洁净室环境空气中微生物检测方案(微生物采样器)

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检测样品: 其他
检测项目: 生化检验
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发布时间: 2022-02-18
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德国赛多利斯集团

钻石22年

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本篇《洁净室环境中的连续微生物空气监测》应用说明采用MD8 Airscan®系统,研究了对来自层流罩空气进行高效空气过滤HEPA-filtered,凝胶过滤器在8小时过滤期间捕获的生物体的回收率和存活能力,从而证明赛多利斯的凝胶膜能在整整8小时的轮班期间连续监测药品工业化生产环境中的空气,而且不需要人工干预。

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SARTORIUS 材料和方法 应用说明 2019年2月 关键词或短语: 连续空气监测、洁净室、凝胶膜、MD8Airscan@、EU GMP指南附件1 洁净室环境中的连续微生物空气监测 Claudia Scherwing, Jasmin Bunke2 1.德国哥廷根赛多利斯斯泰帝生物技术公司产品开发实验室消耗品微生物学 2.德国哥廷根赛多利斯实验室仪器有限责任公司产品管理实验室必需品微生物学 *通讯作者 电子邮箱: kai.nesemann@sartorius.com 摘要 环境监测是无菌药品生产环境质量保证的重要环节。尤其是在没有最终灭菌步骤的无菌灌装线上,环境监测对产品安全至关重要,因此是质量控制策略的重要组成部分。这种ISO5级制造环境中要求每立方米空气的菌落形成单位(CFU)少于1个。 一种典型的空气污染监测方法是首先进行抽空气,然后通过特殊的凝胶过滤器过滤。 根据EUGMP指南附录1,每个取样点的最小样本量应为1m³。但考虑到8 h轮班制,1m3的样本量太小,无法可靠判断制造环境的空气质量。一种提高安全性的策略是对整个生产流程实施连续空气监测(多个取样点)。 与琼脂板在长期取样过程中会干燥不同,凝胶膜过滤器可以持续使用8个小时,从而可以避免发生更换琼脂板等人为干预,将二次污染的风险降低到几乎为零。 简介 下列研究的目的是通过确定被捕获的生物体是否能够承受长期的干燥压力,而且还能恢复原状,证明连续取样(和多取样点试验)能否对整个生产过程(8h)提供有效监测。 本研究利用MD8 Airscan@系统,研究了对来自层流罩空气进行高效空气过滤HEPA-filtered,凝胶过滤器在8小时过滤期间捕获的生物体的回收率和存活能力。以并行运行的参考用过滤器作为参照物,对加压和未加压过滤器进行对比。通过计算CFU的数量,和确定已识别微生物种群的类属,以检查在连续长期取样期间微生物是否发生任何变化。 由于无菌灌装是制药业生产过程中的一个环节,并且是污染风险最高的环节之一,因此监测生产区域空气中的微生物污染具有重要意义。考虑到越来越多的生物技术产品无法在生产后进行不影响其质量的灭菌操作,无菌灌装生产线越来越多地应用于制药行业。灌装线按照ISO 5'标准进行定义,这些环境中主动取样的空气必须小于一个菌落形成单位/立方米(CFU/m3)并且每个取样点采集的每立方米(m3)空气中的最小样本量需符合EU GMP指南附录1的要求。但考虑到8h轮班制,1m²的样本量可能太小,无法可靠判断制造环境的空气质量。 与未加压的参考用过滤器相比,总回收率和已回收细菌多样性均未发生变化。测试用过滤器与参考用过滤器之间没有统计学上明显的差异(单位:CFU/m3),且微生物区系之间也没有差异。CFU种群类似。 因此,需要开发一种连续生产监测工具,将污染风险降到最低,并提高整体质量控制标准。就需要采用一种能不断地检验生产流程中的所有周期并允许在多个点进行取样的方法。 对比测试用过滤器与参考用过滤器时,采用MD8 Airscan@系统对凝胶过滤器进行8小时连续空气取样,不影响总回收率,也不会改变回收微生物的多样性。 为了确定利用凝胶膜进行连续空气取样能否有效监测8h轮班的整个生产流程,研究了长期过滤过程中在无菌空气中凝胶过滤器上微生物的存活能力,即,研究被捕获生物体是否能承受长期干燥压力并恢复原状。 