LC-MS/MS法测定动物性食品中赛拉嗪及代谢物2,6-二甲基苯胺的残留量

 本文参考标准方法GB 31658.15-2021《动物性食品中赛拉嗪及代谢物2,6-二甲基苯胺残留量的测定  液相色谱图-串联质谱法》，采用岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用仪，建立检测猪肉中赛拉嗪和2,6-二甲基苯胺的分析方法。该分析方法灵敏度高，重复性好，准确度高，稳定可靠。可供相关行业检测人 员参考使用。SSL-CA22-548Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-731 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. - Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 法测定动物性食品中赛拉嗪及代谢物2.6-二甲基苯胺的残留量 LCMSMS-731 摘要：本文利用岛津公司 LCMS-8050液相色谱-质谱联用仪，参考食品安全国家标准GB 31658.15-2021《动物性食品中赛拉嗪及代谢物2，6-二甲基苯胺残留量的测定液相色谱图-串联质谱法》建立测定方法。该方法分析灵敏度高，赛拉嗪及代谢物2，6-二甲基苯胺的仪器定量限值分别为 0.04和0.12 ng/mL， 大大低于标准限值；在 0.2-50 ng/mL 校准浓度范围内，线性关系良好，线性相关系数均大于0.9990。在精密度上，赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺的标准溶液连续进样6针的保留时间和峰面积的相对标准偏差均小于0.07%和2.04%，加标回收率范围也分别在105.4%~110.7%和78.50%~-87.9%之间，回收率高。该分析方法灵敏度高，准确可靠，可作为相关行业检测参考。 关键词： LCMS-8050赛拉嗪 2，6-二甲基苯胺 动物性食品 技术特点： 心该方法分析灵敏度高，仪器定量限值低，灵敏度高于标准方法。 *分析速度快，7分钟完成分析，优于标准方法。 赛拉嗪 (Xylazine)是一种高效的a2-肾上腺素兴奋剂，可激发中枢神经a2-肾上腺素受体，减少中枢神经系统中去甲肾上腺素和多巴胺的释放而起到镇静、肌肉松弛和痛感降低的作用，但同时会出现呼吸系统抑制、心动过缓和低血压等症状。因其良好的麻醉作用，赛拉嗪被广泛用于人，甚至猪、牛，羊等动物的镇静与镇痛药，在人或动物服用赛拉嗪后，会在体内吸收、代谢或快速分解，其中主要代谢物为 2，6-二甲基苯胺(2，6-Dimethylaniline， DMA)， 因 DMA 具有基因毒性及 致癌作用，已被明禁限量使用。 在赛拉嗪测试方法上，有液相色谱法、气相色谱法、气质联用和液质联用法，但是赛拉嗪与其代谢物 DMA一同测试的方法仅有液质联用法。 本文使用岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用仪，参考食品安全国家标准 GB 31658.15-2021《动物性食品中赛拉嗪及代谢物2，6-二甲基苯胺残留量的测定液相色谱图-串联质谱法》建立测定方法，供相关行业检测人员参考使用。 实验部分 1.1仪器 岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8050，配置信息如下： 系统控制器CBM-20A脱气机儿：DGU-20A 5R输 液 泵LC-30AD×2柱温箱：CTO-20AC自动进样器SIL-30AC质谱仪：LCMS-8050 色谱工作站： Labsolutions Ver.5.99 1.2分析条件 液相条件 色 谱 柱： Shim-pack GIST AQ-C18 (100 mm x 2.1 mm l.D.， 1.9 um， 岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：227-30807-02) 流动相： A-0.1%甲酸水；B-乙腈 进流洗 样体 积 L 温 40°C 速 0.3 mL/min 柱洗针 液：：甲醇/水=1：11 (v：v) 脱方式： 梯度洗脱，B相起始浓度为20%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时间程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 3.10 泵 B Conc 60 3.20 泵 B Conc 90 4.20 泵 B Conc 90 4.30 泵 B Conc 20 7.00 控制器 STOP 质谱条件 离子化模式： ESI+ 雾化气流速： 3.0L/min 接口电压：0.5kV接口口温温度：3300°℃DL温 度：150°C 干燥气流速： 10.0L/min 加热气流速：110.0 L/min 加热模块温度： 300℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) MRM参娄数： 见表2 表2MRM 优化参数 序号 中文名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE Q3 Pre Bias((V) 1 赛拉嗪 221.15 90.10* -11.0 -23.0 -10.0 164.10 -11.0 -27.0 -29.0 2 2，6-二甲基苯胺 122.15 105.10* -14.0 -20.0 -11.0 77.10 -13.0 -28.0 -30.0 *代表定量离子对。 