会促进纤维 降解类微生物增殖 ，但不利于淀粉类降解微生物 生长 ［２４］。利用喷浆玉米皮替代玉米粉对大部分的 瘤胃微生物数量没有显著影响 ，这可能与我们的 替代比例较低有关 ，然而却增加了山羊瘤胃真菌 数量 ，减少了嗜淀粉瘤胃球菌数量 ，这可能是导致 纤维和淀粉消化率变化的主要原因 。 ３．２ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃发酵的 影响 高淀粉饲粮往往有助于产生更高浓度的挥发 性脂肪酸 ［２４］，然而 ，本试验发现山羊采食喷浆玉米 皮并没有显著降低总挥发性脂肪酸浓度 ，这可能 是因为瘤胃内环境处于比较稳定的状态 ，当挥发 性脂肪酸生成较少时 ，瘤胃上皮对挥发性脂肪酸 的吸收也会减少 ，从而导致 ２组之间没有显著差 异 。碳水化合物在瘤胃发酵产生挥发性脂肪酸的 过程中 ，往往伴随着氢的产生 ，产生的氢会被瘤胃 内甲烷菌利用生成甲烷 ，从而维持瘤胃内氢分压 处于较低水平 ，这有利于碳水化合物的降解 ［２５］。碳水化合物类型会明显影响瘤胃内溶解态氢的浓 度 ［２６］，与淀粉相比 ，纤维的降解和发酵速率较低 ，这会导致瘤胃氢浓度处于较低水平 ［２４］。除此之 外 ，瘤胃内溶解态氢浓度还会受到多种因素影响 ，如瘤胃内饲料降解程度 、瘤胃发酵模式 、瘤胃内氢 的生成效率 、甲烷菌对氢的利用程度等 ［２７］。与淀 粉相比 ，纤维发酵有利于乙酸生成 ，虽然乙酸生成 过程中会产生氢 ，但是纤维发酵效率远远低于淀 粉 ［２８］。在本试验结果中 ，饲喂喷浆玉米皮饲粮的 山羊瘤胃溶解态氢浓度显著降低 ，这可能是由于 淀粉摄入量降低所致 ，但是丙酸比例却显著升高 ，说明喷浆玉米皮改变了瘤胃发酵模式 ，这可能与 喷浆玉米皮的加工处理有关 。有研究表明 ，瘤胃 厌氧真菌也存在氢化酶体 ，可以产生大量的氢 ［２９］。而本试验结果中 ，饲喂喷浆玉米皮饲粮的山羊瘤 胃真菌数量和溶解氢浓度并不一致 ，这可能是与 更多的氢参与代谢产物合成有关 。此外 ，饲喂喷 浆玉米皮饲粮的山羊瘤胃氨态氮浓度显著增加 ，这可能是因为山羊摄入的蛋白质被消化降解后 ，会代谢产生氨态氮 ［２７］，从而导致瘤胃内氨态氮浓 度显著升高 。产生的氨态氮在微生物蛋白合成过 程中也会涉及氢的生成与消耗过程 ，当微生物利 用氨基酸生长会产生氢 ，而微生物利用氨态氮生 长会利用氢 ［３０］。除此之外 ，蛋白质在瘤胃降解过 程中也会产生异丁酸 、戊酸和异戊酸 ，这也与本试 验结果相一致 。 ３．３ 喷浆玉米皮替代玉米粉对山羊瘤胃甲烷 生成的影响 瘤胃内产生的氢主要是用于甲烷生成 ，饲喂 喷浆玉米皮饲粮的山羊瘤胃内溶解态甲烷浓度显 著降低 ，这与瘤胃内溶解态氢浓度的降低相一致 。以往研究也报道了瘤胃内溶解态氢浓度与溶解态 甲烷浓度呈正相关 ［２４］。胃肠道甲烷排放受多种因 素影响 ，如瘤胃内溶解态甲烷的饱和系数 、瘤胃发 酵途径和瘤胃内食糜的流通速率 ［２７］。与乙酸生成 相比 ，丙酸生成过程中会牵涉到氢的消耗 ，因此会 与甲烷菌竞争氢 ［３１］。有研究报道 ，淀粉摄入量的 增加会导致甲烷排放的减少 ，这可能是由于瘤胃 发酵模式由乙酸型向丙酸型转变 ，以及瘤胃食糜 滞留时间的缩短造成 ［３２－３３］。但是 ，在本试验结果 中 ，饲喂喷浆玉米皮饲粮的山羊瘤胃丙酸比例升 高 ，这也与甲烷排放降低相一致 。 硫在瘤胃还原过程中可以作为氢池 ，根据热 力学动力平衡 ，硫在硫酸盐还原菌的作用下被还 原成硫化氢的过程比甲烷生成更有利 ［１０， ３４］。与玉 米粉相比 ，喷浆玉米皮含有更多的硫 ，因此 ，喷浆 玉米皮替代玉米粉会额外增加饲粮中的硫含量 。Ｖａｎ Ｚｉｊｄｅｒｖｅｌｄ 等 ［３５］报道 ，硫酸盐可使绵羊的甲烷 排放量减少 １６％。也有研究结果表明 ，玉米酒糟 中同样含有丰富的硫 ［３６］，当饲粮中适当补充玉米 酒糟时 ，育肥牛甲烷排放降低 １９．５％［３７］。在本研 究中 ，饲喂喷浆玉米皮饲粮的山羊甲烷每日排放 量减少了 １９．５％，这与其他研究结果相一致 。虽 然饲粮中的硫可以有效地减少甲烷排放 ，但是根 据 ＮＲＣ （２００１）［３８］推荐 ，饲粮中硫含量高于 ４．０ ｇ／ｋｇ 会增加脑脊髓灰质软化的风险 ，这是由于 瘤胃内高浓度的硫化氢会通过瘤胃上皮被吸收 。在本研究中 ，喷浆玉米皮饲粮中硫含量远远低于 安全剂量 ，虽然饲粮中硫含量的升高使瘤胃液中 溶解态硫化氢浓度显著升高 ，但在我们的饲养过 程中未观察到山羊代谢紊乱的临床现象 。 ４ 结 论 ①喷浆玉米皮替代玉米粉可以促进瘤胃真菌 的增殖 ，这有助于提高饲粮纤维降解率 ；但会抑制 嗜淀粉瘤胃球菌增殖 ，这不利于提高饲粮淀粉降 解率 。 ②喷浆玉米皮替代玉米粉后 ，饲粮中硫含量 的增加有助于瘤胃内的氢参与硫化氢合成以及瘤 胃发酵模式向丙酸型转变 ，这会降低山羊甲烷 排放 。 