水产品中有机磷类药物残留量检测方案(液质联用仪)

SSL-CA22-004Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-609 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法测定水产品中有机磷类药物残留量 LCMSMS-609 摘要：本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪建立了水产品中有机磷类药物同时测定的方法。实验结果表明，在 0.002-0.4 mg/L浓度范围内(以辛硫磷计)，方法线性良好，线性相关系数在0.9969-0.9997之间，曲线各浓度点准确度在90.5-111.6%之间。0.01mg/L浓度对照品溶液(以辛硫磷计)，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别在 0.02-0.07%和0.95-5.83% 之间。0.002、0.02和0.2 mg/kg三个不同浓度(以辛硫磷计)加标回收率在81.2%-105.4%之间，平行三份样品的 RSD% 在1.9%-5.4%之间。该方法简单，稳定，准确，供相关人员参考。 氯农药残留量的检测方法》， GB 29705-2013《食品安全国家标准水产品中氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯多残留的测定气相色谱法》，所用检测方法均是气相色谱法。有机磷类药物做为市场上常见的农药，目前还没有水产品中有机磷类农药的相关检测国标。 本文采用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪，建立了水产品中9种有机磷类药物同时测定的方法，该方法简单，稳定，准确，抗假阳性能力强，供相关检测人员参考。 脱气机： DGU-405 自动进样器：SIL-40C XR 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 质谱检测器：LCMS-8045 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： Shim-pack GIST-HP C18-AQ (100 mm×2.1 mm l.D.， 1.9 um) P/N： 227-30807-02，岛津(上海)实验器材有限公司 流动相：A相为0.1%甲酸水溶液；B相为乙腈 流速：0.25mL/min 柱温：40℃ 进样量：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 泵 B.Conc 5 2.00 泵 B.Conc 95 4.00 泵 B.Conc 95 4.50 泵 B.Conc 5 7.50 控制器 Stop 质谱条件： 离子源： ESI(+)雾化气流速：3.0 L/min加热气流速：10.0L/min 干燥气流速：10.0 L/min DL温度：200℃加热模块温度：400℃接口温度：300℃扫描模式：多反应监测 (MRM) 表2 MRM 参数 名称 CAS 内标组 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE(V) Q3 Pre Bias (V) 辛硫磷 14816-18-3 1 299.0 153.0* 129.0 -26.0 -26.0 -22.0 -13.0 -20.0 -30.0 倍硫磷 55-38-9 1 279.1 247.1* -16.0 -13.0 -18.0 169.1 -24.0 -16.0 -29.0 倍硫磷-D 1 284.9 169.0* -26.0 -16.0 -13.0 2 282.0 156.0* -11.0 -12.0 -23.0 巴胺磷 31218-83-4 138.0 -11.0 -20.0 -18.0 127.0* -18.0 -12.0 -37.0 马拉硫磷 121-75-5 2 331.0 99.0 -18.0 -24.0 -21.0 马拉硫磷-D / 2 341.0 132.0* -16.0 -10.0 -24.0 169.0* -20.0 -22.0 -13.0 二嗪农 333-41-5 3 305.1 96.9 -20.0 -35.0 -27.0 二嗪农-D / 3 315.0 170.0* -11.0 -20.0 -16.0 4 257.0 109.0* -19.0 -18.0 -10.0 敌百虫 52-68-6 79.0 -19.0 -30.0 -9.0 109.0* -15.0 -22.0 -32.0 敌敌畏 62-73-7 4 221.0 79.0 -15.0 -34.0 -23.0 敌敌畏-D， / 4 229.0 115.0* -11.0 -16.0 -17.0 138.9* -18.0 -24.0 -33.0 甲基吡啶磷 35575-96-3 5 325.0 119.0 -18.0 -35.0 -25.0 甲基吡啶磷-D， / 5 331.0 112.0* -28.0 -35.0 -16.0 307.0* -13.0 -16.0 -12.0 蝇毒磷 56-72-4 6 363.0 289.0 -13.0 -24.0 -27.0 蝇毒磷-D10 / 6 373.0 228.0* -21.0 -28.0 -39.0 注：*表示定量离子 1.3标准品及样品制备 混合标准溶液：准确量取各标准物质适量，用乙腈稀释，配成浓度分别为：巴胺磷1mg/L、马拉硫磷1mg/L、二嗪农1 mg/L、敌百虫1mg/L、敌敌畏1 mg/L、甲基吡啶磷1 mg/L；辛硫磷2mg/L、倍硫磷2 mg/L和蝇毒磷2 mg/L 的混合标准工作液。0~4℃避光保存，有效期1周。 混合内标工作液：准确吸取内标标准物质溶液，用乙腈稀释配成马拉硫磷-D10、二嗪农-D10、敌敌畏-D，和甲基吡啶磷-D，0.5 mg/L， 倍硫磷-D。和蝇毒磷-D101 mg/L的混合内标工作液，0~4℃避光保存，有效期1周。 定容液：取乙腈150ml，加水350ml、甲酸0.5 mL， 混匀。 