食品中甲醛次硫酸氢钠检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定-液相色谱法 甲醛次硫酸氢钠是一种有毒的工业用漂白剂，易溶于水，对人体有严重的毒副作用，是一种强致癌物质。对人体的肺、肝脏和肾脏损害极大，食品中掺入甲醛次硫酸氢钠可达到防腐增白，改善食品口感的目的，现在多有不法分子用于食品增白，造成了很大危害，国家严禁将其作为食品添加剂在食品中使用。 本实验参考国家标准 GB/T21126-2007《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》，适用于小麦粉、大米粉及其制品中残留甲醛及甲醛次硫酸氢钠含量的测定。 一、方法原理 在酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解释放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应，生成黄色的2，4-二硝基苯腙，用正已烷萃取后，经高效液相色谱仪分离，与标准甲醛衍生物的保留时间对照定性，用标准曲线法定量。 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪： LC220，配备紫外检测器； b.恒温水浴锅； c.乙腈：色谱纯； d.正己烷：分析纯； e.盐酸-氯化钠溶液：称取2g氯化钠于100mL容量瓶中，用少量水溶解，加6mL 37%盐酸，加水至刻度； f. 磷酸氢二钠溶液：称取18g Na2HPO412HzO，加水溶解并定容至100 mL； g. 衍生剂：称取经过纯化处理的2，4-二硝基苯肼(DNPH)200mg， 用乙腈溶解并定容至100mL； h. 甲醛标准使用液：准确量取一定量经标定的甲醛标准储备液，配置成 2ug/mL 的甲醛标准使用液，此标准使用液必须使用当天配制。 三、实验方法 3.1色谱参考条件 色谱柱： C18，4.6mm(i.d)x250mm； 流动相：乙腈+水(70+30)； 流速：1mL/min； 柱温：室温； 波长：355 nm； 3.2标准工作曲线绘制 准确量取 0.00 mL、0.25 mL、0.50mL、1.00mL、2.00 mL、4.00 mL 甲醛标准使用液于25 mL 比色管中(相当于0.0ug、0.5ug、1.0ug、2.0pg、4.0ug、8.0pg甲醛)，分别加入2mL盐酸-氯化钠溶液、1mL磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10mL，盖上塞子，摇匀。置于50℃水浴中加热40 min 后，取出冷却至室温。准确加入5.0 mL 正己烷，将比色管横置，水平方向轻轻振摇3-5次后，再将比色管倾斜放置，增加正己烷与水溶液的接触面积。在一个小时内，每隔5 min 轻轻振摇3-5次，然后再静置30 min， 取 20uL 正己烷萃取液进样。以所取甲醛标准使用液中甲醛的质量(以微克为单位)为横坐标，甲醛衍生物苯腙的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。 3.3样品制备 精确称取小麦粉、大米粉样品约 5g于150mL具塞三角瓶中，加入50mL盐酸-氯化钠溶液，振荡提取 40min。对于小麦粉或大米粉制品，称取 20g 于组织捣碎机中，加200mL盐酸-氯化钠溶液，2000r/min 捣碎5 min， 转入250mL 具塞三角瓶中，置于振荡机上振荡提取 40 min。将提取液倒入20 mL 离心管中，于10000r/min 离心 15 min， 上清液备用。 取2.0 mL样品处理所得上清液于25mL.比色管中，加入1mL 磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10mL，盖上塞子，摇匀。以下操作与标准使用液处理方法一致。最后取20uL 正己烷萃取液进样。 四、实验结果 4.1标准样品谱图 甲醛加标量为 2.0 ug的色谱图如图1所示： 保留时间 名称 峰面积% 峰面积 峰高 半高峰宽 -36 32 暴迟拙旺- 28 ~24 20 16 12 8 4 0 4 -min 4.572 甲醛衍生物 100 164215 27072 5.697 图1标准色谱图 4.2结果计算 样品中甲醛次硫酸氢钠含量(以甲醛计)按下式计算： 式中： C--样品中甲醛含量，单位为微克每克(ug/g)； mi一按甲醛衍生物苯腙峰面积，从标准工作曲线查得甲醛的质量，单位为微克(ug)； 50--样品加提取液体积，单位为毫升(mL)； 2-测定用样品提取液体积，单位为毫升(mL)； m-样品质量，单位为克(g)。 