ACQUITY UPLC H-Class PLUS二元系统中性能评估检测方案(液相色谱仪)

「技术简报]WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE， 「技术简报1 ACQUITY UPLC H-Class PLUS二元系统性能评估 Christopher Henry和Paul Rainville 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 目的 评估ACQUITY"UPLC" H-Class PLUS二元系统的性能。 背景 液相色谱分析方法通常需要平衡多种因素，包括分析速度(即通量)、灵敏度、选择性和稳定性，可能还需要运行长时间缓梯度方法，确保提高所有分析物的分离度，例如大部分肽图分析及多种其他分析型应用。 解决方案 鉴于此，沃特世解决方案将ACQUITY UPLCPLUS二元溶剂管理器(BSM)与ACQUITYUPLC H-Class PLUS流通针式(SM-FTN)样品管理器-结合进行分析，利用二元泵的低延迟体积和高压混合，以及ACQUITY UPLCH-Class PLUS SM-FTN的大内径管路，进一步提高运行稳定性。 ACQUITY UPLC H-Class PLUS二元系统可应对高难度梯度，提高方法稳定性和通量 材料与实验 盐酸利多卡因、盐酸萘甲唑林、盐酸阿米替林、盐酸洛哌丁胺和妥拉磺脲分析标准品购自Sigma-Aldrich(英国普尔)。用甲醇制备所有五种化合物的混合溶液，作为储备液，浓度为1mg/mL。用甲醇/水(50：50)将储备液稀释为100 ng/mL的最终工作溶液。 使用表1所列方法条件分析样品。直接将混合溶液进样至ACQUITY UPLCH-Class PLUS二元系统，并采用沃特世方法转换计算器(图1)推荐的等度保持(300pL)。 图1.带梯度修改功能的沃特世方法转换计算器，用于BSM PLUS。 在采用和未采用等度保持的条件下执行六次进样，评估ACQUITYUPLC H-Class二元系统的日内保留时间重现性。在七天内重复实验四次，评估实验间稳定性。 表1.LC-MS方法详细信息。 第七天， 在ACQUITYUPLC H-Class PLUS四元系统上运行混合溶液进行比较。 流动相A(MPA) 2mM甲酸铵/0.1%甲酸 流动相B(MPB) 乙腈/0.1%甲酸 流速 0.5 mL/min 进样体积 5pL 时间(min) %MPA %MPB 梯度条件 0 95 5 1.5 5 95 3.0 5 95 3.6 95 5 5.0 95 5 色谱柱 ACQUITY UPLC BEH， 1.7 um， 2.1x75 mm ACQUITY QDa ESI正离子模式 211盐酸萘甲唑林、235盐酸利多卡因、278盐酸阿米替林、 实验结果 所有化合物的保留时间统一为两位小数(表2)。 与ACQUITY UPLC H-Class四元系统相比，未采用等度保持的ACQUITY UPLC H-Class二元系统由于延迟体积更小，化合物保留时间也更短，与预期一致。 ACQUITY UPLC H-Class二元系统和BSM PLUS在沃特世方法转换计算器中的所用体积不同，因此采用计算所得等度保持后ACQUITY UPLC H-Class二元系统的保留时间略有增加，范围在6.7%~10.5%之间(表3)。 表2.所有五种组分的平均保留时间(n=6)汇总，包括使用ACQUITY UPLC H-Class二元系统(采用/未采用等度保持)在七天内重复实验四次得到的结果，以及使用ACQUITY UPLC H-Class四元系统得到的结果。 ACQUITY UPLC H-Class二元系统下的平均保留时间(n=6) ACQUITY UPLC H-Class四元系统下的 未采用等度保持 采用等度保持 平均保留时间(n=6) 天数 天数 DAY 化合物 1 2 6 7 1 2 6 7 7 利多卡因 0.96 0.96 0.96 0.96 1.54 1.54 1.54 1.54 1.40 萘甲唑林 0.98 0.98 0.98 0.98 1.58 1.58 1.58 1.58 1.43 阿米替林 1.30 1.30 1.30 1.30 1.89 1.89 1.89 1.89 1.77 洛哌丁胺 1.38 1.38 1.38 1.38 1.99 1.99 1.99 1.99 1.86 妥拉磺脲 1.48 1.48 1.48 1.48 2.08 2.08 2.08 2.08 1.95 表3.ACQUITY UPLC H-Class二元系统采用和未采用等度保持的平均保留时间(四次重复实验)， 与ACQUITY UPLC H-Class四元系统的平均保留时间差异。 