饲料中泰乐菌素含量检测方案(液相色谱仪)

月旭科技(上海)股份有限公司 饲料中泰乐菌素含量的测定 GB/T 30945-2014 1、适用范围 适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中土霉素的测定(该实验选用基质添加剂预混合饲料)o本标准不适用于添加尿素的饲料。 参考标准： 《GB/T 30945-2014 饲料中泰乐菌素的测定高效液相色谱法》 2、溶液的配制 d)(乙腈溶液(50%)：取乙腈100mL， 与100mL 水混合。 )标准工作液：： 称取泰洛星 5mg，用乙腈溶液溶解并定容至10mL，溶度为500 pg/mL。 )0.005mol/L 磷酸二氢铵冲液：称取磷酸二氢铵 0.5751g， 用水溶解并定容至1000mL， 过 0.45um滤膜抽滤。 )盐酸溶液(1mol/L)：取9mL盐酸于 100mL容量瓶中，用水稀释并定容。 5)乙酸钠缓冲液：称取12.30g 无水乙酸钠用 1000mL水溶解，用 1mol/L盐酸溶液调节pH至5.5。 6)))流动相：乙乙-甲醇-磷酸二氢铵冲液-水=70：50：20：60。 3、提取步骤 称取试样2g(精确至0.01g)，于50mL具塞离心管中，加入25mL 二氯甲烷，涡旋混匀，超声提取 20min， 于5000r/min 离心3min，用快速滤纸过滤，收集于 邮编：321000 100mL浓缩瓶中，于45℃旋蒸至干，加入 0.5mL 甲醇，用4.5mL乙酸钠缓冲液多次润洗浓缩瓶，洗液合并入15mL离心管中，加入5mL正己烷，涡旋混匀，4000r/min 离心 5min， 弃去正己烷层，下层水相待净化。 4、净化 SPE小柱： Welchrom@ BRP，规格：200mg/3mL。 活化：5mL甲醇，5mL水，弃去； 上样：全部上样，弃去； 淋洗：5mL水； 洗脱：6mL甲醇； 洗脱液于40℃氮吹至干，加入1mL50%乙腈水，过0.22um滤膜，待测。 5、注意事项 1)加标水平：2g样中加入 40pL 500ug/mL 混合标准工作液，复溶1mL 上机，因此加标水平为 10mg/kg， 最终机度数为20mg/L。 2)洗脱液在氮吹时必须吹干，如有剩余甲醇会导致目标峰分叉。 6、色谱条件 色谱柱：月旭UltimateR XB-C18，4.6×250mm，5um 流动相：2-6 流速：1.0mL/min 柱温：30℃ 进样量： 20pL 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add：上海市松江区明南路85号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add：浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel：400-810-6969 检测波长：290nm 7、色谱图或者加标回收率结果 图1.泰洛星标准溶液20mg/L图谱 表1、出峰情况 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 min mAU*m1n mAU % EP (USP) 泰洛星 7.133 0.6792 2.82 100 0.98 6290 邮编：201600 邮编：321000 Time [min] 图2.饲料样品空白图谱 图3.饲料样加标 10mg/kg 图谱 邮编：201600 邮编：321000 表2、加标回收率表 名称 加标水平 mg/kg 平均回收率% RSD % 泰洛星 10 89 2.33 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00522-20004 SPE 小柱 WelchromBRP，200mg/3mL，50pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL，50/包 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 Welchrom离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，15mL，50/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch【固相萃取装置， 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom 00201-31043 液相色谱柱 Ultimate@XB-C18， 4.6x250mm，5um 00826-T161P010 泰乐菌素/泰乐星标准品 A2S， CAS No.：1401-69-0，10mg ( 邮编：321000 ) 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。邮编：dd：上海市松江区明南路启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园楼Add：浙江省金华市婺城区双林南街E-mail：lingyuyu @welchmat.comTel： E-mail：lingyuyu @welchmat.com 1) 乙腈溶液（50%）：取乙腈 100mL，与 100mL 水混合。 2) 标准工作液：称取泰洛星 5mg，用乙腈溶液溶解并定容至 10mL，溶度 为 500 μg/mL。 3) 0.005mol/L 磷酸二氢铵冲液：称取磷酸二氢铵 0.5751g，用水溶解并定容 至 1000mL，过 0.45μm 滤膜抽滤。 4) 盐酸溶液（1mol/L）：取 9mL 盐酸于 100mL 容量瓶中，用水稀释并定 容。 5) 乙酸钠缓冲液：称取 12.30g 无水乙酸钠用 1000mL 水溶解，用 1mol/L 盐酸溶液调节 pH 至 5.5。 6) 流动相：乙腈-甲醇-磷酸二氢铵冲液-水=70:50:20:60。