可乐中左旋肉碱检测方案(液相色谱仪)

月旭科技(上海)i股份有限公司 可乐中左旋肉碱的测定 SN/T 5146-2019 1、适用范围 适用于乳粉、饮料等食品中左旋肉碱的测定(该实验选用基质为可乐) 参考标准： 《SN/T 5146-2019出口食品中左旋肉碱的测定高效液相色谱和液相色谱-质谱/质谱法》 2、溶液的配置 1)c乙腈溶液：：量取90mL乙腈加入10mL水，超声混匀备用。 )标准工作液：称取左旋肉碱 10mg，用乙腈溶液溶解并定容至10mL，溶度为1000 ug/mL， 于4℃避光储存。 3) 淋洗液：量取5mL甲醇与95mL水混合。 )磷酸二氢钾缓冲液：称取6.80g磷酸二氢钾，用1000mL水溶解，用磷酸调节pH至2.8. )1mol/L 盐酸溶液：取9mL盐酸，加水至100mL。 )0.1mol/L盐酸溶液：取0.9mL盐酸，加水至100mL。 7) 1mol/L氢氧化钾溶液：称取2.8g氢氧化钾，加水定容至50mL。 8) 4%氨水甲醇溶液：取2mL氨水，加甲醇定容至50mL。 )衍生剂：：称取 0.45gL-丙酰胺-β萘胺，加乙腈溶解至100mL. 10)催化剂I：称取0.50g三乙胺，加三氯甲烷混匀定容至100mL。 11)催化剂II：称取 0.50g氯甲酸丁酯，加三氯甲烷混匀定容至100mL。 12)碳酸氢钠溶液：称取0.42g碳酸氢钠，加水溶解至100mL。 ( 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 ) ( Add：上海市松江区明南路 85 号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10 号 邮 楼 邮编：201600 ) Ad d：：浙江省金华市婺城区双林南街11668 号 编：32： 110000el：400-81001--669)69E--m ail：lingyuyu@ weelchmnaat.com 3、提取步骤 准确称取试样5g(精确至0.01g)，加入 20mL 0.1mol/L 盐酸溶液，超声 1min，加入 5mL 1mol/L 氢氧化钾溶液，涡旋混匀，于60℃水浴皂化30min， 冷却至室温，加入5mL 1mol/L 盐酸溶液，用 0.1mol/L 盐酸溶液定容至50mL， 涡旋混匀，取 1mL上清液于15mL 离心管中，加入9mL乙腈，涡旋混匀，待净化。 4、净化 SPE小柱：月旭 WelchromQ P-SCX小柱，规格：60mg/3mL 活化：3mL甲醇，3mL水，弃去 上样：取1mL上样，弃去 淋洗：3mL淋洗液，弃去，抽干 洗脱：：5mL4%氨水甲醇，收集 洗脱液于40℃氮吹至干，待衍生。 5、衍生 在残渣中加入 0.5mL 衍生剂，超声溶解，再依次加入 0.5mL催化剂I和 0.5mL催化剂II，涡旋混匀3min， 室温下静置反应 30min 后，加入1mL 碳酸氢钠溶液涡旋混匀 3min 终止反应。4000r/min 离心5min， 取上层水相过 0.45um 滤膜待测。 6、注意事项 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add：上海市松江区明南路85号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10号邮楼 邮编：201600 Add：：浙江省金华市婺城区双林南街11668 编：32110000 号Tel：400-81001--669)69E-·1mail：lingyuyu@w!eelchmnaat.com 1)加标水平：5g样中加入 50uL 1mg/mL标准工作液，50mL提取液取1mL稀释至10mL取 1mL上样，复溶1mL上机，因此加标水平为 10mg/kg， 最终机度数为 0.1mg/L. 7、色谱条件 色谱柱：月旭UItimateQ XB-C18， 4.6x100mm，5um 流动相：磷酸二氢钾：乙腈=75：25 流速：0.8mL/min 柱温：35℃ 进样量： 10uL 波长：244nm 8、色谱图或者加标回收率结果 令 图1.左2旋肉碱0.1mg/L 图谱 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 塔板数 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 ( Add：上海市松江区明南路 85 号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10 号 楼 邮 邮编：201600 ) ( Add： ：浙 江省 金华 市 婺城 区 双林南 街 1 16 6 8 编 ： 3 2 1 10 0 0 0 ) Tel：400-81C01--669)69E--1mail：lingyuyu@weelch mnaat.com min mAU*min mAU % EP (USP) 左旋肉碱 5.602 0.216 1.751 100 0.93 13832 图2.可乐样品空白图谱 图3. 可乐样加标 10mg/kg图谱 ( 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 ) ( Add：上海市松江区明南路 85 号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10 号 邮 楼 邮编：201600 ) ( Add： ：浙 江省 金华 市 婺城 区 双林南 街 1 16 6 8 编 ： 3 2 1 10 0 0 0 ) ( 号 Tel：400-81C01- -6 69)69E--1m ail：lingyuyu@ weelchm na at.com ) 表1.加标回收率表 名称 加标水平 mg/kg 平均回收率% RSD%(n=2) 左旋肉碱 10 102 1.32 9、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20016 SPE 小柱 WelchromQ P-SCX，60mg/3mL，50pk 00837-05006 50mL 螺口尖底离心管 离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，50mL， 50/包 00837-05002 15mL 螺口尖底离心管 离心管一次性离心管，平盖，锥形底，RCF12000xg，袋装，未灭菌，15mL， 50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处11.6*32mm一级水解玻璃 100pk 00201-31039 液相色谱柱 UltimateQ XB-C18， 4.6×100mm，5um 左旋肉碱标准品 CAS 号：541-15-1 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 ( Add：上海市松江区明南路 85 号启迪漕河泾(中山)科技园.紫荆园10 号 邮 楼 邮编：201600 ) ( Add： ：浙 江省 金华 市 婺城 区 双林南 街 1 16 6 8 编 ： 3 2 1 10 0 0 0 ) 号Tel：400-81C01--669)69E--1mail：lingyuyu@weelchmnaat.com 1) 乙腈溶液：量取 90mL 乙腈加入 10mL 水，超声混匀备用。 2) 标准工作液：称取左旋肉碱 10mg，用乙腈溶液溶解并定容至 10mL，溶 度为 1000 μg/mL，于 4℃避光储存。 3) 淋洗液：量取 5mL 甲醇与 95mL 水混合。 4) 磷酸二氢钾缓冲液：称取 6.80g 磷酸二氢钾，用 1000mL 水溶解，用磷 酸调节 pH 至 2.8。 5) 1mol/L 盐酸溶液：取 9mL 盐酸，加水至 100mL。 6) 0.1mol/L 盐酸溶液：取 0.9mL 盐酸，加水至 100mL。 7) 1mol/L 氢氧化钾溶液：称取 2.8g 氢氧化钾，加水定容至 50mL。 8) 4%氨水甲醇溶液：取 2mL 氨水，加甲醇定容至 50mL。 9) 衍生剂：称取 0.45g L-丙酰胺-β 萘胺，加乙腈溶解至 100mL。 10) 催化剂Ⅰ：称取 0.50g 三乙胺，加三氯甲烷混匀定容至 100mL。 11) 催化剂Ⅱ：称取 0.50g 氯甲酸丁酯，加三氯甲烷混匀定容至 100mL。 12) 碳酸氢钠溶液：称取 0.42g 碳酸氢钠，加水溶解至 100mL。