以往的试验表明:进入速度为 0.25 m/s的凝胶过滤器对枯草芽孢杆菌孢子的平均截留率为 99.9995 %, 对T3大肠杆菌噬菌体为99.94%。 本研究对在过滤空气的长期过滤过程中凝胶膜上微生物是否能保持存活能力进行了研究。“过滤空气”一词是指用二级生物学安全柜的进行ISO 5级高效微粒空气过滤器HEPA过滤空气。 首先,将测试用凝胶过滤器和参考用凝胶过滤器暴露在非灭菌空气中30分钟MD8Airscan@空气取样器(气流速率设置为2.0 m3/h(0,144m/s))布置在非受控性实验室环境(高压室)中,相互间隔约30~40 cm。为了创造特殊的环境条件,选择了该取样位置。该位置的相对湿度较高(~57±6%和温度:~21±1℃)(从而增加了对干燥应力敏感的水生微生物的数量(如,导致出现“最糟糕情况”的革兰氏细菌))。此外,还预计通常情况下每立方米中水生微生物的含量高于“正常”实验室。正因如此,我们假定接下来的8h干燥应力将产生明显可见、可统计检测的影响。 接下来,使用测试用过滤器,对过滤空气再取样8小时。 过滤ISO5级空气时, MD8 Airscan@取样头放置在层流罩(相对湿度:~43±3%,温度:~23±1℃)下面,因此,在8h的压力下没有出现额外的高相对湿度。 参考用过滤器只进行30分钟的非无菌空气过滤,不再进一步通风。取样后直接将参考用过滤器置于大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。 在层流罩下过滤8h后,测试用过滤器也放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基板上,在32℃下培育4天。 计算产生的菌落数量,用CFU/m³表示,共26次。然后,对比测试用过滤器和参考用过滤器的 CFU/m3。此外,为了确定微生物区系是否在长期连续取样期间发生了变化,确定了每个菌落的类属。 图1显示了测试用过滤器(金色条,平均=69个菌落, sd=51个菌落)和参考过滤器用(灰色条,平均=64个菌落,sd=32个菌落)的平均CFU/m3。发现了5级空气中CFU/m³的平均差异(根据配对T测试,在统计学上不明显),但经对比测试用过滤器和参考用过滤器,未观察到总体变化趋势(见图2)。在12个案例中,测试用过滤器的CFU/m²高于参考用过滤器,但13个案例的研究结果相反(见图2)。在非受控环境空气中,微生物自然存在较大的波动,这是造成测试用过滤器和参考用过滤器之间标准偏差的主要原因。 测试用凝胶过滤器与参考用凝胶过滤器的平均CFU对比 图1:测试用凝胶过滤器与参考用凝胶过滤器的平均CFU对比。 图2:配对测试用凝胶过滤器与参考用凝胶过滤器的CFU对比。 没有观察到测试用过滤器与参考用过滤器的微生物生长存在统计学上明显的差异。图3和图4显示了具有代表性的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上配对测试用(左)和参考用(右)过滤器生长的微生物区系。该视觉印象表明测试用和参考用过滤器上发现的微生物种群类似。根据图5A和图5B所示的微生物区系的宏观比较得到的属类识别数据,证实了测试用和参考用过滤器上微生物种群类似这一一觉印象。 图3:测试用(左)与对应参考用(右)过滤器上生长的微生物区系对比。在测试用过滤器和参考用过滤器上发现的微生物种群的组成相似。具有代表性的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上测试用过滤器(左)与参考用过滤器(右)上生长的微生物区系。 测试用凝胶过滤器与参考用凝胶过滤器的CFU/m³之间没有统计上明显的差异。金色条显示了69个菌落的平均CFU/m3,测试用过滤器的51个菌落存在标准偏差(sd)(单独计数26次)。灰色条显示了64个菌落的平均CFU/m3,参考用过滤器的51个菌落存在标准偏差(单独计数26次)。测试用凝胶过滤器与参考用凝胶过滤器之间5级空气CFU/m³平均差异在统计上并不明显。 经过对比测试用过滤器和参考用过滤器, CFU/m3没有总体变化趋势。金色条显示测试用过滤器的CFU/m3,重复26次,灰色条显示参考用过滤器的CFU/m²。 图4:测试用(左)与对应参考用(右)过滤器上生长的微生物区系对比。在测试用过滤器和参考用过滤器上发现的微生物种群的组成相似。