水产品中环境雌激素类物质残留量检测方案(气质联用仪)

SSL-CA20-014Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-344 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn GCMS法测定水产品中酚类和雌酮等环境雌激素类物质残留量 GCMS-344 摘要：本文建立了气相色谱-质谱联用仪测定水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的分析方法。结果表明：在3.0~200 ug/L的浓度范围内，各化合物的线性相关系数R均在0.999以上，线性关系良好。方法检出限为 0.002~0.233 ug/L。取一标准品衍生后溶液重复进样6次，各组分峰面积的相对标准偏差(RSD%)均在3%以下，精密度良好。实际样品在含量为3.00~10.0ug/kg的加标水平下，各组分的基质加标回收率为74.5-108%。本方法参照标准 GB 31660.2-2019，操作简单、灵敏度高，，可为水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、1.7a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定提供参考。 环境雌激素类物质理化性质稳定、可经由食物链进行传递和浓缩、易于被动物体吸收和富集、难以被排除或降解，最终将进入海洋，污染海洋水和水产品。这类物质进入生物体后能破坏机体内环境的稳定，引起生殖障碍、发育异常和某些癌症，其危害已引起全世界广泛关注。 农业农村部部2019年9月6日首次发布GB31660.2-2019《水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、]17β-雌二醇、 实验部分 1.1仪器 GCMS-QP2020 NX气相色谱-质谱联用仪 1.2分析条件 GCMS条件 色谱柱： Rtx-5MS (30m×0.25mm×0.25um) 柱温程序：120℃(2min)_15℃/min_250℃_5℃/ min_280℃_20℃/min_300℃(2 min) 进样口温度：250℃ 载气控制方式：恒线速度 线速度：37.5 cm/sec 1.3样品前处理 雌三醇残留量的测定气相色谱-质谱法》，该标准规定了水产品中环境雌激素类残留量检测的制样和气相色谱-质谱测定方法。 本文参考 GB31660.2-2019《水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定气相色谱-质谱法》，采用岛津GCMS-QP2020 NX气相色谱质谱联用仪，建立分析水产品中环境雌激素的检测方法，该方法操作简单、灵敏度高，完全满足标准的要求。 进样方式：不分流进样 ( 进样量： 1uL ) 离子源温度：200℃ 接口温度：280℃ ( 扫描方式： SIM ) 检测器电压：相对于调谐电压+0.3KV 图1前处理流程图 结果与讨论 2.1标准品图谱 待测物标准品衍生物谱图见图2，相关化合物信息见表1，质量色谱图如图3所示。 图2待测物标准品衍生物谱图(60~200pg/L) 表11待测物化合物信息及其衍生物特征离子 No. 中文名称 英文名称 CAS 号 保留时间 (min) 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 1 辛基酚 Octylphenol 140-66-9 6.269 303 402、345、275 2 壬基酚 Nonylphenol 25154-52-3 7.257 303 416、345、275 3 顺式-己烯雌酚 Diethylstilbestrol 6898-97-1 9.471 660 631、341、447 4 双酚A Bisphenol A 80-05-7 9.547 605 620、331、315 5 反式-己烯雌酚 Diethylstilbestrol 6898-97-1 10.237 660 631、341、447 6 17a-乙炔雌二醇 17a-ethinylestradiol 57-63-6 12.289 474 459、446、353 7 雌三醇 Estriol 50-27-1 12.915 449 663、409、356 8 17B-雌二醇 17B-estradiol 50-28-2 12.960 664 409、451、356 9 雌酮 Estrone 53-16-7 13.475 466 409、422、356 图3待测物标准品衍生物的质量色谱图 2.2标准曲线与检出限 配制5个不同浓度的标准品溶液，加入七氟丁酸酐衍生，制成辛基酚、己烯雌酚浓度均为5.0、10、25、50和100 ug/L的梯度系列，壬基酚、双酚A浓度均为3.0、6.0、15、30和60 ug/L的梯度系列，雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇浓度均为10、20、50、100和200 ug/L的梯度系列。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，各化合物标准曲线如图4所示。