动物类中药美洲大蠊中气味成分检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-274Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-202 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn GCMSMS 结合气味数据库分析动物类中药美洲大蠊气味成分 GCMSMS-202 摘要：本文利用岛津 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气质联用仪结合 AOC-6000 自动进样器 SPME 进样功能 建立了动物类中药美洲大蟅150种气味物质的半定量方法。在方法中，采用正构烷烃 C9-C30 数据调整150种气味组分保留时间，4种标准品(苯乙酮、萘、2，6-二氯苯酚、2，3，6-三氯苯甲醚)评价仪器性能，三种内标物(4-溴氟苯、1，2-二氯苯-d4、-d10)校正数据库中标准曲线，无需150种气味物质标准品，自动生成150种气味物质的 MRM/SCAN 同时采集的方法。MRM模式数据用于筛查150种气味组分，并利用校正后曲线定量分析筛查出的气味物质，获得气味物质含量； SCAN 模式数据用于定性未包含于数据库中的气味成分。 关键词：气相色谱-三重四极杆质谱联用仪中药材 美洲大蟅 气味成分 中药鉴别的精髓在于“辨状论质”’，即根据药材外观性状所表现出来的特点，来判断药材的真伪优劣，从而阐明其本质。在外观性状的表征中，气味是重要的特征指标，依据药材的特征气味有效地鉴别药材是传统中药质量评价重要内容。目前关于中药气味的鉴别，主要以经验继承、人工评价为主，其鉴别结果主要建立在人的生理感官基础上，主观性较强，缺乏客观性和可重现性，因而受到质疑与挑战。对中药气味 实验部分 1.1仪器 AOC-6000 GCMS-TQ8040 NX 1.2分析条件 SPME纤维： FIB-P-100/10 PDMS 老化温度：270℃；平衡温度：80℃ 色谱柱： InertCap Pure-wax， 30 m×0.25mm×0.25 um 柱温程序：50℃(5min)_10C/min_250℃ (10 min) 进样口温度：250℃ 载气控制方式：恒压控制，83.5 KPa 进行客观数据化，量化不同中药之间的气味差异，是中药气味鉴别研究的发展趋势，随着科学技术的发展，有越来越多的分析方法用于评价药材的特征气味。 本文利用SPME-GC-MS/MS结合岛津气味数据库，实现了在无标准品的情况下快速建立150种气味成分筛查方法。并以动物类中药美洲大蟅为例，筛查并定量其气味物质，从而鉴定出美洲大蟅的特征性气味化：合物。 解吸时间：2min 进样方式：分流进样，分流比：5：1 离子源温度：200℃ 接口温度：250℃ 采集模式： MRM/SCAN 样品前处理 准确称取动物类中药美洲大样品1.0 g置于20mL顶空瓶中，压盖密封后上机分析。 结果与讨论 3.1气味物质筛查方法建立流程 使用气味分析方法包中正构烷烃采集方法测定正构烷烃C9-C30标准溶液，用于调整150种气味成分的保留时间。正构烷烃(C9-C)3-0C)310)质量色谱图见图 图1正构烷烃 (C9-C30)质量色谱图 使用气味方法包中QC采集方法采集4种仪器性能评价标准品(苯乙酮、萘、2，6-二氯苯酚、2，4，6-三氯苯甲醚)，用于评价仪器性能。图2是用于仪器性能评价的4种化合物质量色谱图，表1是4种仪器性能评价物质信息。 图2用于仪器性能评价的4种化合物质量色谱图 表14种仪器性能评价物质信息表 序号 名称 保留时间 (min) m/z 浓度 (ug/mL) 相似度 拖尾因子 1 苯乙酮 15.309 105 2 93 1.011 2 萘 16.495 128 5 98 1.030 2，6-二氯苯酚 20.603 162 5 91 1.022 4 2，4，6-三氯苯甲醚 17.375 195 0.1 51 1.008 以上数据表明：每个化合物被监测的2个特征离子均出现现离子比率与要求一致，4个化合物均可以准确识别，质谱灵敏度符合要求；2，6-二氯苯酚质量色谱图拖尾因子为1.022，色谱柱的分离能力良好；苯乙酮相似度为93，其质谱图与标准质谱库中质谱图一致；仪器性能处于良好状态。 使用内标采集方法采集3种校准曲线校正用内标物质(4-溴氟苯、1，2-二氯苯-d4、造-d10)，用于校正150种气味成分校准曲线。图3是3种内标的 MRM 图，表2是3种内标MRM 条件及信息。 图3标准曲线校正用内标物质 MRM 图 表2 3种标准曲线校正用内标物质信息表 序号 名称 保留时间/min 定量离子对 峰面积 S/N 4-溴氟苯 10.835 174.0> 95.0 5485 987.67 2 1，2-二氯苯-d4 13.013 150.0>115.0 9799 1663.00 3 -d10 20.977 164.0>162.0 22784 831.00 Smart MRM 气味物质数据库结合正构烷烃数据及标标数据，无需150种气味物质标准品，自动生成150种气味物质的 MRM/SCAN 半定量方法，MRM模式数据用于筛查150种气味成分，并给出定量结果； SCAN 模式数据用于定性其他气味成分。 