化妆品中9种挥发性亚硝胺检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-047Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-055 田岛津全球应用技术开发支持中心上海市徐余区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn 三重四极杆气质联用仪测定化妆品中挥发性亚硝胺含量 GCMSMS-055 摘要：本文建立了三重四极杆气质联用仪测定化妆品中挥发性亚硝胺含量的方法。样品经30%甲醇水溶液涡旋提取，离心后，用HLB小柱净化，浓缩后用 GC-MS/MS 分离和检测。9种亚硝胺化合物在 10~200 pg/L 浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以以，样品加标回收率在85.7~118.1%之间，对10 ug/L 亚硝胺混合标准溶液连续5次进样，峰面积相对标准偏差均小于5.0%，精密度良好。 关键词：三重四极杆气质联用仪亚硝胺 亚硝基化合物是一类很强的化学致癌物质，包含亚硝胺和亚硝酰胺两类化合物，通常泛称为亚硝胺，它们能诱发许多动物恶性肿瘤。亚硝胺很容易由前身物仲胺和亚硝酸盐反应生成，无论在实验室和自然条件下还是在人体和动物体内，生成反应均能顺利进行。因此，亚硝胺在自然界中分布广泛，在土壤、工业废水、空气以及烟草、熏肉、腌菜、啤酒等视频饮料中都发现了这类物质。亚硝胺可经皮肤吸收进入人体，有研究发现，皮肤接触化妆品后，在尿中能检出N-亚硝基二乙醇胺。检测环境中的亚硝胺及其前身物的种类和数量，是恶性肿瘤流行病学和病因学的重要研究内容之一。因此，化妆品中亚硝胺的监测也成为化妆品工业中一个令人关注 实验部分 1.1仪器与试剂 仪器：岛津GCMS-TQ8030 试剂：甲醇(色谱纯)、水(超纯水)、二氯甲烷(色谱纯) 1.2分析条件 色谱柱： WONDACAP WAX(30 mx0.25 mmx0.25um)(日本GL公司) 进样口温度：230℃ 1.3样品前处理 的主要问题。 我国化妆品卫生规范、欧盟化妆品法规(EC1223/2009) 及东盟化妆品法规中均明确规定亚硝胺类化合物为化妆品组分中禁用物质，美国食品药品监督管理局颁布的化妆品手册(CosmeticHandbook)和加拿大卫生部颁布的化妆品成分热点清单 (CosmeticIngredient Hotlist)中也规定亚硝胺类化合物为化妆品禁用组分。 本文采用岛津 GCMS-TQ8030测定化妆中的亚硝胺，具有抗干扰能力强、准确、灵敏度高等优点，能够有效的监控化妆品中亚硝胺含量。 柱温程序：50℃(2 min)_6℃ /min_130℃ (10 min)-30℃/min_230℃ (12 min) 线速度：36.3 cm/sec(恒线速度方式) 分流比：20：1 离子源温度：200℃ 测定模式：MRM(见表1) 色谱质谱接口温度：240℃ 采集模式：MRM 结果讨论 2.1标准谱图 图19种亚硝胺的TIC图(c=0.5 mg/L) 表19种亚硝胺定量离子和参考离子 No. 化学名称 英文名称 CAS号 保留时间 (min) 目标离子对 (m/z) 碰撞能量 CE 参考离子对 (m/z) 碰撞能量 CE N-亚硝基甲基乙基胺 N-nitrosodiethylamine 10595-95-6 10.251 88.00>71.00 5 88>73 7 2 N-亚硝基二乙胺 N-nitrosodiethylamine 55-18-5 10.810 102.00>85.00 5 102>56 13 3 N-亚硝基二丙基胺 N-nitrosodipropylamine 621-64-7 13.602 130.00>113.00 3 130>88 5 4 N-亚硝基二丁基胺 N-nitrosodibutylamine 924-16-3 17.513 84.00>56.00 17 84>57 7 5 N-亚硝基N-乙基苯胺 N-Ethyl-N-nitrosoaniline 612-64-6 17.970 121.00>106.00 10 121>77 30 6 N-亚硝基哌啶 N-nitrosopiperidine 100-75-4 18.163 114.00>84.00 9 114>97 10 7 N-亚硝基吡咯烷 Nitrosopyrrolidine 930-55-2 19.372 100.00>55.00 10 100>68 11 8 N-亚硝基吗啉 N-nitrosomorpholine 59-89-2 21.360 116.00>86.00 5 116>56 13 9 N-亚硝基二苯基胺 N-Nitrosodiphenylamine 86-30-6 31.997 169.00>168.00 13 169>66 23 2.2标准曲线 配制浓度分别为10、20、50、100、200 ug/L 的亚硝胺混合标准溶液，取1 pL标准溶液进样，以 MRM 方式采集，各组分监测离子对见表1，各组分标准曲线图2所示。 