化妆品中32种染发剂检测方案

数据文件名210219CDSP10028-2graup2J-25C-10lcd 《化妆品安全技术规范》32种染发剂的同时检测 国家药品监督管理局修订了染发剂检测方法中 对苯二胺等32种染发剂的检测方法，由于该项目分析组分较多，且分离难度较大，我们从多款色谱柱种筛选了最优选择，并且优化了检测方法，最终得到了稳定可靠的分析方法供客户参考。 方法优化后分析结果 色谱柱： DAISOPAK SP-100-5-ODS-P； 4.6mm i.d.×250mm 第一组谱图： 数据文件名：210219-CDSP10028-1group-21-25C8.ld 物质名称(按出峰顺序) 序号 物质 序号 物质 21 2-氨基-3羟基叶啶 22 N.N-双(2羟乙基)对苯二胺硫酸盐 1 对苯二胺 12 2甲基问苯二酚 2 对氨基苯酚 9 2-硝基对苯二胺 25 2.6-二氨基吡啶 14 苯基甲基吡唑啉酮 3 甲苯-25二胺硫酸盐 11 4-氨基-2羟基甲苯 4 间氨基苯酚 16 4-氨基-3-硝基苯酚 18 2.4-二氨基苯基基乙醇硫酸盐 28 4-氢问苯二酚 20 4-氨基间甲酚 27 6羟基吲哚 8 间苯二酚 31 1-5-萘二酚 6 2-氯对苯二安硫酸盐 32 1-萘酚 HPLC Conditions： 色谱柱： DAISOPAK SP-100-5-ODS-P；4.6mmi.d.×250mm 流 速：1.0mL/min 柱 温：25°C 检 测：280nm 进样量：2uL 样 品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2g/L亚硫酸氢钠稀释至约0.25 mg/mL 流动相：A：20mM磷酸氢二钾(磷酸酸 pH 7.5) B：甲醇 C：乙清 梯度如下表所示： Time(min) A(%) B(%) C(%) 0 96 2 2 15 96 2 2 25 90 2 8 40 50 10 40 55 50 10 40 55.1 96 2 2 30 7 29 5 19 17 1013 23 24 26 15 物质名称(按出峰顺序) 序号 物质 序号 物质 17 间苯二胺 10 甲苯-3.4-二胺 19 醒 13 6.氨基问甲酚 5 邻苯二胺 29 2.7萘二酚 7 邻氨基苯酚 26 N.N-二乙基对苯二胺硫酸盐 23 对甲基氨基苯酚硫酸盐 15 N.N-二乙基甲苯-2.5-二胺盐酸盐 24 4-硝基邻苯二胺 30 N苯基对苯二胺 HPLC Conditionss： 色谱柱： DAISOPAK SP-100-5-0DS-P；4.6mmi.d.×250 mm 流 速：1.0 mL /min 柱 温：25°C 检 测：280nm 进样量：2uL 样 品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2g/L亚硫酸氢钠稀释至约 0.25 mg/mL 流动相：A：20mM磷酸氢二钾(磷酸调 pH 7.5) B：甲醇 梯度如下表所示： Time(min) A(%) B(%) 0 92 8 8 92 8 35 50 50 45 50 50 45.1 92 8 结果讨论和注意点 柱温的影响 柱温对部分组分的分离有较大的影响，降温有助于3、4和18的分离，升温有助于22、12、9和14的分离，其他组分分离情况较好，柱温的变化影响不大。 有机相比例的影响 有机相比例和梯度的调整对整体的分离也有较大影响，在该项目征求意见稿的参考谱图中，第一组的3、4、18号物质的出峰顺序为3→18→4，若将第一组分析流动相中的乙腈也变更为甲醇，则会得到相同的出峰顺序，但后半部分的组分分离较困难，无法得到较好的分离；而22、12、9和14的分离需要适当提高乙腈的比例，适当加快洗脱的速度，猜测主要原因为甲醇和乙腈对于不同的组分有不同的选择性。 色谱柱的影响 该方法初始水相比例较高，对色谱柱的耐水性能有一定考验， ODS-P可连续分析30针以上保持分离性能(通常第一针保留时间及分离情况不稳定，分析开始前需一定的平衡时间才可得到稳定的结果) 稳定性 除色谱柱的稳定性之外，仪器和方法的稳定性亦非常重要。