图4Smart MRM 气味物质数据库创建方法界面和方法创建完成界面 3.2动物类中药美洲大大样品 MRM 测试结果 图5美洲大大样品 MRM 谱图 表3动物类中药美洲大大样品 MRM 数据气味组分筛查结果 No. 保留时间 (min) 英文名称 中文名称 CAS号 定量结果 (ng/g) 气味特征 1 4.289 Ethyl-2-methylbutyrate 2-甲基丁酸乙酯 7452-79-1 0.06 苹果气味 2 4.633 Dimethyl disulfide 二甲基二硫 624-92-0 0.48 腐烂气味 3 4.904 Hexanal 正己醛 66-25-1 1.31 油脂、青草气味 4 7.403 2-Heptanone 2-庚酮* 110-43-0 4.01 皂香气 5 7.731 Limonene 柠檬烯* 138-86-3 3.62 薄荷、柑橘气味 6 9.150 2-Methylpyrazine 2-甲基吡嗪 109-08-0 0.21 爆米花气味 ( 9.599 2-Octanone 2-辛酮 111-13-7 1.51 皂味、汽油气味 8 9.677 Octanal 正辛醛 124-13-0 9.41 脂蜡、果香 9 11.281 Dimethyl trisulfide 二甲基三硫 3658-80-8 0.89 硫磺气味 10 11.493 2-Nonanone 2-壬酮* 821-55-6 47.64 皂香、热奶气味 11 12.377 Acetic acid 乙酸* 64-19-7 32.48 酸味 12 13.084 trans，trans-2，4-Heptadi- enal (E，E)-2，4-庚二烯醛 4313-03-5 1.39 烧油味 13 13.231 n-Decanal 癸醛 112-31-2 1.50 皂味、脂蜡味 14 13.523 Benzaldehyde 苯甲醛* 100-52-7 44.37 杏仁味、焦糖味 15 13.517 2-Nonanol 2-壬基醇 628-99-9 6.99 黄瓜味 16 13.489 2-Isobutyl-3-methoxy pyrazine 2-甲氧基-3-异丁基 吡嗪 24683-00-9 0.06 土味、青椒味 17 13.738 2-Nonenal 反式-2-壬醛 18829-56-6 0.69 纸味 18 13.902 Linalool 芳樟醇 78-70-6 0.15 花香、薰衣草香 19 14.124 Isobutyric acid 异丁酸 79-31-2 2.22 腐臭味 20 14.650 2-Methylisoborneol 2-甲基异冰片 2371-42-8 0.31 土味、发霉味 21 14.649 2-Undecanone 2-十一酮’ 112-12-9 20.79 青香、橙子香 22 14.933 Butyric acid 丁酸 107-92-6 0.86 腐臭味 23 15.177 Phenylacetaldehyde 苯乙醛* 122-78-1 33.14 甜味、蜂蜜味 24 15.299 Acetophenone 苯乙酮 98-86-2 0.81 发霉味 25 16.920 Methyl salicylate 水杨酸甲酯 119-36-8 0.41 薄荷味 26 17.735 Geraniol 香叶醇 106-24-1 0.88 天竺葵香气 27 18.025 Benzyl alcohol 苯甲醇 100-51-6 1.13 甜味、芳香味 28 18.443 2-Phenylethanol 苯乙醇* 60-12-8 9.12 蜂蜜、玫瑰香 29 18.835 beta-lonone beta-紫罗酮 79-77-6 0.21 海藻香气 30 19.067 1-Dodecanol 十二醇 112-53-8 0.44 蜡脂香气 31 20.010 Caprylic acid 辛酸 124-07-2 6.56 汗味 32 21.105 Pelargonic acid 壬酸* 112-05-0 6.83 油脂香味 33 22.152 Capric acid 正癸酸 334-48-5 9.32 陈腐味 34 23.837 Indole 吲哚 120-72-9 2.12 灼烧味、樟脑球味 35 24.113 Lauric acid 月桂酸* 143-07-7 62.53 金属气味 36 24.265 Skatole 3-甲基吲哚 83-34-1 0.25 粪便、樟脑球味 37 24.823 Phenylaceticacid 苯乙酸 103-82-2 1.24 花香味、蜂蜜味 注：标记*的化合物为 MRM 模式及 SCAN 模式共同检出化合物 图6动物类中药美洲大样品中气味成分(部分) MRM图 3.3动物类中药美洲大大样品 SCAN 测试结果 图7美洲大大样品 SCAN 谱图 表4 美洲大蟅样品SCAN 数据气味组分定性结果 No. 