参考文献 ： ［ １］ ＺＨＡＯ Ｙ Ｃ ，ＺＨＡＯ Ｇ Ｙ．Ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｒｕｍｉｎａｌ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｓｕｌｆａｔｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ，２０２２，９：３２０－３２６． ［ ２］ ＪＯＨＮＳＯＮ Ｋ Ａ ，ＪＯＨＮＳＯＮ Ｄ Ｅ．Ｍｅｔｈａｎｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｃａｔｔｌｅ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，１９９５，７３（８）：２４８３－２４９２． ［ ３］ ＳＵＮ Ｋ ，ＬＩＵ Ｈ Ｈ ，ＦＡＮ Ｈ Ｙ ，ｅｔａｌ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ ｉｎ ｒｕｍｉｎａｌ ｍｅｔｈａｎｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ： ａ ｒｅｖｉｅｗ ［ Ｊ ］ ． ＰｅｅｒＪ ， ２０２１， ９：ｅ１１１５１． ［ ４］ 金舒文 ，王佳堃 ．瘤胃产甲烷菌与其他微生物间的氢 传递及其调控研究进展 ［ Ｊ ］ ．中国畜牧杂志 ，２０１９，５５（２）：１－６． ＪＩＮ Ｓ Ｗ ，ＷＡＮＧ Ｊ Ｋ． Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｅｔｈａｎｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｉｎ ｒｕ⁃ｍｅｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ［ Ｊ ］ ．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２０１９，５５（２）：１－６．（ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ） ［ ５］ ＢＥＡＵＣＨＥＭＩＮ Ｋ Ａ ，ＵＮＧＥＲＦＥＬＤ Ｅ Ｍ ，ＥＣＫＡＲＤ Ｒ Ｊ ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｖｉｅｗ ： ｆｉｆｔｙ ｙｅａｒｓ ｏｆ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｒｕｍｅｎ ｍｅｔｈａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ：ｌｅｓｓｏｎｓ ｌｅａｒｎｅｄ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｆｏｒ ｍｉｔｉｇａｔｉｏｎ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ ，２０２０，１４（Ｓｕｐｐｌ．１）： ｓ２－ｓ１６． ［ ６］ ＷＡＮＧ Ｒ ，ＷＡＮＧ Ｍ ，ＵＮＧＥＲＦＥＬＤ Ｅ Ｍ ， ｅｔ ａｌ．Ｎｉ⁃ｔｒａｔｅｉｍｐｒｏｖｅｓ ａｍｍｏｎｉａ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ ｒｕｍｅｎ ｍｉ⁃ｃｒｏｂｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｌａｃｔａｔｉｎｇ ｄａｉｒｙ ｃｏｗｓ ｆｅｄ ａ ｌｏｗ⁃ｐｒｏ⁃ｔｅｉｎ ｄｉｅｔ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２０１８，１０１（１１）：９７８９－９７９９． ［ ７］ ＨＡＳＳＡＮＡＴ Ｆ ，ＢＥＮＣＨＡＡＲ Ｃ．Ｃｏｒｎ ｓｉｌａｇｅ⁃ｂａｓｅｄ ｄｉ⁃ｅｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ｌｉｎｓｅｅｄ ｏｉｌ ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ， ｒｕｍｅｎ ｆｅｒｍｅｎｔａ⁃ｔｉｏｎ ，ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ ，ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ，ａｎｄ ｍｉｌｋ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄａｉｒｙ ｃｏｗｓ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ⁃ｅｎｃｅ ，２０２１，１０４（５）：５３７５－５３９０． ［ ８］ 王红玉 ．