该方法需要一定的平衡时间才可得到稳定结果(2-3h)，另外该方法初始有机相比例较低，柱温也较低，对于泵的准确性和稳定性，柱温的控制均要求较高。 以上实验结果在岛津LC-30A四元低压泵上获得，不同仪器的死体积大小同样也会在不同程度上影响实验结果，，可能需要对方法进行微调((柱温和梯度)流动相的配制较为简单，多次配制的结果无明显差异。 总结 综上，使用 DAISOPAK SP-100-5-ODS-P；4.6 mmi.d.×250 mm对于2组32种染发剂的分析可得到良好稳定的分析结果，在实际分析时，可能需根据实际情况对方法进行微调。 《化妆品安全技术规范》32种染发剂的同时检测国家药品监督管理局修订了染发剂检测方法中 对苯二胺 等32种染发剂的检测方法，由于该项目分析组分较多，且分离难度较大，我们从多款色谱柱中筛选，并且优化了检测方法，最终得到了稳定可靠的分析方法供客户参考。方法优化后分析结果色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P；4.6mm i.d.×250mm第一组谱图：物质名称（按出峰顺序） HPLC Conditions ：色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6mm i.d.×250 mm流   速：1.0 mL / min柱   温：25°C检   测：280 nm进样量：2 μL样   品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2 g/L亚硫酸氢钠稀释至约0.25 mg/mL流动相：A :20 mM 磷酸氢二钾 (磷酸调pH 7.5)    B :甲醇        C :乙腈  梯度如下表所示：第二组谱图：物质名称（按出峰顺序）HPLC Conditions ：色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6mm i.d.×250 mm流   速：1.0 mL / min柱   温：25°C检   测：280 nm进样量：2 μL样   品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2 g/L亚硫酸氢钠稀释至约0.25 mg/mL流动相：A :20 mM 磷酸氢二钾 (磷酸调pH 7.5)    B :甲醇 梯度如下表所示：  结果讨论和注意点柱温的影响柱温对部分组分的分离有较大的影响，降温有助于3、4和18的分离，升温有助于22、12、9和14的分离，其他组分分离情况较好，柱温的变化影响不大。有机相比例的影响有机相比例和梯度的调整对整体的分离也有较大影响，在该项目征求意见稿的参考谱图中，第一组的3、4、18号物质的出峰顺序为3→18→4，若将第一组分析流动相中的乙腈也变更为甲醇，则会得到相同的出峰顺序，但后半部分的组分分离较困难，无法得到较好的分离；而22、12、9和14的分离需要适当提高乙腈的比例，适当加快洗脱的速度，猜测主要原因为甲醇和乙腈对于不同的组分有不同的选择性。色谱柱的影响该方法初始水相比例较高，对色谱柱的耐水性能有一定考验，ODS-P可连续分析30针以上保持分离性能（通常第一针保留时间及分离情况不稳定，分析开始前需一定的平衡时间才可得到稳定的结果）。稳定性除色谱柱的稳定性之外，仪器和方法的稳定性亦非常重要。该方法需要一定的平衡时间才可得到稳定结果（2-3h），另外该方法初始有机相比例较低，柱温也较低，对于泵的准确性和稳定性，柱温的控制均要求较高。以上实验结果在岛津LC-30A四元低压泵上获得，不同仪器的死体积大小同样也会在不同程度上影响实验结果，可能需要对方法进行微调（柱温和梯度）。流动相的配制较为简单，多次配制的结果无明显差异。 总结综上，使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm对于2组32种染发剂的分析可得到良好稳定的分析结果，在实际分析时，可能需根据实际情况对方法进行微调。