动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类检测

前言喹诺酮类和四环素类药物是一类广谱抗生素，其中大多数是人畜共用药物，如四环素、环丙沙星等。磺胺类药物同样是一类抗生素和抗原虫药物，对牲畜的生长及改善饲料转化率方面效果显著，均具有性质稳定、抗菌谱广、疗效强、价廉等优点而被广泛应用。磺胺类、喹诺酮类、四环素类药物在动物体内代谢缓慢，容易产生蓄积和残留，人体过量食用还会产生潜在的“三致”（致癌、致畸、致突变）作用，特别是机体对抗生素的耐药性。本文参考GB 31658.17-2021《动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用液相色谱质谱联用仪进行可食动物肌肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类等药物分析，通过检出限、精密度和准确度等指标评估仪器性能，证明LC-TQ 5200满足可食动物肌肉中兽药残留检测的需要。实验部分样品前处理取畜禽水产样品2 g，于50 mL塑料离心管，加入酸化乙腈（含0.5%甲酸）10 mL，加入无水硫酸钠2 g，涡旋混合5 min，8000 r/min离心5 min，取上清液于10 mL玻璃试管，35℃氮吹近干，加入50%乙腈水2 mL溶解残留物，涡旋10 s，取上清液过0.22 μm有机滤膜，待测。仪器条件表1.  仪器方法参数模块参数值色谱色谱柱Waters ACQUITY UPLC HSS T3（100×2.1mm,1.8μm）柱温35℃流动相A相： 0.1%甲酸水溶液B相：甲醇：乙腈（2：8，含0.1%甲酸）流速0.4 mL/min进样量10 μL洗脱0 min：85%A，15%B；1.00 min：60%A，40%B；5.00-7.00 min：5%A，95%B；7.50-9.00 min：85%A，15%B质谱离子源ESI+检测模式多反应监测（MRM）碰撞气0.07 mL/min气帘气3 L/min雾化气1.2 L/min干燥气12 L/min 喷雾电压5500 V干燥气温度500 ℃结果与讨论      1、标准谱图和物质信息8种目标物总离子流图见图1。加标浓度为50 μg/kg。8种目标物的定性、定量离子对以及具体质谱参数见表2。图1  8种目标物（50 μg/kg）总离子流图表2.  8种目标物的定性、定量离子对和保留时间、碰撞能量条件序号目标物CASRT（min）定量离子对定性离子对真空接口电压碰撞能量碰撞池入口电压碰撞池出口电压1金霉素57-62-52.051479.0/443.4479.0/443.485268530479.0/461.4852160302土霉素79-57-21.751461.0/425.4461.0/425.470249032461.0/443.0402075293多西环素564-25-02.201444.3/427.5444.3/427.545255045444.3/409.3302885304四环素60-54-81.801444.3/409.3444.3/409.330288530444.3/427.5452550455磺胺嘧啶68-35-91.651251.0/156.0251.0/156.080218580251.0/91.7603780606磺胺甲恶唑723-46-62.351254.0/156.0254.0/156.085196085254.0/91.7353255357环丙沙星85721-33-11.651332.0/314.0332.0/314.085258040332.0/230.765461251158培氟沙星70458-92-31.651334.0/316.2334.0/316.2552110025334.0/290.15522951152、标准曲线平行取若干份2 g畜禽水产样品，添加混合标准工作溶液，进行前处理后得到目标物浓度分别为1 μg/kg、2 μg/kg、5 μg/kg、10 μg/kg、25 μg/kg、250 μg/kg、500 μg/kg的添加样品提取液，并进行分析。8种目标物的线性相关系数R2结果见下表3，均大于0.990，满足标准的要求。表3.  8种目标物的标准曲线线性相关系数序号化合物线性相关系数R21金霉素R² = 0.99932土霉素R² = 0.99963多西环素R² = 0.99744四环素R² = 0.99965磺胺嘧啶R² = 0.99956磺胺甲恶唑R² = 0.99937环丙沙星R² = 0.99688培氟沙星R² = 0.99773、动物肌肉加标回收实验3.1 精密度取2 g畜禽水产样品，对8种目标物分别进行三个浓度（10 μg/kg、25 μg/kg、250 μg/kg）加标实验，每个样品测量6次，对精密度进行评估，目标物加标浓度为10 μg/kg、25 μg/kg、250 μg/kg时的相对标准偏差RSD分别为0.69%~9.25%、2.87%~11.93%和2.19%~8.16%。精密度RSD满足标准要求（RSD≤15%）。3.2 准确度对2 g畜禽水产样品（目标物浓度均为10 μg/kg、25 μg/kg、250 μg/kg）的回收率进行评估，结果详见下表4。加标浓度为10 μg/kg、25 μg/kg、250 μg/kg动物肌肉基质的回收率分别为88.2%~101.4%、81.1%~100.4%和82.0%~102.3%，回收率结果满足标准要求（60%~110%）。表4. 8种目标物动物肌肉加标回收率序号化合物加标浓度（μg/kg）10252501金霉素97.9%100.4%92.8%2土霉素89.8%90.6%82.0%3多西环素94.7%97.9%90.6%4四环素101.4%95.1%95.9%5磺胺嘧啶101.2%96.4%93.8%6磺胺甲恶唑100.5%89.6%91.0%7环丙沙星88.2%90.9%102.3%8培氟沙星92.6%81.1%98.4%3.3 检出限比较了采用LC-TQ 5200实测的方法检出限与标准方法检出限。从下表5可知，实测方法检出限范围0.2 μg/kg ~1.1 μg/kg，所有目标物检出限均低于GB 31658.17-2021标准要求。表5. 8种目标物方法检出限与标准限值信息表序号化合物方法检出限（μg/kg）标准方法检出限（μg/kg）1金霉素0.6 22土霉素0.3 23多西环素0.2 24四环素0.9 25磺胺嘧啶0.9 26磺胺甲恶唑0.7 27环丙沙星1.1 28培氟沙星0.7 2结论本文依据GB 31658.17-2021《动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，采用禾信LC-TQ 5200分析了动物肌肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物。实验结果：四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物的线性相关系数R2均大于0.99，符合标准要求；动物肌肉加标精密度RSD在0.69%~11.93%范围，精密度RSD满足标准要求；动物肌肉加标回收率在81.1%~102.3%范围，回收率结果满足标准要求。目标物方法检出限在0.2 μg/kg ~1.1 μg/kg范围内，优于GB 31658.17-2021标准要求的2 μg/kg。上述结果表明禾信LC-TQ 5200具有优异的重现性和检测灵敏度，满足标准要求。参考文献1. GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法禾信质谱 股票代码HEXIN MASS SPECTROMETRY688622 GB 31658.17-2021 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类检测 山 LAN LC-TQ5200 0名 0//// 官方公众号 GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类检测 前言 喹诺酮类和四环素类药物是一类广 谱抗生素，其中大多数是人畜共用药物，如四环素、环丙沙星等。磺胺类药物同样 是一类抗生素和抗原虫药物，对牲畜的生 长及改善饲料转化率方面效果显著，均具 有性质稳定、抗菌谱广、疗效强、价廉等 优点而被广泛应用。磺胺类、喹诺酮类、四环素类药物在动物体内代谢缓慢，容易 产生蓄积和残留，人体过量食用还会产生 潜在的 “三致 ”（致癌、致畸、致突变）作 用，特别是机体对抗生素的耐药性。 本文参考 GB 31658.17-2021《动物性 食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物 残留量的测定液相色谱 -串联质谱法》， 使用液相色谱质谱联用仪进行可食动物 肌肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类等药 物分析，通过检出限、精密度和准确度等 指标评估仪器性能，证明 LC-TQ 5200满 足可食动物肌肉中兽药残留检测的需要。 实验部分 样品前处理 取畜禽水产样品 2 g ，于 50 mL 塑料 离心管，加入酸化乙腈（含 0.5%甲酸）10mL ，加入无水硫酸钠 2 g ，涡旋混合 5 min ，8000 r/min 离心 5 min ，取上清液于 10 mL 玻璃试管，35℃氮吹近干，加入 50%乙腈 水 2 mL 溶解残留物，涡旋 10 s ，取上清 液过 0.22 μm 有机滤膜，待测。 仪器条件 表 1. 仪器方法参数 模块 参数 值 色谱 色谱柱 Waters ACQUITY UPLC HSS T3（100×2.1mm,1.8μm） 柱温 35℃ 流动相 A相：0.1%甲酸水溶液 B相：甲醇：乙腈（2：8，含 0.1%甲酸） 流速 0.4 mL/min 进样量 10 μL 洗脱 0 min：85%A，15%B；1.00 min：60%A，40%B；5.00-7.00 min：5%A，95%B；7.50-9.00 质谱 离子源 EmiSnI+：85%A，15%B 检测模式 多反应监测（MRM） 碰撞气 0.07 mL/min 气帘气 3 L/min 雾化气 1.2 L/min 干燥气 12 L/min 喷雾电压 5500 V 干燥气温度 500℃ 结果与讨论 1、标准谱图和物质信息 8种目标物总离子流图见图 1。加标浓度为 50 μg/kg 。8种目标物的定性、定量离子对以及 具体质谱参数见表 2。 图 1 8种目标物（50 μg/kg ）总离子流图 表 2. 