缬沙坦药品中5种N-亚硝胺检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-537Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-401 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS 法测定缬沙坦药品中5种N-亚硝胺含量 GCMS-401 摘要：本文利用GCMS-QP2020 NX 气相色谱质谱联用仪建立了缬沙坦药品中 NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDBA含量的检测方法。在2~1000 ng/mL浓度范围内5种物质线性关系良好，线性相关系数均大于0.999。取浓度为5 ng/mL 标准溶液连续进样6针，峰面积RSD% 均小于5.5%。实际样品中检出了 NEIPA与NDBA两种物质，三个浓度水平加标回收率为84.9~103.8%。该方法为缬沙坦中5种N-亚硝胺的检测提供了参考。 关键词：气相色谱质谱联用仪缬沙坦 N-亚硝胺 遗传毒性杂质是近年来化药质量控制比较关注的一类物质。该类物质会直接或间接损伤细胞DNA， 产生致突变和致癌效果。 遗传毒性杂质的种类很多，而N-亚硝胺类杂质是近年来出现频率较高的一类。从2018年7月开始，世界卫生组织(WHO)、FDA、欧洲药品质量管理局(EDQM)以及其他监管机构和全球卫生机构相继发布了关于几种药品中N-亚硝胺杂质的指导文件和公共卫生警报，最新的美国药典也增加了亚硝胺杂质的章节。 实验部分 1.1仪器 气质联用仪： GCMS-QP2020 NX 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rtx-Wax30 m×0.25 mm×0.5 um 进样口温度：250℃ 程序升温：60℃(0.5min)_15℃ /min_150C_20℃ /min_240℃ (8 min) 离子源温度：230℃ 缬沙坦是高血压治疗领域的主流产品，也是全球市场上最大一类抗高血压的药物。近年来该药物曾被报道检出 NDMA 这种N-亚硝胺类杂质，引发业内震动。由于缬沙坦这类高血压药物需要长期服用，因此对其中遗传毒性杂质的含量要求应更为严格，对检测方法的灵敏度也提出了较高要求。 ( 本文采用岛津 GCMS-QP2020 NX 建立了缬沙坦药 物中5种N-亚硝胺类物质的检测方法。 ) 进样模式：不分流 进样量：1uL 载气控制方式：恒线速度(51.6cm/sec) 检测器电压：调谐电压 +0.1 kV ( 采集模式： SIM ( (具体采集参数见表1) ) 1.3样品前处理方法 精密称取供试品约0.2 g(以原料药计)至10mL离心管中，加入2mL二氯甲烷，涡旋提取1 min， 4000r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 um 微孔滤膜，上机分析。 结果与讨论 2.1标准品色谱图 分析5种N-亚硝胺标准混合溶液，浓度为5 ng/mL， 得到各化合物的质量色谱图如图1所示，具体化合物信息如表1所示。 NDBA 图1 5种N-亚硝胺组分质量色谱图(5ng/mL) 表1 化合物信息表 No. 化合物名称 简称 CAS 号 保留时间 (min) 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) N-亚硝基二甲基胺 NDMA 62-75-9 4.940 2 N-亚硝基二乙基胺 NDEA 55-18-5 5.690 N-亚硝基乙基异丙基胺 NEIPA 16339-04-1 6.019 116 4 N-亚硝基二异丙基胺 NDIPA 601-77-4 6.266 130 5 N-亚硝基二正丁胺 NDBA 924-16-3 8.340 116 158 —— 2.2校准曲线及检出限 以二氯甲烷为溶剂配制标准溶液，浓度为2、5、10、30、50、100、200、500和1000 ng/mL， 以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，线性相关系数大于0.999，校准曲线如图2所示。根据2ng/mL标准溶液信噪比计算仪器检出限和定量限，具体结果如表 2所示。 0 500 Conc. (ng/mL) 图2 5种N-亚硝胺组分标准曲线 表2 标准曲线相关系数及仪器检测限、定量限 序号 化合物名称 相关系数R 检测限((ng/mL) 定量限 (ng/mL) NDMA 0.9996 0.21 0.69 2 NDEA 0.9999 0.20 0.67 3 NEIPA 0.9999 0.24 0.79 4 NDIPA 0.9999 0.28 0.94 5 NDBA 0.9997 0.19 0.63 2.3重复性考察 取浓度为 5 ng/mL标准溶液连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3 表3 重复性测试 (n=6) No. 化合物名称 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 RSD((%) 1 NDMA 1214 1347 1290 1329 1223 1180 5.37 2 NDEA 757 755 817 851 784 809 4.70 3 NEIPA 436 445 446 476 466 458 3.28 4 NDIPA 404 386 392 386 411 406 2.74 5 NDBA 386 388 383 382 394 415 3.16 2.4加标回收实验 检测市售的缬沙坦药品，药品中检出了 NEIPA 与 NDBA两种物质。对此药品进行三个浓度水平的加标实验，回收率结果如表4所示。 表4药品加标实验结果 化合物名称 样品含量 加标 (0.5 ug/g) 加标 (1ug/g) 加标 (2ug/g) 测试值 回收率 测试值 回收率 测试值 回收率 (ug/g) (ug/g) (%) (ug/g) (%) (ug/g) (%) NDMA N.D. 0.478 95.6 0.936 93.6 2.047 102.4 NDEA N.D. 0.504 100.7 0.961 96.1 2.029 101.4 NEIPA 1.04 1.515 94.9 1.890 84.9 2.863 91.1 NDIPA N.D. 0.477 95.4 0.926 92.6 1.949 97.4 NDBA 7.43 7.960 103.8 8.384 94.3 9.373 96.6 注：N.D.表示未检出。 结论 本文利用岛津 GCMS-QP2020 NX气质联用仪，建立了一种缬沙坦中5种N-亚硝胺的分析方法。该方法在2~1000 ng/mL 浓度范围内5种物质线性关系良好，线性相关系数均大于0.999。取浓度为 5 ng/mL标准溶液连续进样6针，峰面积RSD%均小于5.5%。实际样品中检出了 NEIPA 与 NDBA 两种物质，.三个浓度水平加标回收率为 84.9~103.8%。该方法简便、快速，为缬沙坦中NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDBA的检测提供了参考。 岛津应用云 本文利用GCMS-QP2020   NX气相色谱质谱联用仪建立了缬沙坦药品中NDMA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDBA含量的检测方法。在2~1000   ng/mL浓度范围内5种物质线性关系良好，线性相关系数均大于0.999。取浓度为5   ng/mL标准溶液连续进样6针，峰面积RSD%均小于5.5%。实际样品中检出了NEIPA与NDBA两种物质，三个浓度水平加标回收率为84.9~103.8   %。该方法为缬沙坦中5种N-亚硝胺的检测提供了参考。