具有代表性的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上测试用过滤器(左)与参考用过滤器(右)上生长的微生物区系。 B 图5:A测试用凝胶过滤器上生长的微生物种群的对比。生长在测试用过滤器上的微生物几乎均为球菌。此图显示了生长在测试用过滤器的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上的微生物的分类。B.参考用凝胶过滤器上生长的微生物种群的对比。生长在参考用过滤器上的微生物几乎均为球菌。此图显示了生长在参考用过滤器的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上的微生物的分类。 本研究旨在对赛多利斯斯泰帝生物技术有限公司生产的凝胶膜过滤器是否能用于制药行业生产环境的长期(8小时[8h])空气取样进行研究。具体来说,凝胶膜上收集的微生物能够在长期进行空气过滤时存活。在无菌灌装生产线上,8h过滤周期是典型的作业班次。 本研究的重点在于确定长期空气过滤是否会降低过滤器上CFU/m3的数量。因此,在测试用过滤器上进行非无菌空气取样30分钟,然后过滤ISO5级空气8小时。 实验结果表明,测试用(加压)过滤器与参考用(未加压)过滤器之间无统计学差异。测试用过滤器的CFU/m3数量与参考用过滤器相同(即,长期过滤过程中没有微生物死亡)。在非受控环境空气中,微生物自然存在较大的波动,这是造成测试用过滤器和参考用过滤器之间标准偏差的主要原因。此外,无论是视觉比较还是宏观比较,无法检测到测试用过滤器与参考用过滤器上生长的菌群之间存在差异。甚至在加压测试用过滤器上也发现了革兰氏阴性细菌。加压凝胶过滤器与未加压凝胶过滤器之间没有统计学差异。 总之,本研究表明加压凝胶过滤器与未加压凝胶过滤器之间没有统计学差异,从而证明赛多利斯斯泰帝生物技术有限公司生产的凝胶膜能在整整8h的轮班期间连续监测药品工业化生产环境中的空气,而且不需要人工干预。 ( 参考文献 ) ( (Draft of the Revision of) Annex1 of the EU Guidelinesto Good Manufacturing Practice, November 2008 (December 2017) ) ( ▪ USP, Chapter 1116-Microbiological Evaluation of Cleanrooms ) ( ·C. Scherwing, F. G olin, O. Guenec, K. Pflanz, G. D almaso,M. B ini, F. Andone,Continu o us microbiological air moni-toring for aseptic filli n g lin e s, PDAJ Pharm Sci Technol, March|April 200761:102-109 ) ( ▪ CAMRReport 1993"An assessment of the SartoriusMD- 8 Microbial Air Sampler" ) 销售与服务联系方式 更多联系信息,请访问 www.sartorius.com.cn 赛多利斯(上海)贸易有限公司 邮箱lab.cn@sartorius.com 服务热线 400 920 9889|800 820 9889 上海北京上海市浦东新区盛荣路 388北京市顺义区空港工业区 B弄百佳通产业园3号楼区裕安路 33号, 1013007-11层,200120电话+86 10 8042 6300 电话+86 21 6066 6100苏州广州 苏州市虎丘区科技城锦峰路广州市越秀区水荫路 117 号 158 号 101park-28 幢201,1105单元, 510075 215163电话+8620 3761 7284 电话+86512 6616 0490 成都西安成都市上东大街 246号新良西安市和平路 118 号和平银大厦2406室, 610012座1107室, 710001电话+86 28 8666 6877电话 +86 29 87512305 ( 技木规格如有变更,恕不另行通知。 ) ( 赛多利斯保留最终解释权和修改权。 ) ( 版本02|2022 ) 了解更多:www.sartorius.com Overview环境监测是无菌药品生产环境质量保证的重要环节。尤其是在没有最终灭菌步骤的无菌灌装线上,环境监测对产品安全至关重要,因此是质量控制策略的重要组成部分。