蛋鸡玉米加工副产物营养价值的评定 ［Ｄ ］ ．硕士学位论文 ．雅安 ：四川农业大学 ，２０１６． ＷＡＮＧ Ｈ Ｙ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｔｒｉｔｉｖｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｒｎ ｃｏｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ ｌａｙｉｎｇ ｈｅｎｓ ［Ｄ ］ ．Ｍａｓｔｅｒ ’ ｓ Ｔｈｅｓｉｓ．Ｙａ ’ａｎ ：Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ，２０１６． （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃ｎｅｓｅ ） ［ ９］ ＫＥＲＲ Ｂ Ｊ ，ＺＩＥＭＥＲ Ｃ Ｊ ，ＷＥＢＥＲ Ｔ Ｅ ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐａｒ⁃ａｔｉｖｅ ｓｕｌｆｕｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅｒｍａｌ ｃｏｍｂｕｓｔｉｏｎ ｏｒ ｉｎ⁃ ｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｉｎｅｒａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓ ［ Ｊ ］ ． Ｊｏｕｒ⁃ｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２００８，８６（９）：２３７７－２３８４． ［１０］ ＬＡＮ Ｗ ，ＹＡＮＧ Ｃ Ｌ．Ｒｕｍｉｎａｌ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ：ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ａｐｐｌｙ⁃ｉｎｇ ｈｙｄｒｏｇｅｎ⁃ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｆｏｒ ｍｉｔｉｇａｔｉｏｎ ［ Ｊ ］ ．Ｓｃｉ⁃ｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｏｔａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ，２０１９，６５４：１２７０ －１２８３． ［１１］ 张丽英 ．饲料分析及饲料质量检测技术 ［Ｍ ］ ．３版 ．北 京 ：中国农业大学出版社 ，２００７．ＺＨＡＮＧ Ｌ Ｙ．Ｆｅｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ［Ｍ ］ ．３ｒｄ ｅｄ．Ｂｅｉｊｉｎｇ ：Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕ⁃ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ ，２００７．（ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ） ［１２］ ＫＡＲＴＨＮＥＲ Ｒ Ｊ ，ＴＨＥＵＲＥＲ Ｂ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｈｙ⁃ｄｒｏｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｆｅｅｄ ，ｄｉｇｅｓｔａ ，ａｎｄ ｆｅｃａｌ ｓｔａｒｃｈ ａｎａｌｙｓｉｓ ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓ⁃ｔｒｙ ，１９８１，２９（１）：８－１１． ［１３］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＷＡＮＧ Ｒ ，ＬＩＵ Ｍ ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｅｔａｒｙ ｓｔａｒｃｈ ａｎｄ ｒｈｕｂａｒｂ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｒｕｍｉｎａｌ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｈｙｄｒｏ⁃ｇｅｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｌｔｅｒｉｎｇ ｒｕｍｅｎ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｉｎ ｇｏａｔｓ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ ，２０１９，１３（５）：９７５－９８２． ［１４］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＳＵＮ Ｘ Ｚ ，ＪＡＮＳＳＥＮ Ｐ Ｈ ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｒａ⁃ｔｅｄ ｂｙ ｅｉｇｈｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｕｍｉｎａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２０１４，１９４：１－１１． ［１５］ ＷＡＮＧ Ｒ ，ＳＩ Ｈ Ｂ ，ＷＡＮＧ Ｍ ， ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｌｅ⁃ｍｅｎｔａｌ ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ａｎｄ ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｏｘｉｄｅ ｏｎ ｈｙｄｒｏ⁃ｇｅｎ ， ｍｅｔｈａｎｅ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｕｍｅｎ ｂａｔｃｈ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ［ Ｊ ］ ． Ａｎｉｍａｌ Ｆｅｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ，２０１９，２５２：７４－８２． ［１６］ ＷＡＮＧ Ｍ ，ＷＡＮＧ Ｒ ，ＪＡＮＳＳＥＮ Ｐ Ｈ ，ｅｔａｌ．Ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ａｎｄ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｕｍｅｎ ｏｆ ｄａｉｒｙ ｃｏｗｓ ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ，２０１６，９４（３）：１１５９－１１６９． ［１７］ ＷＥＡＴＨＥＲＢＵＲＮ Ｍ Ｗ．Ｐｈｅｎｏｌ⁃ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｍｏｎｉａ ［ Ｊ ］ ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ⁃ｔｒｙ ，１９６７，３９（８）：９７１－９７４． ［１８］ ＭＡ Ｚ Ｙ ，ＺＨＡＮＧ Ｘ Ｍ ，ＷＡＮＧ Ｒ ， ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｌｙｓｉｓ ｏｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ＤＮＡ ｙｉｅｌｄ ，ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ， ａｎｄ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ａｍｐｌｉｃｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ｒｕｍｅｎ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｐｒｏｔｏｚｏａ ［ Ｊ ］ ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏ⁃ｂｉｏｌｏｇｙ ，２０２０，１１：５８１２２７． ［１９］ ＷＡＮＧ Ｒ ，ＷＡＮＧ Ｍ ，ＬＩＮ Ｂ ，ｅｔａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉ⁃ｂｒｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｕｍｉｎａｌ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｉｎ