乳制品中三聚氰胺检测方案(液相色谱仪)

仪电分析 【仪电分析】三聚氰胺快速检测-l——液相法 本方案案据 GB/T 22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速检测液相法》，测试原料乳中的三聚氰胺含量。用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器检测，外标法定量。 一、主要仪器和试剂 a. LC220高效液相色谱仪，紫外检测器； b. SCX (强阳离子交换)柱，250mm*4.6mm 5um； c.三聚氰胺标准品； d.乙腈(色谱纯)。 2.1色谱条件 色谱柱 SCX (250mm*4.6mm 5um) 流速 1.5mL/min 波长 240nm 柱温 室温 进样量 20uL 流动相 磷酸盐缓冲溶液：乙腈=70：30 2.2试剂配制 2.2.13三聚氰胺标准贮备溶液(1000 mg/L) ： 称取100mg (准确至0.1mg))三聚氰胺标准物质，用水完完溶解后，100mL容量瓶中定容至刻度，混匀，4℃条件下避光保存，有效期为1个月。 2.2.2标准溶液A(200mg/L)： 准确移取 20.0mL标准贮备溶液于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 2.2.3标准溶液B (0.50mg/L)： 准确移取 0.25mL标准溶液A于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。 2.3按下表分别配置高标标准曲线系列浓度和低标标准曲线系列浓度。 系列浓度(mg/L) 高浓度曲线 0.2 0.5 2.0 5.0 20.0 50.0 低浓度曲线 0.005 0.01 0.02 0.1 0.2 2.4样品处理 称取混合均匀的15g(精确至0.01g)原料乳样品，置于50mL具塞刻度试管中，加入30mL乙腈，剧烈振荡6min， 加水定容至满刻度，充分混匀后静置 3min， 用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后待测。 三、实验图谱汇总 3.1实验图谱 标准样品图谱 [mV] 原料乳样品谱图 仪电分析 [mV] 空白试样谱图 LmV」 空白加标谱图 [mV] [min] 3.2标准曲线 高浓度曲线 编号\标题 X Y 1 0.200 7743.329 2 0.500 19379.520 3 2.000 76637.188 4 5.000 191398.719 5 20.000 763880.125 6 50.000 1832160.375 7 8 9 10 低浓度曲线 3.3重复性测试 回 X 标题 组分1->时间 组分1->浓度 组分1->面积 ]-重复性OC 4.2194 0.0000 1830838.6250 ：]-重复性OC 4.2194 0.0000 1842388.6250 3]-重复性OC 4.2278 0.0000 1832919.5000 1]-重复性OC 4.2222 0.0000 1838525.3750 5]-重复性OC 4.2153 0.0000 1828983.7500 3]-重复性OC 4.2278 0.0000 1827113.3750 7 RSD=0.0000 RSI=0.0032 8 9 10 11 3.4结果计算 式中： X——原料乳中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)； c——从校准曲线得到的三聚氰胺溶液的浓度，单位为毫克每升(mg/L)； V——试样定容体积，单位为毫升(mL)； M——样品称量质量，单位为克(g)。 原料乳中未检出三聚氰胺，加标回收率计算如下： 微信公众号 【仪电分析】乳制品三聚氰胺快速检测—高效液相色谱法本方案依据GB/T 22400-2008《原料乳中三聚氰胺快速检测液相法》，测试原料乳中的三聚氰胺含量。用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器检测，外标法定量。一、主要仪器和试剂a. LC220 高效液相色谱仪，配紫外检测器；b. SCX（强阳离子交换）柱，250mm*4.6mm 5μm；c. 三聚氰胺标准品；d. 乙腈（色谱纯）。二、实验方法2.1 色谱条件色谱柱SCX（250mm*4.6mm 5μm）流速1.5mL/min波长240nm柱温室温进样量20μL流动相磷酸盐缓冲溶液:乙腈=70:302.2 试剂配制2.2.1 三聚氰胺标准贮备溶液（1000 mg/L）：称取100mg（准确至0.1mg）三聚氰胺标准物质，用水完全溶解后，100mL 容量瓶中定容至刻度，混匀，4℃条件下避光保存，有效期为1 个月。2.2.2 标准溶液A（200 mg/L）：准确移取20.0mL 标准贮备溶液于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。2.2.3 标准溶液B（0. 50mg/L）：准确移取0.25mL 标准溶液A 于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。2.3 按下表分别配置高标标准曲线系列浓度和低标标准曲线系列浓度。曲线类型系列浓度（mg/L）高浓度曲线0.20.52.05.020.050.0低浓度曲线0.0050.010.020.10.2/2.4 样品处理称取混合均匀的15g（精确至0.01g）原料乳样品，置于50mL 具塞刻度试管中，加入30mL 乙腈，剧烈振荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后待测。三、实验结果3.1 三聚氰胺标准样品三聚氰胺标准样品图谱如图1所示。图1 三聚氰胺标准样品图谱3.2 标准曲线三聚氰胺高浓度标准曲线和低浓度标准曲线分别如图2、3所示。图2 高浓度三聚氰胺标准曲线图3 低浓度三聚氰胺标准曲线3.3 重复性试验对50μg/mL三聚氰胺标准溶液重复测定六次，计算相对标准偏差RSD=0.32%，测试结果如图4所示。图4 50μg/mL三聚氰胺标准溶液重复性试验结果3.4 样品测试图谱对某品牌原料乳进行测试，试验结果显示样品中无三聚氰胺检出，样品图谱如图5所示。图5 某品牌原料乳测试图谱3.5 空白加标试验对空白试样进行加标试验，空白试样及加标样品测试结果分别如图6、7所示。图6 空白试样测试图谱图7 空白试样加标测试谱图加标回收率：