猪尿中巴氯酚残留检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-603Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-565 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn LCMSMS测定猪尿中巴氯酚残留 LCMSMS-565 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四四杆质谱联用测定猪尿中巴氯酚残留量的方法，该方法可在 8 min 内完成对待测物的检测。巴氯酚在 0.1 ug/L~50.0 ug/L浓度范围内线性良好，校准曲线线性相关系数r在0.999以上，且精密度和回收率实验结果良好。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于猪尿中的巴氯酚残留的快速检测。 关键词：三重四极杆质谱猪尿 巴氯酚 巴氯酚 (Baclofen)，化学名4-氨基-3-(4-氯苯基)-丁酸(结构式见图1)，是一种人用处方药，广泛应用于痉挛症的治疗，也是一种中枢神经镇静剂。研究结果表明，它具有安定、抗惊厥、促进生长激素分泌等作用。在动物上非法使用，具有抗热应激、增加采食量、促进动物生长及提高瘦肉率等功效。目前，巴氯酚并未被批准为饲料添加剂使用，动物性食品中的巴氯酒残留将对消费者造成较大危害。 本文参照国家标准检测方法《猪尿中巴氯酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法》征求意见稿，试料中残留的巴氯酚，经酸化、提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。此方法可 实验部分 从养殖源头监测兽药残留情况，另外具有灵敏度高，分析时间短，结果准确的特点，可应用于猪尿中的巴氯酚检测。 1巴氯酚的结构式 本实验采用岛津 Nexera LC-40 X3与三重四极杆质谱仪LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器：SCL-40 自动进样器： SIL-40C X3 输液泵： LC-40BX3 质谱仪： LCMS-8050 柱温箱：CTO-40S 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.99 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 ((100 mm x 2.1 mml.D.，2um， 岛津(上海))实验器材有限公司， P/N： 227-30001-04) 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液，B相-甲醇 流速：0.25mL/min 柱温：35℃ 进样体积：5uL 洗脱方式：梯度洗脱，初始浓度为B相20%，时间程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 3.00 Pumps Pump B Conc. 50 4.00 Pumps Pump B Conc. 90 4.50 Pumps Pump BConc. 90 5.00 Pumps Pump B Conc. 20 8.00 Controller Stop 碰撞童：氩气(230 kPa) 表2 MRM 参数 化合物名称 英文名称 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 巴氯酚 Baclofen 1134-47-0 214.0 151.0 -16 -18 -29 179.0 -16 -14 -18 巴氯酚-D4 D4-Baclofen 218.0 155.1 -16 -19 -30 *表示定量离子 标准品溶液的配制及样品前处理 标准工作溶液配制： 巴氯芬标准贮备液 (1mg/mL)：取巴氯芬标准品约10 mg， 精密称定，于10 mL容量瓶中，加1 mol/L氢氧化钠溶液1mL使溶解，用甲醇稀释至刻度。 巴氯芬-D4贮备液(1mg/mL)：取巴氯芬-D4对照品约10mg， 精密称定，， 于10mL容量瓶中，加1mol/L 氢氧化钠溶液1mL使溶解，用甲醇稀释至刻度。 混合标准工作液：分别精密量取巴氯芬和巴氯芬-D4溶液适量，用0.2%甲酸-乙腈溶液(8：2)配制成含巴氯芬 -D4 10 ng/mL， 含巴氯芬分别为1.0、2.0、5.0、10.0、25.0和50.0 ng/mL的系列混合标准工作液。 样品前处理： 结果与讨论 3.1巴氯酚标准溶液谱图 9.56e4 ISTD 218.00>155.10 (+) 1.99e5 图2 1 ng/mL巴氯酚标准品溶液质量色谱图(内标巴氯酚-D410 ng/mL) 3.2线性关系 将1.0、2.0、5.0、10.0、25.0和50.0 ng/mL的系列混合标准工作液(内标10 ng/mL) 按1.2中的分析条件进行测定，内标法定量。以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，绘制校准曲线如图3所示；所得校准曲线线性关系良好，线性方程为Y=(0.4619613)X+(-0.03947536)，相关系数R²=0.9994，准确度在95.8~117.4%之间。 图3 巴氯酚校准曲线 3.3精密度 对1 ug/L、10 ug/L和50 ug/L 三个浓度标准工作液连续测定6次，考察仪器精密度。结果显示：不同浓度标准品保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.05%~0.07%和0.40%~2.84%之间，仪器精密度良好。 表3 巴氯酚保留时间和峰面积重复性结果(n=6) Conc.(ug/L) RSD% (R.T.) RSD% (Area) 1.0 0.06 2.84 10.0 0.07 0.40 50.0 0.05 1.30 3.4专属性和灵敏度 图4和图5分别为空白样品和0.05 ug/L巴氯酚 MRM 色谱图，可见空白样品无干扰。根据检出限MDL = 3.3S/N， 定量限 LOQ=10 S/N 计算检出限和定量限，分别为8.21和24.9 ng/L. Q214.00>151.00(+) 图4 空白样品 MRM色谱图 图5 0.05 pg/L 巴氯酚标样 MRM 色谱图 3.5回收率 取空白猪尿样品2mL，加入少量巴氯酚标准工作液，使加标浓度为1、5和25 ng/mL，样品经提取与净化后，按照1.2中的分析条件测定巴氯酚的加标回收率，平行测定3次。巴氯酚的回收率在99.5~109.4%之间，具体结果见表4. 表4巴氯酚回收率结果(n=3) 加标浓度 (ng/mL) 回收率 (%) RSD(%) 1.0 99.5 5.13 5 105.3 3.13 25 109.4 2.60 结论 依据国家标准《猪尿中巴氯酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法》征求意见稿，建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定猪尿中巴氯酚残留的方法。猪尿经提取和净化后，用超高效液相色谱 LC-40进行分离，三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 进行定性和定量分析。巴氯酚在1 ug/L~50 ug/L浓度范围内线性良好；对不同浓度的标准工作液连续测定6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.05%~0.07%和0.40%~2.84%之间。添加浓度为1、5和25 ng/mL尿液样品，回收率在99.5~109.4%之间。本方法操作简单，可用于猪尿中巴氯酚的快速高灵敏度检测。 岛津应用云 此方法可从养殖源头监测兽药残留情况，另外具有灵敏度高，分析时间短，结果准确的特点。巴氯酚在1 μg/L~50 μg/L浓度范围内线性良好；对不同浓度的标准工作液连续测定6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.05%~0.07%和0.40%~2.84%之间。添加浓度为1、5和25 ng/mL尿液样品，回收率在99.5~109.4%之间。本方法操作简单，可用于猪尿中巴氯酚的快速高灵敏度检测。