峰面积(x100.000) 峰面积(x10.000) 峰面积(x10.000) 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 N-亚硝基吡咯烷(R=0.9995) N-亚硝基吗啉(R=0.9993) N-亚硝基二苯基胺(R=0.9998) 图29种亚硝胺标准曲线 2.3精密度实验 10 ug/L 亚硝胺混合标准溶液连续5次进样，考察方法的重复性，测定结果见表2。 表2峰面积重复性结果(n=5) 化合物名称 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 平均值 RSD(%) LOD(ug/kg) N-亚硝基甲基乙基胺 3893 3750 4016 3907 3889 3891 2.43 2.5 N-亚硝基二乙胺 2875 2970 2911 2876 2905 2907 1.33 0.7 N-亚硝基二丙基安 1143 1136 1077 1067 1022 1092 4.65 2.5 N-亚硝基二丁基胺 2727 2656 2390 2601 2543 2583 2.20 1.8 N-亚硝基-N-乙基苯安 6153 6044 5570 5912 6037 5943 3.79 0.4 N-亚硝基哌啶 1991 1888 1922 1803 1854 1892 3.75 2.6 N-亚硝基吡咯烷 1148 1071 1087 1136 1061 1101 3.56 2.8 N-亚硝基马啉 3689 3707 3599 3616 3607 3644 1.38 1.4 N-亚硝基二苯基胺 61784 57121 56565 55823 55635 57386 4.41 0.1 2.4回收率实验 平行取3份空白样品，分别往其中2份样品添加适量亚硝胺混合标准溶液，添加浓度分别为0.1 mg/kg， 按上述步骤进行前处理，取1 uL进样并用 GC-MS/MS 进行测试，考察方法回收率，测定结果见表3。 表3添加回收结果 合 空白值 测试值1 测试值2 平均测试值 添加量 平均回收率 (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (%) N-亚硝基甲基乙基胺 0.0872 0.0842 0.0857 0.1000 85.7 N-亚硝基二乙胺 - 0.0962 0.0935 0.0948 0.1000 94.8 N-亚硝基二丙基胺 - 0.1070 0.1062 0.1066 0.1000 106.6 N-亚硝基二丁基胺 一 0.1161 0.1085 0.1123 0.1000 112.3 N-亚硝基-N-乙基苯胺 - 0.1179 0.1184 0.1181 0.1000 118.1 N-亚硝基哌啶 0.0402 0.1524 0.1439 0.1481 0.1000 108.0 N-亚硝基吡咯烷 - 0.1069 0.1091 0.1080 0.1000 108.0 N-亚硝基吗啉 - 0.0861 0.0887 0.0874 0.1000 87.4 N-亚硝基二苯基胺 0.0073 0.1136 0.1063 0.1100 0.1000 102.7 2.51检出限 根据10 ug/L标样数据，以3倍信噪比计算9种亚硝胺的检出限，计算结果如表2所示。 2.6 7样品测试结果 取0.5g样品，按照上述条件进行前处理，并用 GC-MS/MS 进行测试，得到样品的色谱图及测试结果如下： 图3样品TIC图 表4样品测试结果 No. 组分名称 保留时间(min) 含量(mg/kg) N-亚硝基甲基乙基胺 10.251 [N.D 2 N-亚硝基二乙胺 10.810 N.D N-亚硝基二丙基胺 13.602 N.D 4 N-亚硝基二丁基胺 17.513 N.D 5 N-亚硝基-N-乙基苯胺 17.970 N.D 6 N-亚硝基哌啶 18.163 0.0629 7 N-亚硝基吡咯烷 19.372 N.D 8 N-亚硝基吗啉 21.360 N.D 9 N-亚硝基二苯基胺 31.997 0.0072 注： N.D为未检出 结论 本方法采用岛津 GCMS-TQ8030三重四极杆气质联用仪检测化妆品中9种亚硝胺， 在10~200 pg/L 范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以上，方法回收率在85.7~118.1%之间， 10 pg/L亚硝胺混合标准溶液连续测定5次，峰面积的相对标准偏差均小于5.0%，精密度良好。本方法操作简单，可有效地检测化妆品中的亚硝胺含量。 亚硝基化合物是一类很强的化学致癌物质，包含亚硝胺和亚硝酰胺两类化合物，通常泛称为亚硝胺，它们能诱发许多动物恶性肿瘤。化妆品基质复杂，干扰大，本实验采用30%甲醇水溶液提取样品，经HLB柱净化，再利用GC-MS/MS中MRM（多反应监测）方式可以有效排除基质干扰，提高仪器的选择性和灵敏度。方法回收率在85.7～118.1%之间。该方法能够有效的监控化妆品中亚硝胺含量。