根据最低点标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算各组分方法检出限。线性相关系数和检出限见表2。 图4待测物标准品衍生物的校准曲线 表22各物质标准曲线线性系数和检出限(ug/L) NO. 化合物名称 相关系数 (R) 检出限 (ug/L) No. 组分名称 相关系数 (R) 检出限 (ug/L) 辛基酚 0.9996 0.049 5 17a-乙炔雌二醇 0.9992 0.155 2 壬基酚 0.9992 0.127 6 雌三醇 0.9995 0.233 己烯雌酚 0.9990 0.014 17β-雌二醇 0.9990 0.051 4 双酚A 0.9994 0.002 8 雌酮 0.9994 0.065 2.3重复性结果 取校准曲线中次低点标准溶液，重复进样6次，各组分重复性结果见表3。 表3重复性结果(n=6) No. 化合物名称 峰面积 RSD% 1 2 3 4 5 6 1 辛基酚 20135 20676 19933 19400 20718 20278 2.44 2 壬基酚 5063 4748 4922 4955 4912 4672 2.94 3 己烯雌酚 27544 27690 27401 27228 28060 28162 1.33 4 双酚A 59900 61137 58289 59195 60616 59570 1.70 5 17a-乙炔雌二醇 17091 17202 16576 16667 17508 17464 2.30 6 雌三醇 12312 12407 12354 12476 12095 12357 1.05 7 173-雌二醇 26894 27288 26743 27460 27425 27830 1.46 8 雌酮 33681 34386 32693 32714 33815 33401 1.97 2.4样品加标回收率 取5g均质后的空白样品，添加待测物混合标准溶液，按照上述前处理方法处理后上机，平行处理3份，样品加标测定结果及加标回收率结果见表4。 表4样品加标回收率结果 No. 化合物名称 加标量 回收量(ug/kg) 平均回收率(%) (ug/kg) 1 2 3 1 辛基酚 5.00 3.77 3.81 3.87 76.4 2 壬基酚 3.00 2.46 2.17 2.45 78.6 3 己烯雌酚 5.00 4.48 4.43 4.49 89.3 4 双酚A 3.00 2.24 2.26 2.27 75.3 5 17a-乙炔雌二醇 10.0 7.50 7.38 7.47 74.5 6 雌三醇 10.0 9.48 9.25 9.21 93.2 173-雌二醇 10.0 10.8 10.8 10.7 108 8 雌酮 10.0 8.13 8.12 7.82 80.2 2.5样品测试 取某超市采购的冰鲜鱼肉，均质后称取5g样品，按照1.3步骤对样品进行处理，得到样品色谱图，如图5，测试结果如表5所示。 图5样品色谱图 表5样品测试结果 No. 组分名称 含量(ug/kg) No. 组分名称 含量(ug/kg) 辛基酚 0.934 5 17a-乙炔雌二醇 0.779 2 壬基酚 N.D. 6 雌三醇 N.D. 3 己烯雌酚 0.629 7 173-雌二醇 2.60 4 双酚A 0.502 8 雌酮 1.66 注：N.D.表示未检出 结论 本方法采用岛津 GCMS-QP2020 NX 检测水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、117β-雌二醇、雌三醇的残留量，标准品衍生后溶液在 3.0~200 ug/L浓度范围内，各组分标准曲线线性良好，相关系数R均在0.999以上，方法检出限为 0.002~0.233 ug/L。取一标准品衍生后溶液进样6针，峰面积 RSD 值均小于3%。在3.00~10.0 ug /kg的空白样品加标水平下，各组分的基质加标回收率为74.5-108%。本方法准确、灵敏度高，能够有效的监测水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、己烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇等环境雌激素类物质的残留量。 岛津应用云 本文建立了气相色谱-质谱联用仪测定水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的分析方法。结果表明：在3.0~200 μg/L的浓度范围内，各化合物的线性相关系数R均在0.999以上，线性关系良好。方法检出限为0.002~0.233 μg/L。取一标准品衍生后溶液重复进样6次，各组分峰面积的相对标准偏差（RSD%）均在3 %以下，精密度良好。实际样品在含量为3.00~10.0 μg/kg的加标水平下，各组分的基质加标回收率为74.5-108 %。本方法参照标准GB 31660.2-2019，操作简单、灵敏度高，可为水产品中辛基酚、壬基酚、双酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇残留量的测定提供参考。