LC-MS/MS法检测鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物残留量

本文参照《GB 31656.15-2022 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用岛津LCMS-8045建立了鱼肉中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑的检测方法。该方法灵敏度高，重复性好，准确度高，可满足鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物残留量的检测要求。SSL-CA23-119Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-767 LC-MS/MS 法检测鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物 残留量 LCMSMS-767 摘要：本文建立了使用三重四极杆液质联用法测定鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑 残留量的方法。各目标组分检出限在 0.008~0.05 ng/mL 之间；在0.5 ng/mL~100 ng/mL浓度范围内，内标 法校准曲线相关系数R 在 0.9998~1.0000之间，准确度在94.6~112.3%之间；在高 J 、S 口 中 、低三个浓度下，化 合物的保留时 间 和峰面积的RSD 值分别在0.04%~0.13%和0.63%~3.08%之间；加标浓度为10和100ug/kg的样品，回收率在77.0%~108.5%之间，满足标准70~120%的要求。该方法灵敏度高，重 复 性好，准确 度高，可满足鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物残留量的检 测 要求。 关键词：三 重 四极杆液质联用仪 ：鱼肉 甲苯咪唑 技术特点： ※相较《GB31656.15-2022》，本方法检测甲苯咪唑及其代谢物的灵敏 度 更高。 *进样时使用更小的进样体积，可减少样品基质对仪器的污染。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津三重四极杆液质联用仪，具体配置为： 系统控制器 SCL -40自动进样器 SIL-40C X3输液 泵LC-40B X3质 谱 仪 LCMS -8045柱温 箱：CTO-40S 色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.114 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack Velox SP-C18(100 mm×.2.1mml.D，2.7 um) 岛津(上海)实 验器材有限公司，P/N： 227-32003-03 流 动 相 A 相 -0.1%甲酸水溶液，B相-甲醇 ：柱 温 30℃ 流 速 0.3 mL/min 洗脱方式： 梯度洗脱，初始浓度为B相45%， 进样体积 5uL 时间程序见表1 表 1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 5.00 Pumps Pump B Conc. 65 5.50 Pumps Pump B Conc. 95 6.50 Pumps Pump B Conc. 95 6.60 Pumps Pump B Conc. 45 10.00 Controller Stop 离 子 源： ESI， 正离子模式 DL管温度： 250℃ 接 妾口电压： +4KV 加热模块温度： 400℃雾 干 加 碰 化 气 ：氮气 3.0 L/min 接 口 温 度 度 ： 3 0 0 ℃ 燥 热 撞 气 ：氮气 10 L/min 扫描 莫式 多反应监 测 (MRM)气 气 气：空气 10 L/min MRM 数： 见表2 司： 氩气(230kPa) 表2 MRM 参数 编号 化合物 化学式 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 1 甲苯咪唑 C16H13N303 31431-39-7 296.10 104.95*77.10 -11.0 -34.0 -18.0 -20.0 -49.0 -28.0 2 羟基甲苯咪唑 C16H15N3O3 60254-95-7 298.10 160.00* -11.0 -35.0 -30.0 266.05 -11.0 -23.0 -29.0 3 氨基甲苯咪唑 C14H NO 52329-60-9 238.10 105.05* -17.0 -25.0 -19.0 77.05 -17.0 -36.0 -13.0 4 D3-甲苯咪唑 C16H10D3N：O3 1173021-87-8 299.10 105.00 -11.0 -34.0 -18.0 5 D3-羟基甲苯咪唑 C16H1DNO3 1173020-86-4 301.20 266.05 -11.0 -22.0 -30.0 *表示定量离子 样品前处理 参考《GB 31656.15-2022食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定液相色谱 -串联质 谱法》中“8.1提取”和“8.2净化”部分对鱼肉样品进行处理。 结果与讨论 3.1专属性 空白样品和 0.5 ng/mL标准溶液(含内标D3-甲苯咪唑和 D3-羟基甲苯咪唑，浓 度 分别为 2.5 ng/mL和0.5ng/mL) 的 MRM 色谱图如图1所示，色谱峰分离良好，通道无 干 扰 。 1空白 样品 和 0.5 ng/mL标准溶液 的 MRM 色谱图 3.2灵敏度 0.05 ng/mL 混合标准溶液，日 甲苯咪唑及其代谢物定量离子色谱峰的 S/N 为3~17，定性离子色谱峰 的 S/N 均大于3，，计算可得其检出限为 0.008~0.05 ng/mL， 灵敏度优于标准要求 (0.5 ng/mL)。 图2 0.05 ng/mL 混合标准溶液 MRM色谱图(蓝：定量 离 子，红 ：定性离子) (左：甲苯咪唑，中：羟基甲苯咪唑，右：氨 基 甲苯咪 唑 ) 3.3校准曲线 按照标准要求，配制浓度分别为 0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL 的混合标准溶液(含内标 D3-甲 苯咪唑和 D3-羟基甲苯咪唑，浓度分别为 2.5 ng/mL和0.5ng/mL)，建标曲线，其结果如表3和图3所 示 。 表3材校准曲线信息 化合物 内标 线性方程 相关系数R 准确度(%) 1 甲苯咪唑 D3-甲苯咪唑 Y=0.820X-0.003 1.0000 96.7~108.4 2 羟基甲苯咪唑 D3-羟基甲苯咪唑 Y=0.158X-0.010 0.9999 94.6~110.4 3 氨基甲苯咪唑 D3-羟基甲苯咪唑 Y=0.495X-0.056 0.9998 95.7~112.3 Area Ratio 二甲苯咪唑 30-二 25-二 3 20- 15- 二 10- 5- 02 0 图3校准曲线 3.4重 复 性实验 以 1、10和 100 ng/mL标准溶液，各连续进样6次，考察仪器的重复性，保留时间和峰面积 RSD 值 分别在 0.04~0.13%和0.63~3.08%之间，测定结果见表4。 表4标准溶液 保 留时间和峰面积重复 性 结果(n=6) 编号 化合物 浓度 (ng/mL) 保留时间 RSD(%) 峰面积RSD(%) 1 甲苯咪唑 1 0.05 2.95 10 0.04 0.63 100 0.09 0.88 2 1 0.12 3.08 羟基甲苯咪唑 10 0.06 1.10 100 0.13 1.57 3 氨基甲苯咪唑 1 0.08 1.54 10 0.07 0.78 100 0.11 0.72 3.5回收率 空 白样品分别加标10 ug/kg 和100 ug/kg， 前处理后进样分析，考察方法的回收率，结果在77.0~108.5%之间，具体如表5所示。 表5回收率 编号 化合物 加标浓度 (ug/kg) 检测浓度 (ug/kg) 回收率(%) 1 甲苯咪唑 10 7.7 77.0 100 79.2 79.2 2 羟基甲苯咪唑 10 8.3 83.0 100 92.5 92.5 3 氨基甲苯咪唑 10 10.3 103.0 100 108.5 108.5 结论 本文参照 《GB 31656.15-2022食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质 谱法》，使用岛津LCMS-8045建立了鱼肉中甲苯咪唑及其主要代谢物羟基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑的检测方法。该 方法灵敏度高，重 复性好，准确度高，可满足鱼肉中甲苯咪唑及其代谢物残留量的检测要求 。 岛津应用云