凯氏定氮仪测定乙醇梭菌蛋白的蛋白质含量

一、前言乙醇梭菌蛋白是一种单细胞蛋白，是以含一氧化碳的工业尾气为原料，由乙醇梭菌为发酵菌种生产的一种新型菌体蛋白。人工合成乙醇梭菌蛋白目前主要应用还是在动物饲料上。乙醇梭菌蛋白饲料不但蛋白质含量高，营养丰富，并且氨基酸结构平衡，易于动物消化，同时还具有优异的饲料蛋白质原料加工特性，富含核苷酸等功能性物质，有利于动物肠道与肝脏的健康。本实验参照《GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法》使用凯氏定氮法对乙醇梭菌蛋白中的蛋白质含量进行测定。二、仪器与试剂2.1、仪器K1160 全自动凯氏定氮仪，SH520 电热消解仪，分析天平等2.2、试剂硫酸（分析纯），20g/L 硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，400g/L 氢氧化钠溶液，混合催化剂（6gK2SO4、0.4gCuSO4），0.1mol/L 硫酸标准滴定液海能技术 [2] NYSL-1001 饲料原料乙醇梭菌蛋白[S]. 方案编号： K-325-202207 凯氏定氮仪测定乙醇梭菌蛋白的蛋白质含量 一、前信 乙 醇梭 菌 蛋白是 一 种 单细 胞 蛋白，是 以 含 一 氧 化 碳 的 工 业 尾气为原 料，由 乙醇 梭菌 为 发酵菌 种 生产 的 一种新型菌体蛋 白。人 工合 成乙 醇梭菌蛋白 目 前主要应 用 还是 在 动物饲料 上 。乙 醇梭菌蛋白 饲料不但 蛋 白质含量高 ，营养丰富 ，并 且 氨基 酸 结构平 衡，易于动 物 消 化，同 时还 具 有 优异的 饲料蛋 白 质 原 料加工 特 性 ，富含核苷 酸 等功能 性物 质 ，有 利 于 动物 肠 道与肝脏 的健康 。本实验参照《GB/T 6432 饲料中粗蛋白的 测定凯氏定氮法》使用凯氏定氮法对乙 醇梭菌蛋白 中的蛋白质含量进行测定。 二、仪器与试剂 2.1、仪器 K1160 全自动凯氏定氮仪， SH520电热消解仪，分析天平等 2.2、试剂 硫酸(分析纯)， 20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂， 400g/L 氢 氧化钠溶液，混合催化 剂(6gK2S04、0.4gCuSO4)， 0. 1mol/L 硫酸标准滴定液 三、实验方法 3.1、样品制备 称取混合均匀的样品0.2g(精确至0.1mg)加入消化管，再加入混合催化剂 6.4g(6gK，SO，、0.4gCuSO )，沿消化管壁加入浓硫酸12mL。 3.2、消解 将加完样品和试剂的消化管放置于消解仪上，盖好排废罩，设定消解仪参数如表1所示： 表1消解参数设置 阶段 温度 保温 1 420℃ 90min 2 冷却 20min 3.3、测试 消解完成后，待消化管冷却至室温后取下备用。检查定氮仪各试剂是否充足，同时做仪器空白，待仪 器空白稳定后，可将消解好的样品上机测试。定氮仪参数设置如表2所示： 表2定氮仪参数设置 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏时间 蒸汽流量 蛋白系数 滴定酸浓度 20mL 50mL 50mL 5min 100% 6.25 0. 1000mol/L 四、结果与讨论 4.1、实验结果 实验选取的乙醇梭菌蛋白样品经消解、蒸馏、滴定，得到实验结果如表3所示： 表3蛋白质含量测试结果 样品名称 样品重量 氮含量 蛋白质含量 平均值 RSD 乙醇梭菌蛋白 0.2077g 13.021% 81.384% 81.513% 0.15% 0.2012g 13.061% 81.632% 0.2024g 13.044% 81.523% 4.2、结论 本次测试的乙醇梭菌蛋白的蛋白质含量为81.513%、RSD 值为0.15%，结果平行性良好。蛋白质含 量 符 合《NYSL-1001 饲料原料乙醇梭菌蛋白》中规定的≥80%的要求。 五、注意事项 若使用 SH220F 和 SH420F 石墨消解炉消解样品，可按照下表中升温曲线进行消解。 阶段 温度 保温 1 200℃ 20min 2 420℃ 120min 参考文献 [11]]G GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法[S].