注射用胸腺肽中含量检测检测方案

采用 TSKgel UP-SW2000 色谱柱分析注射用胸腺肽 注射用胸腺肽Thymopolypeptides for Injection 【基本信息】 注射用胸腺肽是从小牛、猪等动物胸腺中提取的一类多肽激素，能诱发和促进Ｔ淋巴细胞分化、成熟，提高机体自然杀伤细胞活力，是一种用途广泛且疗效显著的免疫增强剂。近年来，国内外研究证实其组分中 α1为主要活性成分。2020年3月2日上海发布了新冠肺炎救治“上海方案”I]，在“救治中的特殊问题及处理”章节中，强调了免疫调节很重要，推荐每周2次皮下注射胸腺肽，以提高患者免疫功能、阻止病情重症化、缩短排毒时间。这里采用新型2 um高效尺寸排阻色谱柱 TSKgel UP-SW2000 对注射用胸腺肽中的胸腺肽 α1进行了分离检测。 【标准溶液的配制】 分别取相对分子质量一定的生长抑素、胸腺肽α1、人胰岛素和核糖核酸酶A对照品各约5 mg， 精密称定。置于同一10 mL量瓶中，加流动相溶解并定容，稀释成质量浓度均约为 0.25 g/L。 【供试品溶液的配制】 采用流动相溶解注射用胸腺肽供试品，配制浓度为：2mg/mL，经0.22 um滤膜过滤后备用。 【分析条件】 色谱柱：： TSKgel UP-SW2000 (2um ， 4.6 mm I.D.x30 cm) 流动相： 乙腈-水-三氟乙酸： (体积比：40：60：0.07) 流速：0.23 mL/min 柱温：室温 检测器参数： UV @214nm 进样体积：5pL 图1对照品分离色谱图 表1对照品分离结果 No 对照品名称 保留时间(min) 分离度(Rs.) 理论塔板数(TP) 1 核糖核酸酶A 8.70 3.49 17457 2 人胰岛素 9.64 2.49 19414 3 胸腺肽α1 10.32 2.13 23658 4 生长抑素 10.88 27514 图2对照品分离色谱图(n=6) 表2 对照品保留时间重复性 No. Peak 1 (min) Peak 2 (min) Peak 3 (min) 8.69 9.64 10.32 10.88 2 8.70 9.64 10.32 10.88 8.70 9.64 10.32 10.88 4 8.70 9.65 10.32 10.89 5 8.71 9.65 10.33 10.89 6 8.71 9.65 10.33 10.89 Average 8.70 9.64 10.32 10.89 RSD 0.09% 0.06% 0.05% 0.05% 校正曲线 图3校正曲线 图4注射用胸腺肽液相色谱图 1表3注射用胸腺肽检测结果 No. 胸腺肽α1面积百分比/% 分子量大于10000Da面积百分比/% 1 1.84 2.38 【结果与讨论】 对照品核糖核酸酶A的理论塔板数和分离度(见表1)，结果满足标准[2]规定的理论塔板数大于5000和分离度大于3的要求；各峰保留时间重现性(见表2， RSD<0.1%)均满足标准规定 RSD不得大于2%的要求；校正曲线相关系数(见图3， R=0.9987)符合标准规定相关系数大于 0.99的要求；供试品分析结果见表3，分子量大于10000道尔顿的组分所占比例为2.38%，满足标准规定不得超过5%的要求；对应胸腺肽α1对应峰的面积百分比为1.84%，满足标准规定不低于1%的要求。 以上实验结果表明：采用 TSKgel UP-SW2000 色谱柱，使用乙腈-水-三氟乙酸： (体积比：40：60：0.07)流动相，在紫外检测波长214 nm 条件下，可以满足注射用胸腺肽中胸腺肽α1的分离和测定的要求。 ( 【参考资料】 ) 1.上海市新型冠状病毒病临床救治专家组.上海市2019冠状病毒病综合救治专家共识 [J/OL].中华传染病杂志，2020，38(2020-03-01). ( 2.国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-XG 042-2000-2003 )     采用TSKgel UP-SW2000超高效液相尺寸排阻色谱柱，使用乙腈-水-三氟乙酸：（体积比：40：60：0.07）流动相，在紫外检测波长214 nm条件下，对注射用胸腺肽中胸腺肽α1进行分离和测定。    供试品的分析结果显示，分子量大于10000道尔顿的组分所占比例为2.38%，满足标准不得超过5%的要求。对应胸腺肽α1对应峰面积百分比为1.84%，满足标准规定不低于1%的要求。