保留时间 (min) 英文名称 中文名称 CAS号 相似度 1.897 3-methyl-2-Pentanone 3-甲基-2-戈酮 565-61-7 93 2 2.430 2-methyl-Butanal 2-甲基丁醛 96-17-3 92 3 2.463 3-methyl-Butanal 3-甲基丁醛 590-86-3 91 4 3.030 Propyl pyruvate 丙酮酸丙酯 0-00-0 96 5 3.663 Trichloromethane 氯仿 67-66-3 97 6 6.550 cis-1，4-Dimethylcyclooc- tane -川 顺式-1，4-二甲基环 辛烷 13151-99-0 93 7 7.407 2-Heptanone 2-庚酮' 110-43-0 95 8 7.733 Limonene 柠檬烯’ 138-86-3 90 9 8.040 3-Methyl-1-butanol 3-甲基-1-丁醇 123-51-3 90 10 8.890 Styrene 苯乙烯 100-42-5 92 11 9.500 Acetoin 乙偶姻 513-86-0 96 12 10.023 Tridecane 十三烷 629-50-5 95 13 11.497 2-Nonanone 2-壬酮' 821-55-6 95 14 12.377 Acetic acid 乙酸* 64-19-7 90 15 12.483 Methional 3-甲硫基丙醛 3268-49-3 89 16 13.523 Benzaldehyde 苯甲醛* 100-52-7 91 17 14.647 2-Undecanone 2-十一酮* 112-12-9 95 18 15.037 (Z)-Undec-6-en-2-one 6-十一烯-2-酮 107853-70-3 90 19 15.177 Phenylacetaldehyde 苯乙醛* 122-78-1 93 20 15.487 Isovaleric acid 异戊酸 503-74-2 91 21 16.107 3-(methylthio)-1-Propa- not 3-甲硫基丙醇 505-10-2 88 22 16.180 2-Nonanol 2-壬醇 628-99-9 91 23 17.173 2-Phenylpropenal 2-苯基丙烯醛 4432-63-7 87 24 17.240 Dodecanoic acid， methyl ester 十二酸苯甲酯 111-82-0 90 25 18.450 2-Phenylethanol 苯乙醇* 60-12-8 95 26 18.690 2-Phenyl-2-butenal 2-苯基-2-丁烯醛 4411-89-6 93 27 19.597 Methyl isomyristate 12-甲基十三烷酸甲 5129-58-8 92 酯 28 21.113 Nonanoic acid 壬酸* 112-05-0 94 29 22.160 Decanoic acid 正癸酸 334-48-5 93 30 24.113 Dodecanoic acid 月桂酸* 143-07-7 94 31 26.003 Tetradecanoic acid 肉豆蔻酸 544-63-8 92 32 28.403 Hexadecanoic acid 棕榈酸 57-10-3 91 注：标记*的化合物为 MRM 模式及 SCAN 模式共同检出化合物 结论 本方法使用岛津气味分析系统对动物类中药美洲大美的气味成分进行分析，采用 Smart MRM 气味数据库结合正构烷烃及3种内标数据建立了150种气味成分筛查方法，利用 AOC-6000 SPME 进样， GCMS-TQ8040NX三重四极杆气质联用仪 MRM/SCAN 两种模式同时分析， MRM 模式筛查出气味成分37种，并计算出气味含量；SCAN 模式数据定性气味成分32种，在两种采集模式下，有10种气味成分共同检出；综上，岛津气味分析系统可用于动物类中药的气味分析，为相关研究及质量控制提供参考。 岛津应用云 本方法使用岛津气味分析系统对动物类中药美洲大蠊的气味成分进行分析，采用Smart MRM气味数据库结合正构烷烃及3种内标数据建立了150种气味成分筛查方法，利用AOC-6000 SPME进样，GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气质联用仪MRM/SCAN两种模式同时分析，MRM模式筛查出气味成分37种，并计算出气味含量；SCAN模式数据定性气味成分32种，在两种采集模式下，有10种气味成分共同检出；综上，岛津气味分析系统可用于动物类中药的气味分析，为相关研究及质量控制提供参考。