一种典型的空气污染监测方法是首先进行抽空气,然后通过特殊的凝胶过滤器过滤。凝胶膜过滤器可以持续使用8小时,从而可以避免发生更换琼脂板等人为干预,将二次污染的风险降低到几乎为零。Download本篇《洁净室环境中的连续微生物空气监测》应用说明采用MD8 Airscan®系统,研究了对来自层流罩空气进行高效空气过滤HEPA-filtered,凝胶过滤器在8小时过滤期间捕获的生物体的回收率和存活能力,从而证明赛多利斯的凝胶膜能在整整8小时的轮班期间连续监测药品工业化生产环境中的空气,而且不需要人工干预。点击下载 获取全文简介下列研究的目的是通过确定被捕获的生物体是否能够承受长期的干燥压力,而且还能恢复原状,证明连续取样(和多取样点试验)能否对整个生产过程(8 h)提供有效监测。本研究采用MD8 Airscan® 系统对凝胶过滤器进行8小时连续空气取样,另外以并行运行的参考用过滤器作为参照物,对加压和未加压过滤器进行对比。通过计算CFU的数量,和确定已识别微生物种群的类属,证明了在连续长期取样期间微生物没有发生任何变化。MD8 Airscan®材料和方法本研究对在过滤空气的长期过滤过程中凝胶膜上微生物是否能保持存活能力进行了研究。首先,将测试用凝胶过滤器和参考用凝胶过滤器暴露在灭菌空气中30分钟。MD8 Airscan®空气取样器(气流速率设置为 2.0 m3/h(0,144 m/s))布置在非受控性实验室环境(高压室)中,相互间隔约 30 ~ 40 cm。该位置的相对湿度较高(~ 57 ± 6 %和温度:~ 21 ± 1 °C)。接下来,使用测试用过滤器,对过滤空气再取样8小时。参考用过滤器只进行30分钟的非无菌空气过滤,不再进一步通风。取样后直接将参考用过滤器置于大豆酪蛋白消化琼脂培养基上。在层流罩下过滤8小时后,测试用过滤器也放置在大豆酪蛋白消化琼脂培养基板上,在 32 °C下培育4天。计算产生的菌落数量,用CFU/m3 表示,共26次。然后,对比测试用过滤器和参考用过滤器的 CFU/m3。此外,为了确定微生物区系是否在长期连续取样期间发生了变化,确定了每个菌落的类属。结果图1显示了测试用过滤器(金色条,平均 = 69个菌落,sd = 51个菌落)和参考过滤器用(灰色条,平均 = 64个菌落,sd = 32个菌落)的平均CFU/m3。发现了5级空气中CFU/m3的平均差异(根据配对T测试,在统计学上不明显),但经对比测试用过滤器和参考用过滤器,未观察到总体变化趋势(见图2)。在12个案例中,测试用过滤器的CFU/m3 高于参考用过滤器,但13个案例的研究结果相反(见图2)。在非受控环境空气中,微生物自然存在较大的波动,这是造成测试用过滤器和参考用过滤器之间标准偏差的主要原因。图3和图4显示了具有代表性的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上配对测试用(左)和参考用(右)过滤器生长的微生物区系, 没有观察到测试用过滤器与参考用过滤器的微生物生长存在统计学上明显的差异。图5A和图5B所示的微生物区系的宏观比较得到的属类识别数据,证实了测试用和参考用过滤器上微生物种群类似这一视觉印象。图5A.测试用凝胶过滤器上生长的微生物种群的对比。生长在测试用过滤器上的微生物几乎均为球菌。此图显示了生长在测试用过滤器的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上的微生物的分类。图5B.参考用凝胶过滤器上生长的微生物种群的对比。生长在参考用过滤器上的微生物几乎均为球菌。此图显示了生长在参考用过滤器的大豆-酪蛋白消化琼脂培养基板上的微生物的分类。Conclusion实验结果表明,测试用(加压)过滤器与参考用(未加压)过滤器之间无统计学差异。测试用过滤器的CFU/m3数量与参考用过滤器相同(即,长期过滤过程中没有微生物死亡)。此外,无论是视觉比较还是宏观比较,无法检测到测试用过滤器与参考用过滤器上生长的菌群之间存在差异。加压凝胶过滤器与未加压凝胶过滤器之间没有统计学差异。总之,本研究表明加压凝胶过滤器与未加压凝胶过滤器之间没有统计学差异,从而证明赛多利斯生产的凝胶膜能在整整8小时的轮班期间连续监测药品工业化生产环境中的空气,而且不需要人工干预。更多详细解读 敬请下载全文
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