甲醛含量计算结果不超过 10ug/g时，报告结果为未检出。 【仪电分析】小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定-液相色谱法甲醛次硫酸氢钠是一种有毒的工业用漂白剂，易溶于水，对人体有严重的毒副作用，是一种强致癌物质。对人体的肺、肝脏和肾脏损害极大，食品中掺入甲醛次硫酸氢钠可达到防腐增白，改善食品口感的目的，现在多有不法分子用于食品增白，造成了很大危害，国家严禁将其作为食品添加剂在食品中使用。本实验参考国家标准GB/T 21126-2007《小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定》，适用于小麦粉、大米粉及其制品中残留甲醛及甲醛次硫酸氢钠含量的测定。一、方法原理    在酸性溶液中，样品中残留的甲醛次硫酸氢钠分解释放出的甲醛被水提取，提取后的甲醛与2，4-二硝基苯肼发生加成反应，生成黄色的2，4-二硝基苯腙，用正已烷萃取后，经高效液相色谱仪分离，与标准甲醛衍生物的保留时间对照定性，用标准曲线法定量。二、主要仪器及试剂a. 高效液相色谱仪： LC220，配备紫外检测器；b. 恒温水浴锅；c. 乙腈：色谱纯；d. 正己烷：分析纯 ；e. 盐酸-氯化钠溶液：称取2g氯化钠于100mL容量瓶中，用少量水溶解，加6mL 37%盐酸，加水至刻度；f. 磷酸氢二钠溶液：称取18g Na2HPO4·12H2O,加水溶解并定容至100 mL；g. 衍生剂：称取经过纯化处理的2，4-二硝基苯肼(DNPH)200 mg，用乙腈溶解并定容至100 mL；h. 甲醛标准使用液：准确量取一定量经标定的甲醛标准储备液，配置成2μg/mL的甲醛标准使用液，此标准使用液必须使用当天配制。三、实验方法3.1 色谱参考条件色谱柱：C18，4.6 mm(i.d)×250mm；流动相：乙腈+水(70+30)；流速：1 mL/min；柱温：室温；波长：355 nm；3.2 标准工作曲线绘制准确量取0.00 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL甲醛标准使用液于25 mL比色管中（相当于0.0μg、0.5μg、1.0μg、2.0μg、4.0μg、8.0μg甲醛），分别加入2mL盐酸-氯化钠溶液、1mL磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10 mL，盖上塞子，摇匀。置于50℃水浴中加热40 min后，取出冷却至室温。准确加入5.0 mL正己烷，将比色管横置，水平方向轻轻振摇3-5次后，再将比色管倾斜放置，增加正己烷与水溶液的接触面积。在一个小时内，每隔5 min轻轻振摇3-5次，然后再静置30 min，取20μL正己烷萃取液进样。以所取甲醛标准使用液中甲醛的质量（以微克为单位）为横坐标，甲醛衍生物苯腙的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。3.3 样品制备精确称取小麦粉、大米粉样品约5g于150mL具塞三角瓶中，加入50mL盐酸-氯化钠溶液，振荡提取40min。对于小麦粉或大米粉制品，称取20g于组织捣碎机中，加200mL盐酸-氯化钠溶液，2000r/min捣碎5 min，转入250mL具塞三角瓶中，置于振荡机上振荡提取40 min。将提取液倒入20 mL离心管中，于10000r/min离心15 min，上清液备用。取2.0 mL样品处理所得上清液于25mL.比色管中，加入l mL磷酸氢二钠溶液、0.5 mL衍生剂，补加水至10 mL，盖上塞子，摇匀。以下操作与标准使用液处理方法一致。最后取20μL正己烷萃取液进样。四、实验结果4.1 标准样品谱图甲醛加标量为2.0 μg的色谱图如图1所示： 保留时间名称峰面积%峰面积峰高半高峰宽4.572甲醛衍生物100164215270725.697图1 标准色谱图4.2结果计算样品中甲醛次硫酸氢钠含量（以甲醛计）按下式计算：c =式中：C—样品中甲醛含量，单位为微克每克(μg/g)；m1—按甲醛衍生物苯腙峰面积，从标准工作曲线查得甲醛的质量，单位为微克(μg)；50—样品加提取液体积，单位为毫升(mL)；2—测定用样品提取液体积，单位为毫升(mL)；m—样品质量，单位为克(g)。甲醛含量计算结果不超过10μg/g时，报告结果为未检出。