生物基质中化合物靶向MRM筛查检测方案(液质联用仪)

「技术简报] 应用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro进行靶向MRM筛查 Rob Lee和Michelle Wood沃特世公司(英国威姆斯洛) 使用Xevo"TQ-S micro对之前开发的方法进行性能评估。 背景 法医毒理学实验室需要采用可信赖的筛查技术来检测死前和死后样本等高度复杂生物基质中的毒物。Waters"于2009年推出了采用ACQUITY""TQD系统的毒理学靶向筛查应用解决方案1。Rosano等人将该方法与其它的死后血液样本筛查方法进行了比较2。该解决方案取得成功后，沃特世于2013年将其拓展至ACQUITY UPLCMI-Class和Xevo TQD系统3，而新发布的Xevo TQ-S micro有望进一步改进此解决方案4。 一种简单、灵敏的UPLC-MS/MS方法，适合在法医毒理学靶向筛查应用中用于检测各种生物基质中的化合物。 图1.ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-Smicro联用系统。 解决方案 采用ACQUITY UPLCI-Class/Xevo TQ-S micro联用系统， 可将这种已建立的UPLC-MS/MS筛查方法应用于最新一代沃特世质谱仪。 实验 试验样品 使用以下商业化人尿液参比对照样品： Basis-lineU， 购自Medidrug(40201)； Blankcheck尿液样品(UR015)和DCT-25%(UR22020A)， 均购自ACQ Science； Urine Toxicology Control DAU HC2(50701)， 购自UTAK； 以及购自Bio-Rad的Liquichek尿液毒理学质控样品，包括Negative Control(460)、C2(442)和S10(673)。 用流动相A将商业化尿液参比对照样品稀释5倍并涡旋混合。样品离心后，将上清液转移至沃特世最大回收样品瓶中，进样分析三次。 LC条件 系统： 带FTN功能的ACQUITY UPLC I-Class 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS C，g，100 A， 1.8 pm， 2.1 mm x150 mm(部件号186003534) 柱温： 50C 样品温度： 10°℃ 进样体积： 5uL 清洗溶剂： 乙腈/水(95：5， v/v) 灌注溶剂： 5mM甲酸铵， pH 3.0 流速： 0.4mL/min 流动相A： 5mM甲酸铵， pH3.0 流动相B： 含0.1%甲酸的乙腈 MS条件 系统： Xevo TQ-S micro 电离模式： ESI+ 毛细管电压： 3.0 KV 离子源温度： 150°℃ 脱溶剂气温度： 400℃ 脱溶剂气流速： 800L/Hr 锥孔气流速： 20 L/Hr 锥孔电压： 采用已建立的MRM方法的预配置参数 碰撞能量： 采用已建立的MRM方法的预配置参数 实验结果 使用已建立的MRM方法采集数据。该方法可筛查178种化合物，每种化合物设置了两个通道(定性离子和定量离子)，并提供锥孔电压和碰撞能量的相关预配置参数。使用上述方法分析三个阴性对照尿液样品(Basis-line U、Blankcheck和Negative Control)和四个分析物含量经过认证的阳性对照尿液样品(C2、S10、DAU HC2和DCT-25%)。使用Target-Lynx"应用管理软件自动处理数据，考虑到TQ-S micro的响应值更高，我们将峰面积阈值的拒绝参数略微提高了一些。将筛查结果与Xevo TQD平台得到的数据比较，评估其等 效性。 两个平台都在阴性对照尿液样品中检测到若干种化合物，包括咖啡因以及与非处方药相关的其它物质，这些都是尿液筛查分析经常检出的物质。 分析经认证的阳性对照尿液样品时，两个平台都在S10对照尿液样品中检测到数量相同的预期化合物。 Xevo TQ-S micro从C2和DAUHC2尿液样品中检出的分析物也与Xevo TQD相同，不过除此之外，它还在C2尿液样品中检测到α-羟基阿普唑仑，并在DAU HC2尿液样品中检测到劳拉西泮。 Xevo TQ-S micro分析ACQScience DCT-25%样品所得的结果证实，该系统对苯二氮卓类药物具有更高的灵敏度。图2详细展示了XevoTQ-S micro额外检测到的五种苯二氮卓类药物。这种商业化参比对照尿液样品中所含的分析物浓度经过认证，相当于欧洲工作场所药物检测协会(EWDTS)目前推荐用于尿样确认检测的cut-off浓度值的25%5；此尿液样品中检测到的苯二氮卓类药物浓度为75 ng/mL. 1 100- 3 2 1.1e6 1.7-氨基氟硝西泮2.溴西泮 奥沙西泮 3.4.去甲地西泮5.替马西泮 4，5 Time 12.00 图2.使用Xevo TQ-S micro(而不是Xevo TQD)和已建立的靶向MRM方法分析商业化参比对照尿液样品ACQ DCT-25%时检测到的苯二氮卓类药物的色谱图。