平均保留时间 保留时间差异百分比(与ACQUITY 统总体平均保留时间 (n=6) UPLC H-Class四元系统的保留时间相比) 未采用等度保持 采用等度保持 ACQUITY UPLC H-Class四元系统 未采用等度保持 采用等度保持 利多卡因 0.96 1.54 1.40 -31.4 +10.0 萘甲唑林 0.98 1.58 1.43 -31.4 +10.5 阿米替林 1.30 1.89 1.77 -26.6 +6.8 洛哌丁胺 1.38 1.99 1.86 -25.8 +7.0 妥拉磺脲 1.48 2.08 1.95 -24.1 +6.7 如2a~2h所示， ACQUITY UPLC H-Class二元系统在四天的测试中单次运行所得色谱图一致。 未采用等度保持的ACQUITY UPLC H-Class二元系统 采用等度保持的ACQUITY UPLC H-Class二元系统 ACQUITY UPLC H-Class四元系统 图2a~2d.使用ACQUITY UPLC H-Class二元系统进样100 ng/mL样品混合物(未采用等度保持)。 图2e~2h.使用ACQUITY UPLC H-Class二元系统进样100 ng/mL样品混合物(采用等度保持)。 图2i.使用ACQUITY UPLC H-Class四元系统进样100 ng/mL样品混合物。 总结 事实证明， ACQUITY UPLC H-Class二元系统是一种可以转换所述方法的稳定平台，所有有合物日内和日间测试的保留时间(两位小数)均一致。 将方法从ACQUITY UPLC H-Class四元系统直接转换至ACQUITY UPLC H-Class二元系统时(未采用等度保持)，化合物保留时间缩短了24.1%~31.4%。 为使方法转换前后保留时间一致，必须精确确定ACQUITY UPLC H-Class二元系统预柱体积，从而确保转换准确。 直接转换没有梯度延迟，为方法改进提供了机会；分析时间从5分钟缩短至3分钟，相当于运行时间缩短了40%。 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 Waters、The Science of What's Possible、ACQUITY和UPLC是沃特世公司的商标。其他所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676www.waters.com ( 参考文献 ) ( 1. H enry，C.； Wrona， M.； Kirk，J.； Ladd，R. Waters ACQUITYUPLC H-Class Coupled withan ACQUITY QDa Detectorto Provide a Highly Sensitiveand S pecific Solutionfor Cleaning Validation. Waters Application Note， 7 2 0005871 E N ( 2 016). ) 目的评估ACQUITY UPLC H-Class PLUS二元系统的性能背景液相色谱分析方法通常需要平衡多种因素，包括分析速度(即通量)、灵敏度、选择性和稳定性，可能还需要运行长时间缓梯度方法，确保提高所有分析物的分离度，例如大部分肽图分析及多种其他分析型应用。总结事实证明，ACQUITY UPLC H-Class二元系统是一种可以转换所述方法的稳定平台，所有化合物日内和日间测试的保留时间(两位小数)均一致。 将方法从ACQUITY UPLC H-Class四元系统直接转换至ACQUITY UPLC H-Class二元系统时(未采用等度保持)，化合物保留时间缩短了24.1％~31.4％。 为使方法转换前后保留时间一致，必须精确确定ACQUITY UPLC H-Class二元系统预柱体积，从而确保转换准确。 直接转换没有梯度延迟，为方法改进提供了机会；分析时间从5分钟缩短至3分钟，相当于运行时间缩短了40％