饲料中纳多诺尔检测方案(液相色谱仪)

月旭科技(上海)股份有限公司 饲料中纳多洛尔的检测方法 农业部1063号公告-4-2008 1、适用范围 本标准规定了测定饲料中纳多洛尔含量的高效液相色谱检测方法。 本标准适用于配合饲料中纳多洛尔的测定。(本实验样品为某款配合饲料) 参考标准： 《农业部1063号公告-4-2008饲料中纳多洛尔的检测 高效液相色谱法》 2、.溶液的配置 1)0.5%甲酸溶液：量取5mL甲酸于 1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。 2)稀释液：量取 50mL 乙青于1000mL容量瓶中，用0.5%甲酸溶液定容至刻度。3)5%氨化甲醇：量取 25mL氨水和500mL甲醇，混匀。 4)纳多洛尔标准储备液：称取5mg纳多洛尔标准品，用甲醇定容至10mL，配制成 500ug/mL 的标准储备液。 5)纳多洛尔标准工作液：吸取0.4mL纳多洛尔标准储备液，用甲醇定容至10mL，配制成 20ug/mL 的标准工作液。 3、提取步骤 准确称取5g配合饲料(精确至0.001g)于50 mL离心管中，加入25mL甲醇，涡旋1min， 超声 10min 后，8000r/min 离心5min， 取上清液备用。 4、净化步骤 SPE柱：月旭 WelchromQ P-SCX小柱，规格：150mg/6mL 活化：3mL甲醇，3mL水，弃去； 上样：5mL上清液+5mL水，混匀后上样，弃去； 淋洗：3mL甲醇，抽干，弃去； 洗脱：：5mL5%氨化甲醇，收集； 浓缩：50℃氮吹至近干后用稀释液定容至1mL， 过 0.22um NY微孔滤膜，供上机检测。 5、注意事项 1)加标水平：5g样品中加入250pL20ug/mL标准工作液，因此加标水平为1.0mg/kg，最终机度数为 1.0ug/mL。 6、色谱条件 6.1高效液相色谱条件 色谱普：月旭XtimateR C8 4.6×150mm， 5um 流速：1.0mL/min 柱温：25℃ 进样量：10pL 检测器：荧光检测器，激发波长为230nm，发射波长 300nm。 洗脱程序： 时间/min 0.5%甲酸溶液/% 乙腈/% 0 95 5 8 55 45 12 95 5 15 95 5 7、色谱图或者加标回收率结果 图1.纳多洛尔空白加标1.0mg/kg 图谱 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 min mV*min mV % (EP) (EP) 纳多洛尔 6.442 592296 133679 100.00 1.368 38649 图2.配合饲料样品空白图谱 图3.配合饲料样品加标 1.0mg/kg 图谱 表1.加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD 值(n=2) 纳多洛尔 1.0mg/kg 99.32% 0.98% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20043 SPE小柱 WelchromQ P-SCX，150mg/6mL，30pk 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL， 50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处11.6*32mm一级水角玻璃 100pk 00102-21041 液相色谱柱 XtimateR C8， 4.6×150mm， 5um 00802-02201 针头式过滤器 进口NY，13mm*0.22um，100pk 纳多洛尔标准品 CAS：42200-33-9 \ 海松江启迪漕河泾(中山)科技园紫荆园楼 1）0.5%甲酸溶液：量取 5mL 甲酸于 1000mL 容量瓶中，用水定容至刻度。 2）稀释液：量取 50mL 乙腈于 1000mL 容量瓶中，用 0.5%甲酸溶液定容至刻度。 3）5%氨化甲醇：量取 25mL 氨水和 500mL 甲醇，混匀。 4）纳多洛尔标准储备液：称取 5mg 纳多洛尔标准品，用甲醇定容至 10mL，配 制成 500μg/mL 的标准储备液。 5）纳多洛尔标准工作液：吸取 0.4mL 纳多洛尔标准储备液，用甲醇定容至 10mL， 配制成 20μg/mL 的标准工作液。