8种目标物的定性、定量离子对和保留时间、碰撞能量条件 真空 碰撞 碰撞 RT （min） 碰撞 能量 池入 口电 池出 口电 序号 目标物 CAS 定量离子对 定性离子对 接口 电压 压 压 1 479.0/443.4 479.0/443.4 85 26 85 30 金霉素 57-62-5 2.051 479.0/461.4 85 21 60 30 2 土霉素 79-57-2 1.751 461.0/425.4 461.0/425.4 461.0/443.0 70 40 24 20 90 75 32 29 3 多西环 564-25-0 2.201 444.3/427.5 444.3/427.5 45 25 50 45 素 444.3/409.3 30 28 85 30 4 1.801 444.3/409.3 444.3/409.3 30 28 85 30 四环素 60-54-8 444.3/427.5 45 25 50 45 5 磺胺嘧 68-35-9 1.651 251.0/156.0 251.0/156.0 80 21 85 80 啶 251.0/91.7 60 37 80 60 6 磺胺甲 723-46-6 2.351 254.0/156.0 254.0/156.0 85 19 60 85 恶唑 254.0/91.7 35 32 55 35 7 环丙沙 85721-33- 1.651 332.0/314.0 332.0/314.0 85 25 80 40 星 1 332.0/230.7 65 46 125 115 8 1.651 334.0/316.2 培氟沙 70458-92- 334.0/316.2 55 21 100 25 星 3 334.0/290.1 55 22 95 115 2、标准曲线 平行取若干份 2 g 畜禽水产样品，添加混合标准工作溶液，进行前处理后得到目标物 浓度分别为 1 μg/kg 、2 μg/kg 、5 μg/kg 、10 μg/kg 、25 μg/kg 、250 μg/kg 、500 μg/kg 的添加 样品提取液，并进行分析。8种目标物的线性相关系数 R2结果见下表 3，均大于 0.990，满足标准的要求。 小 路 TF 表 3. 8种目标物的标准曲线线性相关系数 序号 化合物 线性相关系数R2 1 金霉素 R² = 0.9993 2 土霉素 R² = 0.9996 3 多西环素 R² = 0.9974 4 四环素 R² = 0.9996 5 磺胺嘧啶 R² = 0.9995 6 磺胺甲恶唑 R² = 0.9993 7 环丙沙星 R² = 0.9968 8 培氟沙星 R² = 0.9977 3、动物肌肉加标回收实验 3.1精密度 取 2 g 畜禽水产样品，对 8种目标物分别进行三个浓度（10 μg/kg 、25 μg/kg 、250 μg/kg ）加标实验，每个样品测量 6次，对精密度进行评估，目标物加标浓度为 10 μg/kg 、25 μg/kg 、250 μg/kg 时的相对标准偏差 RSD 分别为 0.69%~9.25%、2.87%~11.93%和 2.19%~8.16%。精密度 RSD 满足标准要求（RSD ≤15%）。 3.2准确度 对 2 g 畜禽水产样品（目标物浓度均为 10 μg/kg 、25 μg/kg 、250 μg/kg ）的回收率进行 评估，结果详见下表 4。加标浓度为 10 μg/kg 、25 μg/kg 、250 μg/kg 动物肌肉基质的回收率 分别为 88.2%~101.4%、81.1%~100.4%和 82.0%~102.3%，回收率结果满足标准要求 （60%~110%）。 表 4. 8种目标物动物肌肉加标回收率 序号 化合物 加标浓度（μg/kg） 10 25 250 1 金霉素 97.9% 100.4% 92.8% 2 土霉素 89.8% 90.6% 82.0% 3 多西环素 94.7% 97.9% 90.6% 4 四环素 101.4% 95.1% 95.9% 5 磺胺嘧啶 101.2% 96.4% 93.8% 6 磺胺甲恶唑 100.5% 89.6% 91.0% 7 环丙沙星 88.2% 90.9% 102.3% 8 培氟沙星 92.6% 81.1% 98.4% 3.3检出限 比较了采用 LC-TQ 5200实测的方法检出限与标准方法检出限。从下表 5可知，实测 方法检出限范围 0.2 μg/kg ~1.1 μg/kg ，所有目标物检出限均低于 GB 31658.17-2021标准要 求。 表 5. 8种目标物方法检出限与标准限值信息表 序号 化合物 方法检出限（μg/kg） 标准方法检出限（μg/kg） 1 金霉素 0.6 2 2 土霉素 0.3 2 3 多西环素 0.2 2 4 四环素 0.9 2 5 磺胺嘧啶 0.9 2 6 磺胺甲恶唑 0.7 2 7 环丙沙星 1.1 2 8 培氟沙星 0.7 2 结论 本文依据 GB 31658.17-2021《动物 性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类 药物残留量的测定液相色谱 -串联质谱 法》，采用禾信 LC-TQ 5200分析了动物 肌肉中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药 物。实验结果：四环素类、磺胺类和喹诺 酮类药物的线性相关系数 R2均大于 0.99，符合标准要求；动物肌肉加标精密 度 RSD 在 0.69%~11.93%范围，精密度 RSD 满足标准要求；动物肌肉加标回收 率在 81.1%~102.3%范围，回收率结果满 足标准要求。目标物方法检出限在 0.2μg/kg~1.1μg/kg 范围内，优于 GB 31658.17-2021标准要求的 2 μg/kg 。上述 结果表明禾信 LC-TQ 5200具有优异的 重现性和检测灵敏度，满足标准要求。 参考文献 1. GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺 胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱 -串联质谱法