防晒乳液中3-亚苄基樟脑等22种防晒剂成分检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-595Excellence in Science Excellence in ScienceLC-247 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 液相色谱法测定化妆品中3-亚苄基樟脑等22种防晒剂的含量 LC-247 摘要：本文参照国家药品监督管理局2019年第40号通告附件内容《化妆品中3-亚苄基樟樟等22种防晒剂的检测方法》，对化妆品中22种防晒剂成分进行 HPLC分析测定。实验结果表明，在标准规定范围内线性关系良好，且相关系数r均大于0.99。精密度实验中，22种防晒剂成分的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.09%~0.51%和0.97%~4.18%之间。对实际样品进行1.0 mg/g、5.0 mg/g、10.0 mg/g的混合标样添加测试，22种防晒剂成分的回收率分布在85.06%~113.30%之间。对仪器灵敏度的考察，22种防晒剂物质的LOD 在 0.03~0.15 ug/mL (0.003%~0.015%)， LOQ 在 0.10~0.48 ug/mL (0.010%~0.048%)，满足《化妆品安全技术规范》中对22种防晒剂成分的检测要求。 关键词： LC-2050C3D液相色谱化妆品22种防晒剂 防晒剂是指利用光的吸收、反射或散射作用，以保护皮肤免受特定紫外线所带来的伤害或保护产品本身而在化妆品中加入的物质。防晒化妆品在我国属于特殊用途化妆品，是指能够防止或减轻由于紫外线辐射而造成的皮肤损害的一类化妆品。 我国2015年版《化妆品安全技术规范》 (以下简称为《规范》)中规定，防晒化妆品中使用的防晒剂成分必须是该《规范》中准许添加和使用的27项准 用防晒剂成分，而且使用条件应满足《规范》的要求，以确保产品使用的安全性。这些防晒剂可分为无机防晒剂和有机防晒剂两大类。 有机防晒剂常用的检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、超高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法和气相色谱-质谱联用法。本文使用岛津液相色谱系统，采用高效液相色谱法为有机防晒型化妆姑提供可靠快捷的分析方案。 实验部分 1.1仪器配置 本实验使用岛津LC-2050C 3D 高效液相色谱仪。 1.2分析条件 液相色谱条件1： (测定3-亚苄基樟脑等21种防晒剂的色谱条件) 色谱柱： Shim-pack GIS (250 mm×4.6 mmI.D.， 5 um) 流动相：A相：甲醇，B相：四氢呋喃，C相：水+高氯酸=300+0.25 流速：1.0 mL/min 进样体积：10uL 柱温：35℃ 检测波长：311nm 洗脱方式：梯度洗脱，A相初始浓度为18%，B相初始浓度为2%， C相初始浓度为80%，时间程序见表1。 表1 21种防晒剂成分梯度洗脱时间程序 Time(min) Pump A Conc. Pump B Conc. Pump C Conc. 4.00 6 25 69 8.00 25 45 30 16.00 25 45 30 20.00 20 40 40 液相色谱条件2： (测定苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂的色谱条件) 色谱柱： Shim-pack GIS (250 mm×4.6 mml.D.， 5 um) 流动相：A相：甲醇，B相：0.02mol/L 乙酸铵溶液 流速：1.0 mL/min 进样体积：10uL 柱温：35℃ 检测波长：311nm 洗脱方式：梯度洗脱，A相初始浓度为5%，B相初始浓度为95%，时间程序见表2。 表2苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠成分梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 8.00 Pumps Pump B Conc. 0 9.00 Pumps Pump B Conc. 95 20.00 Controller Stop 1.3混合标准溶液配置 参照国家药品监督管理局2019年第40号通告的附件内容《化妆品中3-亚苄基樟脑等22种防晒剂的检测方法》，使用混合溶剂1将21种防晒剂成分进行逐级稀释，得到浓度分别为 0.2 ug/mL、0.5 ug/mL、1.0 ug/mL、2.0 ug/mL、5.0 ug/mL、10.0 ug/mL、20.0 ug/mL 的混合标准工作溶液。使用混合溶剂2将苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂成分进行逐级稀释，得到浓度分别为 0.1 ug/mL、0.2 ug/mL、0.5 ug/mL、1.0ug/mL、2.0 ug/mL、5.0 ug/mL、10.0 ug/mL、20.0 ug/mL 的标准工作溶液。 1.4样品前处理方法 参照国家药品监督管理局2019年第40号通告的附件内容《化妆品中3-亚苄基樟脑等22种防晒剂的检测方法》，称取样品0.25g(精确到0.0001g)于25mL具塞比色管中，加入混合溶剂*至刻度，混匀超声30 min。精密移取此溶液1mL，于10mL具塞比色管中，再用混合溶剂*稀释至刻度，摇匀(必要时可离心)，后经0.45 um 滤膜过滤，取滤液作为待测溶液上机分析。 注：检测21种防晒剂成分，前处理的方法选择使用混合溶剂1做萃取与稀释；检测苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂成分，前处理的方法选择使用混合溶剂2做萃取与稀释。 结果与讨论 2.13-亚苄基樟脑等21种防晒剂成分的混合标准溶液色谱图 照((1.3)配制成21种防晒剂成分混合标准溶液1.0 ug/mL， 进行上机分析，得到21种防晒剂成分的混合标准物质色谱图，详见图1 图13-亚苄基樟脑等21种防剂成分的混合标准溶液色谱图 1.苯基苯并咪唑磺酸；2.对苯二亚甲基二樟脑磺酸；3.二苯酮-4；4.樟脑苯扎铵甲基硫酸盐；5.亚苄基樟脑磺酸；6.二乙基己基丁酰胺基三嗪酮；7.二苯酮-3；8.3-亚苄基樟脑；9.p-甲氧基肉桂酸异戊酯；10.4-甲基苄亚基樟脑；11.二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯；12.PABA乙基己酯；13.丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷；14.奥克立林；15.甲氧基肉桂酸乙基己酯；16.胡莫柳酯；16'.胡莫柳酯异构体；17.水杨酸乙基己酯；18.双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪；19.乙基己基三嗪酮；20.甲酚曲唑三硅氧烷；21.亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚。 2.2苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂成分的标准溶液色谱图 按照(1.3)配制成苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂成分标准溶液1.0 ug/mL，进行上机分析，得到苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠防晒剂成分的标准物质色谱图，详见图2。 图22苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠内(22#)防晒剂成分的标准溶液色谱图 2.3标准曲线线性范围与精密度考察 将按照(1.3)方法配制的标准系列溶液，进行上机分析，可得出各化合物的线性范围与线性关系。分别取0.5ug/mL、2.0 ug/mL、10.0 ug/mL的标准溶液，注入液相色谱仪，平行测定6次，三个浓度点的精确度范围分别在 89.9%-91.4%、92.4%-93.8%、90.7%-91.6%；计算保留时间(RT)和峰面积(Area) 两者的 RSD%。结果显示各物质的保留时间(RT)的 RSD 在0.09%~0.51%，峰面积(Area)的 RSD 在0.97%~4.18%，实验结果表明精密度满足该实验需求，具体结果详见表3. 图322种防晒剂成分中部分物质的校准曲线图 表322种防晒剂成分的线性关系及精密度考察结果 (n=6) 线性方程 线性 相关 准确度 RSD((%) 号 化合物 范围 系数 0.5 pg/mL 2.0pg/mL 1 10.0 ug/mL (%) (ug/mL) R RT A RT A RT A 1 3-亚苄基樟脑 Y=(26059.2)X+(356.149) 0.5~20 0.9994 90.2~106.9 0.42 1.19 0.26 0.97 0.49 1.64 2 4-甲基苄亚基樟脑 Y=(37277.5)X+(-1256.51) 0.5~20 0.9998 91.5~107.9 0.11 2.38 0.10 2.88 0.10 2.48 3 二苯酮-3 Y=(17508.8)X+(4298.43) 0.5~20 0.9968 93.1~106.5 0.10 1.99 0.11 1.84 0.09 1.30 4 二苯酮-4 Y=(12128.4)X+ (559.554) 0.5~20 0.9973 93.4~109.6 0.11 2.06 0.11 1.50 0.09 1.12 5 亚苄基樟脑磺酸 Y=(28009.2)X+(504.374) 0.5~20 0.9998 91.7~110.8 0.12 4.15 0.13 2.16 0.09 1.80 6 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 Y=(1460.43)X+(150.017) 0.5~20 0.9983 91.1~110.6 0.12 1.82 0.13 1.13 0.09 1.90 7 丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷 Y=(10214.5)X+(1426.54) 0.5~20 0.9995 95.8~104.6 0.13 1.91 0.13 1.34 0.10 1.53 8 樟脑苯扎铵甲基硫酸盐 Y= (9569.15)X+(771.258) 0.5~20 0.9994 90.9~102.5 0.14 1.99 0.14 1.41 0.11 0.99 9 二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯 Y=(6336.82)X+(1448.10) 0.5~20 0.9998 87.1~108.5 C0.13 1.72 0.15 1.48 0.11 1.77 10 二乙基己基丁酰胺基三嗪酮 Y=(2222.12)X+(-1132.65) 0.2~20 0.9979 89.2~106.9 0.42 1.19 0.45 1.22 0.29 1.00 11 甲酚曲唑三硅氧烷 Y=(4324.68)X+(-834.871) 0.5~10 0.9993 991.5~107.9 0.11 2.38 0.14 2.41 0.13 2.91 12 二甲基 PABA 乙基己酯 Y=(54868.2)X+(-316.698) 0.5~20 0.9998 93.9~106.5 0.10 1.99 0.13 2.02 0.14 1.87 13 甲氧基肉桂酸乙基己酯 Y=(52190.2)X+(-24.3929) 0.5~20 0.9998 90.4~106.9 0.11 2.06 0.14 2.09 0.14 1.53 14 水杨酸乙基己酯 Y=(6691.18)X+(129.516) 0.5~10 0.9999 91.7~110.8 0.12 4.15 0.15 4.18 0.16 2.19 15 乙基己基三嗪酮 Y=(82758.4)X+(-5975.74) 0.2~20 0.9997 92.1~110.0 0.12 1.82 0.15 1.85 0.16 1.16 16 胡莫柳酯 Y=(3971.66)X+(331.136) 0.5~10 0.9993 90.2~106.9 0.13 1.91 0.16 1.94 0.16 1.37 16 胡莫柳酯异构体 Y=(876.142)X+(-284.239) 0.5~20 0.9989 88.5~107.30.28 3.14 0.39 1.89 0.41 3.45 17 对甲氧基肉桂酸异戊酯 Y=(53642.3)X+(-801.807) 0.2~20 0.9998 89.9~106.5 0.16 2.01 0.19 1.43 0.13 1.01 序 号 线性方程 线性 相关 准确度 RSD((%) 化合物 范围 系数 0.5pg/mL 2.0ug/mL 10.0 ug/mL (%) (ug/mL) R RT A RT A RT A 18 亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 Y=(25340.9)X+(-232.390) 0.2~20 0.9998 91.4~109.2 0.15 1.74 0.17 1.50 0.13 1.79 19 奥克立林 Y=(15516.0)X+(5401.67) 0.5~20 0.9995 90.7~110.6 0.44 1.21 0.28 0.99 0.51 1.66 20 苯基苯并咪唑磺酸 Y=(35598.4)X+(8144.71) 0.5~20 0.9999 92.1~108.0 0.13 2.40 0.12 2.90 0.12 2.50 21 对苯二亚甲基二樟脑磺酸 Y=(6993.24)X+(-968.104) 0.5~20 0.9996 89.1~104.1 0.12 2.01 0.13 1.86 0.11 1.32 22 苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠 Y=(13136.7)X+(-2078.65) 0.1~20 0.9996 9 91.9~102.9 0.13 2.08 0.13 1.52 0.11 1.14 2.4实际样品测试及加标回收率考察 采用(1.2)方法测定市售某防晒化妆品，检出两种防晒剂成分，样品色谱图见图4与图6；并在该样品中分别精密加入混合标准品，加标量分别为1mg/g、5 mg/g和10 mg/g，制作三份加标回收样品，样品加标色谱图见图5与图7，按(1.4)方法进行样品前处理，使用混合标准曲线进行加标后样品回收率的计算，各化合物的回收率范围在85.06%~113.30%之间，具体结果详见表4。 7 6 图4 某化妆品提取液按照((1.2)1中液相色谱条件1测定的色谱图(样品) 图5某化妆品提取液加标21种防晒剂成分10 mg/g后按照(1.2)中液相色谱条件1测定的色谱图 图6 某化妆品提取液按照(1.2)中液相色谱条件2测定的色谱图(样品) 图7某化妆品提取液加标第22#防晒剂成分10 mg/g后按照(1.2)中液相色谱条件2测定的色谱图 2.5检出限和定量限 分别采用0.5 ug/mL 的21种防晒剂成分混标溶液与 0.1 ug/mL 的苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠标准溶液作为上机分析溶液，进行仪器灵敏度的考察，并且通过软件计算得出仪器检出限和定量限结果，具体数据详见表4。在上述条件下，22种防晒剂物质的 LOD 在0.03~0.15 ug/mL (0.003%~0.015%)， LOQ在0.10~0.48 ug/mL(0.010%~0.048%) 表4 实际样品中22种化合物加标回收率测定结果及检出限定量限 序号 化合物 含量(%) 加标回收率(%) 检出限 定量限 1.0(mg/g) 5.0(mg/g) 10 (mg/g) (ug/mL) (ug/mL) 1 3-亚苄基樟脑 N.D. 91.10 99.30 89.12 0.12 0.41 2 4-甲基苄亚基樟脑 N.D. 85.30 87.84 87.02 0.10 0.32 3 二苯酮-3 0.48 85.80 93.44 86.85 0.10 0.32 4 二苯酮-4 N.D. 87.60 93.04 88.97 0.11 0.35 5 亚苄基脑磺酸 N.D. 90.40 98.08 88.46 0.08 0.25 6 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 N.D. 109.30 106.18 100.32 0.10 0.32 7 丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷 N.D. 102.10 111.40 96.53 0.15 0.48 8 樟脑苯扎铵甲基硫酸盐 N.D. 96.40 97.88 89.45 0.11 0.35 9 二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯 N.D. 97.20 99.16 89.21 0.15 0.48 序号 化合物 含量(%) 加标回收率(.(%) 检出限 定量限 1.0(mg/g) 5.0(mg/g) 10 (mg/g) (ug/mL) (ug/mL) 10 二乙基己基丁酰胺基三嗪酮 0.85 94.70 101.08 92.87 0.05 0.18 11 甲酚曲唑三硅氧烷 N.D. 89.00 96.70 92.64 0.13 0.43 12 二甲基 PABA 乙基己酯 N.D. 106.40 101.90 99.10 0.09 0.28 13 甲氧基肉桂酸乙基己酯 N.D. 112.00 100.96 95.14 0.12 0.39 14 水杨酸乙基己酯 N.D 87.10 92.72 86.80 0.14 0.46 15 乙基己基三嗪酮 N.D. 87.30 95.58 90.22 0.05 0.18 16 胡莫柳酯 N.D. 88.70 87.16 92.07 0.15 0.48 16 胡莫柳酯异构体 N.D. 85.32 89.43 95.26 0.15 0.48 17 对甲氧基肉桂酸异戊酯 N.D. 113.30 105.34 107.42 0.06 0.20 18 亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 N.D. 98.20 103.86 103.13 0.06 0.20 19 奥克立林 N.D. 86.40 91.96 85.06 0.13 0.42 20 苯基苯并咪唑磺酸 N.D. 101.30 99.70 89.80 0.05 0.18 21 对苯二亚甲基二樟脑磺酸 N.D. 109.01 106.40 108.66 0.13 0.43 22 苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠 N.D. 94.40 96.06 94.61 0.03 0.10 注：N.D.表示未检出。 结论 本文采用岛津 LC-2050C 3D系列高效液相色谱仪，参照国家药品监督管理局2019年第40号通告附件内容，对化妆品中22种防晒剂成分进行分析测定。实验结果表明，22种防晒剂成分中分别有1种物质在0.1~20.0ug/mL、有4种物质在0.2~20.0 ug/mL、有18种物质在 0.5~20.0 ug/mL 的浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，且相关系数r均大于0.99。精密度实验中，22种防晒剂成分的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.09%~0.51%和0.97%~4.18%之间。在样品中分别进行混合标准品1.0 mg/g、5.0 mg/g、10.0mg/g的添加量下，22种防晒剂成分的回收率分布在85.06%~113.30%之间。仪器灵敏度的考察，22种防晒剂物质的 LOD 在 0.03~0.15 ug/mL (0.003%~0.015%)， LOQ在 0.10~0.48 ug/mL (0.010%~0.048%)，满足《化妆品安全技术规范》中对22种防晒剂成分的检测要求。岛津LC-2050C 3D 高效液相色谱系统具有分析速度快、稳定性高的特点，适用于化妆品及药品等的分析检验工作。 岛津应用云 本文采用岛津LC-2050C 3D系列高效液相色谱仪，参照国家药品监督管理局2019年第40号通告附件内容，对化妆品中22种防晒剂成分进行分析测定。实验结果表明，22种防晒剂成分在相应浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，且相关系数r均大于0.99。精密度实验中，22种防晒剂成分的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.09%~0.51%和0.97%~4.18%之间。在样品中分别进行低、中、高浓度加标回收率的测定，22种防晒剂成分的回收率均分布在85.06%~113.30%之间。仪器灵敏度的考察，22种防晒剂物质的LOD在0.03~0.15 μg/mL（0.003%~0.015%），LOQ在0.10~0.48 μg/mL（0.010%~0.048%）范围，满足《化妆品安全技术规范》中对22种防晒剂成分的检测要求。岛津LC-2050C 3D高效液相色谱系统具有分析速度快、稳定性高的特点，适用于化妆品及药品等的分析检验工作。