内酰胺类抗生素中含量检测检测方案

采用 TSKgel 色谱柱参考 GB/T 38093-2019 凝胶色谱法测定β-内酰胺类抗生素高分子聚合物 【摘要】 β-内酰胺类抗生素自身聚合的产物，也称为高分子聚合物(简称高聚物)，其可在生产或储存过程中产生，甚至也可在药物的不当使用过程中产生。随着现代制药工程在生产工艺方面的不断改进和提高，目前抗生素的产品中外源性杂质日趋减少，对内源性杂质的控制成为当前抗生素高分子杂质质量控制的重点。这里采用 TSKgel G2000SWxL色谱柱，参考国标GB/T 38093-2019，对头孢噻吩、头孢曲松、头孢呋辛、头孢拉定、头孢哌酮及头孢唑林6种β-内酰胺类抗生素进行了分离测试。结果表明：6种β-内酰胺类抗生素主峰与相关物质峰的分离良好，主峰柱效均大于10000，满足国标要求。 【溶液的配制】 色谱流动相配制：：(5 mmol/L 磷酸缓冲盐，pH=7.0)： ACN=9：1 (v：v) 对照品溶液配配：取头孢曲松、头孢噻吩、头孢拉定、头孢呋辛少量用(5 mmol/L 磷酸缓冲盐pH=7.0) 溶解并稀释至1 mg/mL， 取头孢哌酮、头孢唑啉少量用(5mmol/L 磷酸缓冲盐，pH=7.0) ： ACN=1：1(v：v)溶解并稀释至1mg/mL 【分析条件】 仪器： Thermo Ultimate 3000 色谱柱：TSKgel G2000SWxL (7.8 mm I.D.x30 cm， 5 um) 流速： 0.8mL/min 柱温： 25℃ 样品盘温度：10℃ 进样量：：110 uL 检测器：紫外检测器@254nm 【分析结果】 图1头孢噻吩分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. FResolution (USP) Plates (USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 6.607 0.51 1.0018 1.98 n.a. 1.67 2765 2 7.525 0.06 0.1150 0.63 n.a.1. 0.45 2542 3 7.772 0.07 0.1333 0.64 n.a. 0.82 3707 4 8.120 0.09 0.1783 0.75 n.a. 1.38 9303 5 8.655 0.14 0.2668 0.97 n.a.1. 1.79 6204 6 9.507 0.53 1.0300 2.57 2.25 4.84 5536 7 11.430 98.61 193.3372 1023.69 1.45 n.a. 25828 图2头孢曲松分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. Resolution (USP) Plates (USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 7.538 0.10 0.3907 0.80 n.a. 0.29 701 2 7.770 0.09 0.3404 1.36 n.a. 0.76 4191 3 8.115 0.15 0.5655 1.95 n.a. 1.49 5906 4 8.673 0.30 1.1254 4.62 n.a. 1.33 11160 5 9.140 0.04 0.1419 0.68 n.a. 1.86 9595 6 9.723 98.90 369.6080 1899.61 1.99 2.86 23334 7 11.355 0.15 0.5732 1.53 n.a. 0.42 2617 8 11.623 0.26 0.9864 2.74 n.a. n.a. 13747 图3头孢呋辛分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. Resolution (USP) Plates (USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 8.085 0.05 0.1504 0.53 n.a. 1.56 6983 2 8.615 0.27 0.7453 2.85 n.a. 2.80 13831 3 9.557 0.98 2.7059 7.87 n.a. 0.30 10180 4 10.362 0.31 0.8455 1.27 n.a. 0.36 70 5 11.300 98.39 272.1187 1534.73 1.34 n.a. 29074 图4头孢拉定分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. Resolution (USP) Plates (USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 12.802 1.09 1.6427 7.75 n.a. 221 24740 2 13.497 98.91 149.1770 722.56 1.03 n.a. 31804 图5头孢哌酮分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. Resolution (USP) Plates (USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 7.542 0.06 0.1074 0.46 n.a. 0.52 6448 2 7.753 0.16 0.2719 1.17 n.a. 0.94 4910 3 8.108 0.55 0.9407 4.23 n.a. 1.82 10966 4 8.597 1.32 2.2762 12.94 n.a. 3.47 22789 5 9.498 2.57 4.4387 18.06 1.27 1.52 16890 6 10.683 1.08 1.8589 5.76 n.a. 0.65 1132 7 11.175 94.26 162.5652 952.65 1.34 n.a. 33427 图6头孢唑啉分离色谱图 Peak Peak Name Ret.Time Rel.Area Area Height Asym. Resolution (USP) Plates(USP) No. min % mAU*min mAU EP 1 8.117 0.01 0.0272 0.15 1.27 1.94 12411 2 8.627 0.16 0.3007 1.63 n.a. 2.71 21897 3 9.320 0.07 0.1319 0.91 n.a. 0.76 17957 4 9.540 0.73 1.3564 6.86 n.a. n.a. 15872 5 9.747 0.18 0.3344 1.81 n.a. n.a. n.a. 6 10.088 0.18 0.3355 1.20 n.a. 0.40 751 7 10.517 0.88 1.6501 4.33 n.a. 1.69 3839 8 11.303 96.95 181.2459 1067.53 1.32 1.62 32178 9 12.335 0.84 1.5716 2.92 n.a. n.a. 2345 标准曲线建立(以头孢噻吩为例)： 样品序号 浓度 mg/mL 峰面积 1 5.1444 1049.58 2 2.0691 372.94 3 0.5248 93.62 4 0.0528 9.43 5 0.0092 1.70 【结论】 采用 TSKgel G2000SWxL 色谱柱，参考国标 GB/T 38093-2019，对头孢噻吩、头孢曲松、头孢呋辛、头孢拉定、头孢哌酮及头孢唑林6种β-内酰胺类抗生素进行了分离测试。结果表明：6种β-内酰胺类抗生素主峰与相关物质峰的分离良好，主峰柱效均大于10000，以头孢噻吩为例做标准曲线，浓度范围为 0.009~5.14 mg/mL， 其线性R²=0.9977(高于标准中的要求R2>0.95)，满足国标要求。 ( 参考文献： ) ( [11GB/T38093-2019 β-内酰胺类抗生素高分子聚合物测定凝胶色谱法 ) β-内酰胺类抗生素自身聚合的产物，也称为高分子聚合物（简称高聚物），其可在生产或储存过程中产生，甚至也可在药物的不当使用过程中产生。随着现代制药工程在生产工艺方面的不断改进和提高，目前抗生素的产品中外源性杂质日趋减少，对内源性杂质的控制成为当前抗生素高分子杂质质量控制的重点。本应用是采用TSKgel G2000SWXL色谱柱，参考国标GB/T 38093-2019，对头孢噻吩、头孢曲松、头孢呋辛、头孢拉定、头孢哌酮及头孢唑林6种β-内酰胺类抗生素进行了分离测试。结果表明：6种β-内酰胺类抗生素主峰与相关物质峰的分离良好，主峰柱效均大于10000，满足国标要求。