苯甲酸类化合物中分离纯化检测方案(制备液相色谱)

SepaFlash® C18反相柱应用于苯甲酸类化合物的分离纯化 孙文，王玉麟，仇文军，徐波 应用技术研究中心 摘要 羧酸类化合物尤其是苯甲酸类化合物是许多活性药物成分（Active Pharmaceutical Ingredients, API）的关键中间体，例如解热镇痛药物阿司匹林等，具有广泛的应用价值。使用传统硅胶作为固定相的色谱柱来分离纯化这类化合物是一类难题。常州三泰科技有限公司的SepaFlash® C18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine具有良好的分离性能。本文利用SepaFlash® C18反相柱分离并纯化了两种强极性的苯甲酸类化合物(结构式如图 1所示)，结果表明混合物样品得到了很好的分离，为此类具有一定极性与亲水能力的化合物的快速分离纯化提供了一种经济实用的解决方案。 图1. 两种苯甲酸类化合物 实验部分 上述两种苯甲酸类化合物的混合物样品在普通硅胶柱上的分离效果较差，无法满足广大化学工作者对分离提纯的要求。常州三泰科技公司的SepaFlash® Bonded Series C18 反相柱采用超纯无定型硅胶基质的填料 (参见表1)，其特性能够满足对这类化合物进行分离纯化的要求。 表1. SepaFlash® Bonded Series C18反相柱填料相关参数 粒径 40 - 60 μm 孔径 60 Å 比表面积 500 m2/g 碳含量 17 % 末端封尾 是 耐压 400 psi 图2. 快速液相制备色谱系统SepaBean® machine 本文利用SepaFlash® C18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine（参见图2），对两种苯甲酸类化合物的混合物样品进行了快速分离纯化，实验参数参见表2。 表2: 快速分离纯化实验参数 仪器 SepaBean® Machine 色谱柱 25g SepaFlash® C18反相柱 (订货号: SW-5201-025-IR) 检测波长 220 nm, 254 nm 流动相 A: 水(0.05%TFA) B: 乙腈 流速 30 ml/min 洗脱梯度 % Solvent B Time / (min) 20 0 35 15 65 20 65 30 结果与讨论 在规格为25 g的SepaFlash® C18反相柱上对苯甲酸类化合物样品的分离图谱如图3所示。整个分离制备过程大约用时 0.5 h，仅消耗溶剂约500 ml，只需采用常规的梯度洗脱方法，样品最终获得了理想的保留时间及令人满意的分离效果。 图3: 苯甲酸类化合物样品的快速分离制备图谱 关于SepaFlash® Bonded Series C18反相柱系列产品 常州三泰科技公司的SepaFlash® Bonded Series C18反相柱系列产品具有多种规格（参见表3及图4）。另外，对于大多数强极性化合物，在一般反相色谱柱上不保留或者保留很弱，可以考虑更换为HILIC分离模式。常州三泰科技公司有多种亲水性色谱柱产品可供选择，包括HILIC柱、氰基柱、氨基柱和二醇柱等多种键合相色谱柱，具体订购信息请查询产品目录。 表3 SepaFlash® Bond Series C18反相柱参数 （填料:Ultra-pure irregular C18） Item Number Column Size Flow Rate (mL/min) Max. Pressure (psi/bar) SW-5201-004-IR 5.9 g 10-20 400/27.5 SW-5201-012-IR 23 g 15-30 400/27.5 SW-5201-025-IR 38 g 15-30 400/27.5 SW-5201-040-IR 55 g 20-40 400/27.5 SW-5201-080-IR 122 g 30-60 400/24.0 SW-5201-122-IR 180 g 40-80 400/20.7 SW-5201-180-IR 340 g 50-100 400/20.7 SW-5201-220-IR 475 g 50-100 400/17.2 图4. SepaFlash® Bonded Series C18反相柱 实验部分 上述两种苯甲酸类化合物的混合物样品在普通硅胶柱上的分离效果较差，无法满足广大化学工作者对分离提纯的要求。常州三泰科技公司的SepaFlash® Bonded Series C18 反相柱采用超纯无定型硅胶基质的填料 (参见表1)，其特性能够满足对这类化合物进行分离纯化的要求。表1. SepaFlash® Bonded Series C18反相柱填料相关参数粒径40 - 60 μm孔径60 Å比表面积500 m2/g碳含量17 %末端封尾是耐压400 psi图2. 快速液相制备色谱系统SepaBean® machine本文利用SepaFlash® C18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine（参见图2），对两种苯甲酸类化合物的混合物样品进行了快速分离纯化，实验参数参见表2。表2: 快速分离纯化实验参数仪器SepaBean® Machine色谱柱25g SepaFlash® C18反相柱(订货号: SW-5201-025-IR)检测波长220 nm, 254 nm流动相A: 水(0.05%TFA)B: 乙腈流速30 ml/min洗脱梯度% Solvent BTime / (min)20 0351565206530 结果与讨论在规格为25 g的SepaFlash C18反相柱上对苯甲酸类化合物样品的分离图谱如图3所示。整个分离制备过程大约用时 0.5 h，仅消耗溶剂约500 ml，只需采用常规的梯度洗脱方法，样品最终获得了理想的保留时间及令人满意的分离效果。图3: 苯甲酸类化合物样品的快速分离制备图谱关于SepaFlash® Bonded Series C18反相柱系列产品常州三泰科技公司的SepaFlash® Bonded Series C18反相柱系列产品具有多种规格（参见表3及图4）。另外，对于大多数强极性化合物，在一般反相色谱柱上不保留或者保留很弱，可以考虑更换为HILIC分离模式。常州三泰科技公司有多种亲水性色谱柱产品可供选择，包括HILIC柱、氰基柱、氨基柱和二醇柱等多种键合相色谱柱，具体订购信息请查询产品目录。表3  SepaFlash® Bond Series C18反相柱参数（填料:Ultra-pure irregular C18）Item NumberColumn SizeFlow Rate(mL/min)Max. Pressure(psi/bar)SW-5201-004-IR5.9 g10-20400/27.5SW-5201-012-IR23 g15-30400/27.5SW-5201-025-IR38 g15-30400/27.5SW-5201-040-IR55 g20-40400/27.5SW-5201-080-IR122 g30-60400/24.0SW-5201-122-IR180 g40-80400/20.7SW-5201-180-IR340 g50-100400/20.7SW-5201-220-IR475 g50-100400/17.2