样品前处理 2.1标液配制 储备溶液(1 mg/mL)：分别精密称定赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺固体粉末，使用乙腈溶解于棕色瓶中，配制成浓度为 1 mg/mL的储备溶液，置于-18℃保存备用。 校准曲线溶液配制：使用乙腈溶剂，分别取赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺的储备溶液，混合，再稀释，配制获得浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10、20和50 ng/mL 的系列标准工作液。 2.2样品处理 提取：首先将样本捣碎，称取试样5g(准确至±1%)于50mL离心管中，加无水硫酸钠2g、乙腈10mL，涡旋混匀，振荡10 min， 4℃、10000 r/min 离心10 min (脂肪试样加5%氨水乙腈溶液 10mL，于4℃、8000 r/min 离心10 min)，移取上清液。重复提取一次，合并上清液。40℃氮吹近干，加1.0 mL乙腈溶解，再次涡旋混匀备用。 净化：取备用液，加乙腈饱和的正己烷0.5 mL，涡旋混匀，4℃、10000 r/min 离心 5 min， 取下层溶液200 uL， 于5mL离心管中，加水800 uL， 涡旋混匀，4℃、10000 r/min 离心5 min， 取溶液， 0.22 um 滤膜过滤，供测定。 3.1 MRM 色谱图 图1 标准品溶液 MRM 色谱图 (0.5ng/mL) 3.2校准曲线 对校准曲线溶液按1.2条件进行分析，外标法制作校准曲线。赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺在校准曲线浓度范围内线性良好，相关系数分别为 0.9996 和0.9992， 准确度分别在 96.3%~103.4%和96.0%~105.7%之间。根据 S/N=10计算定量限(ASTM法)，赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺的定量限分别为 0.04 ng/mL 和 0.12 ng/mL。具体结果见图2及表3。 赛拉嗪 2，6-二甲基苯胺 图2 校准曲线(权重1/c) 表3相关系数及检出限 编号 中文名称 线性范围(ng/mL) 相关系数r 准确度(%) 定量限 (ng/mL) 1 赛拉嗪 0.5~50.0 0.9996 96.3~103.4 0.04 2 2，6-二甲基苯胺 0.5~50.0 0.9992 96.0~105.7 0.12 3.3重复性实验 分别取三个不同浓度的标准工作溶液连续平行测定6次，考察仪器精密度。结果显示，赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺保留时间的相对标准偏差分别在0.06%~0.14%和0.04%~0.07%之间，峰面积的相对标准偏差分别在0.44%~1.31%和1.11%~2.04%之间，仪器精密度良好(见表4)。 表4 保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 编号 中文名称 0.2 ng/L (RSD%) 0.5 ng/L (RSD%) 20ng/L (RSD%) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 1 赛拉嗪 0.06 1.31 0.06 0.84 0.14 0.44 2 2，6-二甲基苯胺 0.04 1.54 0.05 2.04 0.07 1.11 3.4加标回收率 按照1.2分析条件和2.2前处理条件，对猪肉的实际样品与样品加标进行前处理。根据标准限值要求，选择3个加标浓度(溶液浓度分别为 0.2 ng/mL、1.0 ng/mL和5.0 ng/mL)，每个浓度平行测试3个。猪肉样本未检出，赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺的平均回收率范围分别在105.4%~110.7%和78.50%~-87.9%之间。具体结果图3-4和表5。 图3猪肉样品的色谱图图(未检出) 图41.0 ng/mL加标样品的色谱图 表5名各组分添加回收率结果 编号 化合物名称 平均回收率((%) 加标浓度0.2 ng/mL 加标浓度 1.0 ng/mL 加标浓度 5.0 ng/mL 1 赛拉嗪 105.4 108.3 110.7 2 2，6-二甲基苯胺 78.5 84.2 87.9 结论 本文参考标准方法GB 31658.15-2021《动物性食品中赛拉嗪及代谢物2，6-二甲基苯胺残留量的测定液相色谱图-串联质谱法》，采用岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用仪，建立检测猪肉中赛拉嗪和2，6-二甲基苯胺的分析方法。该分析方法灵敏度高，重复性好，准确度高，稳定可靠。可供相关行业检测人员参考使用。 岛津应用云