细胞外囊泡及细胞提取物中蛋白质的差异表达检测方案(生物质谱)

LAAN-A-TM073 Applicationn NNo.B97News第一版发行行：2019年5月400-650-0439 ApplicationNews MALDI-TOF质量分析法 使用台式 MALDI-TOF MS分析癌细胞细胞外囊泡化疗耐药 简介 结果 作为与维也纳医科大学合作的一部分，该项目旨在使化疗患者更快、更少侵入性地检测化疗耐药生物标志物。快速检测化疗耐药将改善癌症治疗，从而提高癌症生存率。 图2显示了一个细胞外囊泡样品的代表性质谱图。本分析中基于MALDI-TOF MS的检测灵敏度为低ug/mL(1.2~5×101°particles/mL)范围(数据未显示)。 癌细胞通过细胞外囊泡(EVs)与全身细胞相互作用。细胞外囊泡在体内循环并传递引起恶性表型的分子信息。 通过同时培养大肠癌转移淋巴节细胞和5-氟尿嘧啶，我们建立了对化疗耐药性增强的细胞。将通过超速离心分离从该细胞的培养上清液中回收的细胞外囊泡，用作体液中循环的源于癌细胞的生物标志的模型。 获得数据后，将获得的质谱峰列表导入 eMSTAT Solution软件，进行多变量解析。每种样本类型的测试结果被分组在一起。该软件使用户能够很容易地识别出有差异的峰值。计分图(图3右下)显示可以区分原发性的组和对5-氟尿嘧具有抗性的组。抗氟尿嘧啶的组具有足够的相似性，可以组合在一起，同时表现出足够的差异，以便将这些组分开。m/z 2，000-7，000范围内检测出的质谱峰在表征化学疗法抗性方面非常有效。 本文通过 MALDI-TOF-MS测定了细胞外囊泡中蛋白质的差异表达，这是由于其母细胞的化疗耐药性增加的结果(1)。 M. Nairn (K. Shima) 样品及方法 来源于原发性大肠癌和对5、25和125uM5-氟尿嘧啶(FU)耐药的淋巴结转移亚克隆的细胞外囊泡和细胞提取物，由维也纳医科大学的 Gerald Stubiger 博士提供。 使用台式MALDI-TOF 质谱分析仪 MALDI-8020 获得细胞外囊泡的蛋白质谱图。采用 CHCA基质，扫描范围2，000-25，000Da. 使用获得的质谱图，通过统计解析软件eMSTATSolutionTM 进行多变量解析(图1)。通过层次聚类、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)，得到了不同细胞群的细胞外囊泡的 差异蛋白图谱。 图1细胞外囊泡分析流程 |结论 这项工作的结果突出了 MALDI-8020 质谱仪与 eMSTAT分析软件相结合的实用性，可以促进生物标志物的发现。 使用MALDI-TOF MS 进行蛋白质分析有望成为未来微创癌症诊断和化疗监测的新工具，例如无需活体组织检查即可早期发现抗药性。 ( 1 ) Stubiger， G. et al.， MA L DI- M S P r otein P r ofiling of C hemor e sistance in Ex t racellular Vesicles of Cancer C ell s ， Analytica l Chemi s try， 90， 13178-1 3 182(2018) ) ( 本产品仅限研究使用，本产品尚未作为医疗器械得到医药品医疗器械法的批准和认证。不能用于医疗检查和治疗，或相关程序。 ) m/z 图2源于原发性大肠癌的细胞外囊泡蛋白质谱图 图34组细胞外囊泡的 PLS-DA分析结果 ●原发性大肠癌 ·5pM 5-氟尿嘧啶抗性 ·25pM 5-氟尿嘧啶抗性 ·125pM 5-氟尿嘧啶抗性 ( 免责声明： ) *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 癌细胞通过细胞外囊泡（EVs）与全身细胞相互作用。细胞外囊泡在体内循环并传递引起恶性表型的分子信息。通过同时培养大肠癌转移淋巴节细胞和5-氟尿嘧啶，我们建立了对化疗耐药性增强的细胞。将通过超速离心分离从该细胞的培养上清液中回收的细胞外囊泡，用作体液中循环的源于癌细胞的生物标志的模型。本文通过MALDI-TOF-MS测定了细胞外囊泡中蛋白质的差异表达，这是由于其母细胞的化疗耐药性增加的结果。这项工作的结果突出了MALDI-8020质谱仪与eMSTAT分析软件相结合的实用性，可以促进生物标志物的发现。使用MALDI-TOF MS进行蛋白质分析有望成为未来微创癌症诊断和化疗监测的新工具，例如无需活体组织检查即可早期发现抗药性。