川射干中药配方颗粒中特征图谱分析检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA22-171Excellence in Science Excellence in ScienceLC-297 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn UHPLC 方法快速进行川射干中药配方颗粒的特征图谱分析 LC-297 摘要：本文以《川射干配方颗粒》国家标准特征图谱分析为例，介绍了采用 HPLC 方法转换工具 MethodTransfer 进行 HPLC 法到 UHPLC 法的快速转换的过程和操作方式并对相关结果进行验证。实验结果表明，该功能无需经过繁琐的计算即可在满足《中国药典》相关要求的情况下进行方法的一键转换。转换成 UHPLC法后，系统适用性实验和样品测定结果均符合标准要求，且UHPLC 法分析时长较原来 HPLC 方法的 60 min 缩短至15 min，分析效率得到明显提高，可为相关检验人员提供参考。 关键词：中药配方颗粒 特征图谱 川射干 UHPLC HPLC 方法转换 超高效液相色谱(UHPLC)与高效液相色谱(HPLC)技术具有相同的分离原理，它的理论基础为VanDeemeter方程，即填料粒度越小柱效越高，且每种填料粒度尺寸均有自身最佳柱效的流速。相比 HPLC 法，UHPL 法具有更高的分离度和灵敏度，同时色谱峰容量和分析效率均有显著地提升。 领域逐步得到了应用，极大地促进了中药研究领域的发展。中药配方颗粒是一种特殊的中药饮片。在已颁布的中药配方颗粒国家标准中，特征图谱分析是其关键的分析项目之一。在该分析项目中， UHPLC 和 HPLC 方法均有被采用，且采用 UHPLC 法的占比更高。 中药具有化学成分复杂，性质差异大，分离难度大等特点，给中药分析带来了巨大的挑战。目前， UHPLC技术在中药化学成分识别、指纹图谱及代谢组学等分析 本文以以射干配方颗粒为例，利用岛津 MethodTransfer 方法转换软件快速将标准中特征图谱分析的HPLC法转换成 UHPLC 法，转换后特征图谱分析结果均符合标准要求，供相关检验人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验 UHPLC 方法采用岛津 Nexera XS 高效液相色谱仪，具体配置为： 系统控制器：CBM-40脱气机： DGU-405输液泵： LC-40D XS×2自动进样器： SIL-40C XS柱温温： CTO-40C检测器：SPD-M40 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 1.2分析条件 对在 HPLC上采用的特征图谱分析条件进行方法转换， HPLC 法分析条件详岛岛津《中药配方颗粒液相色谱图谱集》 https：//support.shimadzu.com.cn/an/literature/AP_NOTES/SGCOE-22-01.html 色谱柱： Shim-pack GIST C18-AQ (100 mm×2.1 mml.D.， 1.9um)，(P/N：227-30807-02，岛津(上海)实验器材有限公司) 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为18%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 5.21 Pumps Pump B Conc. 82 7.29 Pumps Pump B Conc. 64 15 Controller Stop 1.3样品前处理 空白溶剂的制备：取(0.2%磷酸：乙腈=82：18)的水溶液即得。 对照品、对照药材参照物溶液及供试品溶液的制备：同《川射干配方颗粒》国家标准，编号YBZ-PFKL-2021028 结果与讨论 2.1色谱图 按照1.2中色谱分析条件，取上述溶液分别上机分析，色谱图如图1-2，空白溶剂在目标物出峰处无干扰。 图11对照药材参照物溶液、对照品溶液及空白溶剂色谱图 图2供试品溶液色谱图 峰2(S)：射干苷；峰5：野鸢尾苷；峰6：鸢尾黄素；峰7：鸢尾甲黄素A；峰8：鸢尾甲黄素B 2.2系统适用性 以射干苷特征峰的理论塔板数为考察指标，，系统适用性结果如下表所示： 表2 系统适用性结果 名称 对照品参照物 对照药材参照物 供试品 理论塔板数 13108 13410 13818 结果表明，转换为 UHPLC 法后，各溶液中射干苷的理论塔板数均大于8000，符合标准规定。2.3精密度 取对照药材参照物溶液连续进样6次，考察仪器精密度。8个特征峰的保留时间和峰面积 RSD 值分别在0.027%~0.074% 和0.113%~0.331%之间，表明仪器精密度良好，详见图3和表3。 图3 对照药材参照物溶液精密度测试色谱图(n=6) 表3 对照药材参照物溶液精密度测试结果(n=6) 组分编号 保留时间 RSD(%) 峰面积RSD(%) 0.034 0.113 2(S) 0.049 0.239 3 0.074 0.228 4 0.067 0.186 5 0.051 0.317 6 0.027 0.145 7 0.028 0.331 8 0.031 0.258 2.4供试品特征图谱分析结果 在UHPLC法分析条件下，川射干配方颗粒供试品溶液呈现8个特征峰；7个指定特征峰的相对保留时间均在标准规定范围内，且各特征峰相对保留时间与标准规定值的相对偏差不超过3%，与 HPLC 法测试结果无明显差异，满足《川射干配方颗粒》国家标准中特征图谱的分析要求。 表4 供试品特征图谱特征峰参数列表 组分编号 相对保留时间标准规 相对保留时间 与标准规定值的相对对差(%) 定值(限度：±10%) UHPLC 法 HPLC 法 UHPLC法 HPLC法 1 0.896 (0.806~0.986) 0.909 0.880 1.45 -1.82 2(S) 3 1.183(1.065~1.301) 1.188 1.176 0.42 -0.56 4 1.561(1.405~1.717) 1.536 1.488 -1.60 -4.69 5 1.620(1.458~1.782) 1.596 1.523 -1.48 -5.96 6 2.201 (1.981~2.421) 2.145 2.131 -2.54 -3.20 2.271(2.044~2.498) 2.223 2.208 -2.11 -2.78 8 2.3477(2.112~2.582) 2.290 2.275 -2.43 -3.07 结论 本文以川射干配方颗粒特征图谱分析为例，介绍采用岛津方法转换工具 Method Transfer 对国家标准中的HPLC 法转换成 UHPLC 法的过程，该功能无需经过繁琐的计算即可在满足《中国药典》相关要求的情况下进行方法一键转换。转换成 UHPLC 法后，系统适用性和样品测定结果均符合《川射干配方颗粒》标准要求；且UHPLC 法一针样品的测试时长较原来 HPLC 法60 min 的时间缩短至15 min，极大地提高了分析效率，该方法可为相关检验人员提供参考。 岛津应用云 本文以川射干配方颗粒特征图谱分析为例，介绍采用岛津方法转换工具Method Transfer对国家标准中的HPLC法转换成UHPLC法的过程，该功能无需经过繁琐的计算即可在满足《中国药典》相关要求的情况下进行方法一键转换。转换成UHPLC法后，系统适用性和样品测定结果均符合《川射干配方颗粒》标准要求；且UHPLC法一针样品的测试时长较原来HPLC法60 min的时间缩短至15 min，极大地提高了分析效率，该方法可为相关检验人员提供参考。