标准工作曲线：准确量取适量混合标准工作溶液及混合内标工作液20uL，用定容液稀释成巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、敌百虫、敌敌畏和甲基吡啶磷浓度分别为0.001、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mg/L，辛硫磷、倍硫磷和蝇毒磷浓度分别为0.002、0.01、0.02、0.04、0.1、0.2、0.4 mg/L系列标准溶液。 样品制备：称取5g试样((精确至0.01 g)于50mL塑料离心管中，加入混合内标工作液100 uL， 1%乙酸乙腈25mL，无水乙酸钠1g， 涡旋混匀2 min， 超声 30 min， 8000 r/min 离心10 min， 取上清液备用。备用液加 PSA 吸附剂 500 mg， 涡旋振荡1 min， 8000 r/min 离心 10 min；取上清液5mL， 45℃氮气吹干，准确量取定容液1mL 溶解残渣，加 PSA 吸附剂 200 mg， 涡旋 l min， 5000 r/min 离心10 min， 取上清液过0.22 um 滤膜，用于测定。 结果讨论 2.1色谱图 甲基吡啶磷-D6 蝇毒磷 蝇毒磷-D10 图1 15种化合物 MRM 色谱图(0.002 mg/L) 2.2标准曲线结果 按照1.3制备0.002、0.01、0.02、0.04、0.1、0.2、0.4 mg/L标准系列工作溶液(以辛硫磷计)，取1uL进样，使用内标法拟合工作曲线，标准曲线见图2。各浓度点线性回归的准确度、相关系数等结果见表3。 图2 部分有机磷农药标准曲线 表3 标准曲线结果 化合物 线性范围(mg/L) 准确度(%) 相关系数R 辛硫磷 0.002-0.4 92.8-111.2 0.9969 倍硫磷 0.002-0.4 96.4-107.6 0.9997 巴胺磷 0.001-0.2 91.9-105.2 0.9988 马拉硫磷 0.001-0.2 93.3-106.6 0.9987 二嗪农 0.001-0.2 94.1-107.3 0.9988 敌百虫 0.001-0.2 90.7-111.6 0.9972 敌敌畏 0.001-0.2 91.2-109.2 0.9980 甲基吡啶磷 0.001-0.2 94.3-109.7 0.9983 蝇毒磷 0.002-0.4 90.5-109.4 0.9973 2.3重复性考察 0.01 mg/L浓度对照品溶液(以辛硫磷计)，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表4所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别在 0.02-0.07%和0.95-5.83%之间，方法精密度良好。 表4 连续6针重复性结果 No. 化合物名称 RSD%6( (10 ng/mL) R.T. Area 辛硫磷 0.07 4.31 2 倍硫磷 0.05 5.83 3 巴胺磷 0.04 3.04 4 马拉硫磷 0.07 0.95 5 二嗪农 0.03 1.19 6 敌百虫 0.03 5.04. 7 敌敌畏 0.05 2.47 8 甲基吡啶磷 0.07 3.82 9 蝇毒磷 0.07 5.23 2.4加标回收率及重复性考察 取水产品空白基质，按照1.3前处理方法，对样品进行低、中、高三个浓度水平加标回收率考察。每个浓 度平行制备三份样品，进行重复性考察。低、中、高三个加标浓度分别为 0.002、0.02和0.2 mg/kg(以辛硫磷计)。三水平加标回收率及重复性结果见表 5。 表5 回收率结果R ((n=3) NO. 名称 0.002 mg/kg 0.02 mg/kg 0.2mg/kg 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 辛硫磷 82.7 5.3 85.7 4.6 84.9 3.3 2 倍硫磷 93.8 3.4 93.3 3.2 96.2 4.8 3 巴胺磷 81.2 3.6 85.5 2.9 86.2 4.5 马拉硫磷 93.1 2.5 92.8 1.4 103.2 2.6 5 二嗪农 88.5 4.5 85.3 5.3 94.6 2.1 6 敌百虫 94.8 2.8 91.4 3.7 103.6 4.7 敌敌畏 95.0 1.9 90.5 4.8 90.8 2.5 甲基吡啶磷 103.5 2.4 99.8 4.2 105.4 5.0 9 蝇毒磷 89.4 4.4 87.7 5.4 92.9 3.9 结论 本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪 LCMS-8045 建立了水产品中有机磷类药物测定的方法。实验结果表明，在0.002-0.4 mg/L 浓度范围内(以辛硫磷计)，方法线性良好，线性相关系数在0.9969-0.9997之间，曲线各浓度点准确度在90.5-111.6%之间。0.01 mg/L 浓度对照品溶液(以辛硫磷计)，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别在0.02-0.07%和 0.95-5.83% 之间。0.002、0.02和0.2mg/kg 三个不同浓度(以辛硫磷计)加标回收率在81.2%-105.4%之间，平行三份样品的相对标准偏差 (RSD%)在1.9%-5.4%之间。该方法灵敏，准确，稳定，适用于水产品中有机磷类药物的检测。 岛津应用云 本文使用岛津超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪LCMS-8045建立了水产品中有机磷类药物测定的方法。实验结果表明，在0.002-0.4 mg/L浓度范围内（以辛硫磷计），方法线性良好，线性相关系数在0.9969-0.9997之间，曲线各浓度点准确度在90.5-111.6%之间。0.01 mg/L浓度对照品溶液(以辛硫磷计)，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别在0.02-0.07%和0.95-5.83%之间。0.002、0.02和0.2 mg/kg三个不同浓度(以辛硫磷计)加标回收率在81.2%-105.4%之间，平行三份样品的相对标准偏差(RSD%)在1.9%-5.4%之间。该方法灵敏，准确，稳定，适用于水产品中有机磷类药物的检测。