苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用的食品添加剂,也是衡量食品卫生质量的重要指标。苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用,糖精钠是合成甜味剂,甜度比蔗糖甜300-500倍。GB2760-2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定,超范围或者超限量使用都是违法的。GB5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定,有高效液相色谱法和高效气相色谱法,其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
【仪电分析】食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定-液相色谱法 苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用的食品添加剂,也是衡量食品卫生质量的重要指标。苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用,糖精钠是合成甜味剂,甜度比蔗糖甜300-500倍。GB2760-2016《食品安全国家标准食品剂加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定,超范围或者超限量使用都是违法的。 GB5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定,有高效液相色谱法和高效气相色谱法,其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。 本方案参考 GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》中第一法:液相色谱法,该法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。 -、方法原理 样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,采用液相色谱分离、紫外检测器检测,外标法定量。 二、主要仪器及试剂 a. 高效液相色谱仪: LC220,配备紫外检测器; b.自动进样器: AS2000; c.色谱柱: C18柱,4.6mmx250mm, 粒径为5 um; d.分析天平; e.涡旋振荡器; f.离心机; g.超声波发生器; h.苯甲酸、山梨酸、糖精钠水溶液混合溶液: p=1000mg/L; i.氨水; j.亚铁氰化钾; k.乙酸锌; 1.无水乙醇; m.正己烷; n.甲醇:色谱纯; o.乙酸铵:色谱纯; p.甲酸:色谱纯。 三、实验方法 3.1参考色谱条件 色谱柱 C18(250mmx4.6mmx5um) 流速 1mL/min 波 长 230nm 柱温 28℃或室温 进样量 10uL 流动相 甲醇+乙酸铵溶液=5+95。 注:当存在干扰峰或需要辅助定性时, 可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇+甲酸-乙酸铵溶液=8+92。 3.2标准系列的制备 3.2.1苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准中间溶液(200mg/L)):分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各 10.0mL 于 50mL容量瓶中,用水定容。于4℃贮存,保存期为3个月。 3.2.1苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准系列工作溶液:分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度分别为 0mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和 200mg/L 的混合标准系列工作溶液。临用现配。 3.3样品制备 3.3.1样品准备 取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀;奶酪、黄油、巧克力等采用50℃~60℃ 加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4℃保存,其他试样于-18℃保存。 3.3.2试样提取 a..一般性试样 准确角取约2g(精确到0.001 g) 试样于50 mL 具塞离心管中,加水约25mL, 涡旋混匀,于50℃水浴超声 20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液 2mL 和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min 离心5min, 将水相转移至 50mL 容量瓶中,于残渣中加水20mL, 涡旋混匀后超声5min, 于 8000r/min 离心5 min , 将水相转移到同一50 mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过 0.22 pm滤膜,待液相色谱测定。 注:碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。 b.含胶基的果冻、糖果等试样 准确取约2g(精确到0.001g)试式于 50 mL 具塞离心管中,加水约25 mL,涡旋混匀,于70℃水浴加热溶解试样,于50℃水浴超声 20 min, 之后的操作同2.2.1。 c.油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样 准确确取约2g(精确到 0.001 g)试样于 50 mL 具塞离心管中,加正已烷 10 mL,于60℃水浴加热约5 min, 并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)25 mL, 乙醇1mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声 20 min, 冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液2mL 和乙酸锌溶液2mL,混匀,,于8000 r/min 离心5 min,弃去有机相,水相转移至50mL容量瓶中,残渣同3.3.2(a)再提取一次后测定。 四、实验结果 4.1标准工作曲线 苯甲酸、山梨酸和糖精钠的标准工作曲线如图1-图3所示,其中苯甲酸线性回归方程为:y=27240.5x,相关系数r为0.9998。山梨酸线性回归方程为:y=53259.5x,相关系数r为0.9995。糖精钠线性回归方程为: y=17221x,相关系数r为0.9998。 响应值 图1苯甲酸标准工作曲线 响应值 图2山梨酸标准工作曲线 响应值 图3糖精钠标准工作曲线 4.2混合标准溶液图谱 浓度为 100mg/L 的混合标准溶液的色谱图如图4所示: 图4混合标准溶液色谱图 4.3样品色谱图 某气泡饮料的色谱图如图5所示: [mV] 图5气泡饮料样品色谱图 某维生素饮料的色谱图如图6所示: 图6维生素饮料样品色谱图 4.4结果计算 :2pxV公式: X=· m×1000 式中: X——试样中待测组分含量,单位为克每千克(g/kg); p—由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,.9单位为毫克每升(mg/L); V—-试样定容体积,单位为毫升(mL); m—-试样质量,单位为克(g); 1000——由 mg/kg 转换为 g/kg 的换算因子。 结果保留3位有效数字。 4.5实际样品测试结果 取某饮料样品,按照样品前处理步骤,对处理好的样品进行上上测定,测试结果未检出。 【仪电分析】食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 液相色谱法苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用的食品添加剂,也是衡量食品卫生质量的重要指标。苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用,糖精钠是合成甜味剂,甜度比蔗糖甜300-500倍。GB2760-2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定,超范围或者超限量使用都是违法的。GB5009.28-2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定,有高效液相色谱法和高效气相色谱法,其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。本方案参考GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》中第一法:液相色谱法,该法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。 一、方法原理样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,采用液相色谱分离、紫外检测器检测,外标法定量。 二、主要仪器及试剂a. 高效液相色谱仪:LC220,配备紫外检测器; b.自动进样器:AS2000;c.色谱柱:C18柱,4.6 mm×250 mm,粒径为5 µm; d.分析天平;e.涡旋振荡器;f.离心机;g.超声波发生器;h.苯甲酸、山梨酸、糖精钠水溶液混合溶液:ρ=1000mg/L;i.氨水;j.亚铁氰化钾;k.乙酸锌;l.无水乙醇;m.正己烷;n.甲醇:色谱纯;o.乙酸铵:色谱纯;p.甲酸:色谱纯。三、实验方法3.1 参考色谱条件色谱柱C18(250mm×4.6mm×5μm)流 速1mL/min波 长230nm柱 温28℃或室温进样量10μL流动相甲醇+乙酸铵溶液=5+95。注:当存在干扰峰或需要辅助定性时,可以采用加入甲酸的流动相来测定,如流动相:甲醇+甲酸-乙酸铵溶液=8+92。3.2 标准系列的制备3.2.1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准中间溶液(200mg/L)):分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。于4 ℃贮存,保存期为3个月。 3.2.2 苯甲酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)混合标准系列工作溶液:分别准确吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度分别为 0 mg/L、1.00 mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。 3.3 样品制备3.3.1 样品准备取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀;奶酪、黄油、巧克力等采用50 ℃~60 ℃加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4 ℃保存,其他试样于-18 ℃保存。3.3.2 试样提取a. 一般性试样准确称取约2 g(精确到0.001 g)试样于50 mL具塞离心管中,加水约25 mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min离心5min,将水相转移至50mL容量瓶中,于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5min,于8000r/min离心5 min ,将水相转移到同一50 mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过0.22 pm滤膜,待液相色谱测定。注:碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。b. 含胶基的果冻 、糖果等试样准确称取约2 g(精确到0.001 g)试样于50 mL具塞离心管中,加水约25 mL,涡旋混匀,于70℃水浴加热溶解试样,于50℃水浴超声20 min,之后的操作同2.2.1。c. 油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样准确称取约2 g(精确到0.001 g)试样于50 mL具塞离心管中,加正已烷10 mL,于60 ℃水浴加热约5 min,并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)25 mL,乙醇1 mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20 min,冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液2 mL和乙酸锌溶液2 mL,混匀,于8 000 r/min 离心5 min,弃去有机相,水相转移至50 mL容量瓶中,残渣同3.3.2(a)再提取一次后测定。四、实验结果4.1 标准工作曲线苯甲酸、山梨酸和糖精钠的标准工作曲线如图1-图3所示,其中苯甲酸线性回归方程为:y=27240.5x,相关系数r为0.9998。山梨酸线性回归方程为:y=53259.5x,相关系数r为0.9995。糖精钠线性回归方程为:y=17221x,相关系数r为0.9998。 图1 苯甲酸标准工作曲线图2 山梨酸标准工作曲线 图3 糖精钠标准工作曲线4.2 混合标准溶液图谱浓度为100mg/L的混合标准溶液的色谱图如图4所示: 图4 混合标准溶液色谱图4.3 样品色谱图某气泡饮料的色谱图如图5所示:图5 气泡饮料样品色谱图某维生素饮料的色谱图如图6所示:图6 维生素饮料样品色谱图4.4 结果计算公式:式中:X——试样中待测组分含量,单位为克每千克(g/kg);ρ——由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);V——试样定容体积,单位为毫升(mL);m——试样质量,单位为克(g);1 000——由mg/kg转换为g/kg的换算因子。结果保留3位有效数字。 4.5 实际样品测试结果取某饮料样品,按照样品前处理步骤,对处理好的样品进行上机测定,测试结果未检出。
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