参三七伤药胶囊中苏丹红Ⅳ染色的定性分析检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-415Excellence in Science Excellence in ScienceLC-238 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 参三七伤药胶囊中苏丹红IV染色的定性检测 LC-238 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪建立三参三七伤药胶囊中苏丹红Ⅳ染色的定性方法，，参三七伤药胶囊经乙醇超声提取，采用 PDA检测器在520 nm 波长下检测苏丹红Ⅳ紫外吸收峰，样品中未检出目标物苏苏红Ⅳ，参三七伤药胶囊加标样品在 RT=34.57 min 处检测到苏丹红Ⅳ，理论塔板数为222337，与苏丹红Ⅳ在400-600 nm 光谱图比较，相似度为99.99%，可判定为苏丹红Ⅳ。该方法准确可靠，可为相关企业检测参三七伤药胶囊中苏丹红I提供帮助。 关键词：高效液相色谱法 苏丹红Ⅳ 参三七伤药胶囊 参三七伤药胶囊由三七、红花、血竭等中药材制成，具有活血祛瘀、通经活络的作用。据报道在市场流通的劣质中药材，如血竭、红花等药材中被检出到用苏丹红Ⅳ进行非法染色。苏丹红Ⅳ，是一种人工合成的偶氮类化工原料，也是实验室常用的化学试剂，主要用于油脂、橡胶玩具、塑料制品等的染色，其代谢产物具有一定的致癌性，因此多数国家禁止将其用于食品生产。 国家药监局此前发布了《参三七伤药胶囊(片)中松香酸与苏丹红红V检查项补充验方法(BJY202005)》规定了苏丹红ⅣV染色的定性测定方法。要求采用液相色谱法，以保留时间、PDA光谱图信息对苏丹红 IV 进行定性识别。 本实验使用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，参考补充检验方法中的要求对参三七伤药胶囊中的苏丹红ⅣV进行定性测定，该方法准确可靠，可为相关企业检测参三七伤药胶囊中苏丹红IV提供帮助。 1.1仪器 输液泵： LC-40BX3 系统控制器： CBM-40Lite 柱温箱： CTO-40S 检测器： SPD-M30A 自动进样器： SIL-40C X3 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.97 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (250 mm x 4.6 mml.D.，5 um， 岛津(上海)实验器材有限公司， P/N：227-30017-08) 流动相： A： 20 mm乙酸铵水溶液；B：乙腈 流速：1mL/min 柱温：40℃ 检测波长：520nm 进样体积： 10pl 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为20%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 20.00 Pumps Pump B Conc. 80 21.00 Pumps Pump B Conc. 85 30.00 Pumps Pump B Conc. 95 42.00 Pumps Pump B Conc. 95 43.00 Pumps Pump B Conc. 20 55.00 Controller Stop 1.3样品前处理 对照品溶液的制备：取苏丹红Ⅳ对照品适量，加乙醇制成每1mL含 10 ug的溶液。 供试品溶液的制备：取参三七伤药胶囊内容物2g，加20mL乙醇，超声处理20 min， 过滤后取续滤液，即得。 1.4结果判断 供试品色谱中，在与苏丹红Ⅳ对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置上不得出现相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在 400 nm-600 nm 波长范围内的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。 (源自《参三七伤药胶囊(片)中松香酸与苏丹红Ⅳ检查项补充验方法 (BJY202005)》，国家药品监督管理局，2020年05月)。 结果与讨论 2.1标准品溶液色谱图 按1.2中的分析条件，对苏丹红Ⅳ标准品准液进行测定，苏丹红Ⅳ的保留时间为 34.59 min， 理论塔板数为226744，系统适用性满足要求，苏丹红Ⅳ对照品、供试品溶液、供试品加标溶液色谱图如图1、2、3所示。供试品中未检出苏丹红Ⅳ，供试品加标样品中可检出苏丹红Ⅳ，因此可判定参三七伤药胶囊中不含苏丹红I，结果符合预期。 图1 苏丹红Ⅳ对照品溶液色谱图(10pg/mL) 图2 参三七伤药胶囊供试品溶液色谱图 图3 供试品加标溶液色谱图 2.2光谱相似度判定结果 供试品加标溶液中苏丹红IV的保留时间为 34.59 min， 苏丹红Ⅳ对照品和供试品加标样品对应色谱图的光谱图和相似度对比结果，如图4、5所示，其光谱相似度为99.99%，光谱相似度高，可判定为苏丹红Ⅳ。 图4对照品、供试品加标样品光谱图 (RT=34.59 min) ID# 显示 对象 对象参数 比例 缩放倍率 入max 入min 相似度 Ch# 1 时间 34.59040 设置 1.00 514 0.9999 1 2 光谱 \苏丹红Ⅳ.jcm 设置 1.00 516 Ref 图5光谱相似度对比 2.3检出限及定量限 对加标浓度为 10 ug/mL 的参三七伤药胶囊供试品加标溶液进样分析，由信噪比计算苏丹红I的检出限及定量限(LOD，S/N=3；LOQ， S/N=10)，结果如表2所示。 表2苏丹红Ⅳ的检出限和定量限 名称 基质 检出限(ug/mL) 定量限(ug/mL) 苏丹红Ⅳ 参三七伤药胶囊 0.07 0.21 结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱系统，参考补充检验方法中的要求对参三七伤药胶囊中的苏丹红Ⅳ进行定性测定。该方法基于色谱保留时间、UV光谱进行定性，准确度高， 可为相关企业检测参三七伤药胶囊中苏丹红I提供帮助。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera   LC-40高效液相色谱系统，参考补充检验方法中的要求对参三七伤药胶囊中的苏丹红IV进行定性测定。该方法基于色谱保留时间、UV光谱进行定性，准确度高，可为相关企业检测参三七伤药胶囊中苏丹红Ⅳ提供帮助。