展示了定量离子通道。 使用以下商业化人尿液参比对照样品： Basis-lineU， 购自Medidrug(40201)； Blankcheck尿液样品(UR015)和DCT-25%(UR22020A)， 均购自ACQ Science； Urine Toxicology Control DAU HC2(50701)，购自UTAK；以及购自Bio-Rad的Liquichek尿液毒理学质控样品，包括Negative Control(460)、C2(442)和S10(673)。 总结 Xevo TQ-S micro是一款串联质谱仪，能够快速获取可靠且可重现的定量数据，此外还能在较宽的动态范围内实现一致性良好的低浓度定量分析。本技术简报重点介绍了Xevo TQ-Smicro运行预先配置的靶向MRM定性筛查方法时去号响应更强的优势；分别使用Xevo TQ-S micro和Xevo TQD分析相同的样品，所得数据表明Xevo TQ-S micro检测到的真阳性结果数量有所改善。ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro是一款通用性极高的仪器，适用于毒理学筛查分析，让用户使用同一个仪器平台即可完成覆盖范围极广的定性筛查以及高灵敏度的定量检测。 Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE." Waters、The Science of What's Possible、ACQUITY UPLC、ACQUITY、Xevo和TargetLynx是沃特世公司的商标。其斤所有商标均归各自的拥有者所有。 ( 参考文献 ) ( 1. Roberts M， Lee R， and Wood M. Targeted MRMScreening for Toxicants in Biological Samples by UPLC-MS/MS. 2009. Waters Application Note， 720002749EN. ) ( 2. Rosano T， Wood M， and Swift T. Postmortem D r ug Screening by N on-Targeted and T a rgeted U l tra- Performance L iquidC hromatography-Mass Spectrometry Technology.Journal o f Analytical Toxicology 2011； 35： 41 1 -423. ) ( 3. Roberts M and Wood M. Forensic T oxicologyScreening Using the ACQUIT YI-Class System with the Xevo TQD. 2013. Waters A pplication Note， 720004602EN. ) 4. Xevo TQ-S micro Product Brochure. 2014 WatersMarketing Brochure，720005046EN， 5.European Workplace Drug Testing SocietyGuidelines. http：//www.ewdts.org(accessed 11 Jan 2016). 本文旨在为分析方法原理演示提供支持，文中给出了使用所述配置可获得的典型结果示例。此方法代表用户自己进行方法验证时应采用的基本起始条件。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE." ◎沃特世公司。中国印刷。H AO-PDF 目的 使用Xevo™ TQ-S micro对之前开发的方法进行性能评估。 背景法医毒理学实验室需要采用可信赖的筛查技术来检测死前和死后样本等高度复杂生物基质中的毒物。Waters™于2009年推出了采用ACQUITY™ TQD系统的毒理学靶向筛查应用解决方案。Rosano等人将该方法与其它的死后血液样本筛查方法进行了比较。该解决方案取得成功后，沃特世于2013年将其拓展至ACQUITY UPLC™ I-Class和Xevo TQD系统，而新发布的Xevo TQ-S micro有望进一步改进此解决方案。总结Xevo TQ-S micro是一款串联质谱仪，能够快速获取可靠且可重现的定量数据，此外还能在较宽的动态范围内实现一致性良好的低浓度定量分析。本技术简报重点介绍了Xevo TQ-S micro运行预先配置的靶向MRM定性筛查方法时信号响应更强的优势；分别使用Xevo TQ-S micro和Xevo TQD分析相同的样品，所得数据表明Xevo TQ-S micro检测到的真阳性结果数量有所改善。ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S micro是一款通用性极高的仪器，适用于毒理学筛查分析，让用户使用同一 个仪器平台即可完成覆盖范围极广的定性筛查以及高灵敏度的定量检测。