贝类中麻痹性贝类毒素检测方案(液相色谱柱)

采用 TSKgel 色谱柱参考 GB 5009.213-2016：液相色谱串联质谱法测定贝类中麻痹性贝类毒素 麻痹性贝毒Paralytic shellfish poisoning 【基本信息】 麻痹性贝毒(Paralytic shellfish poisoning， PSP)，一类水溶性的神经毒素，它主要来自有毒的涡鞭毛藻及具麻痹性贝毒的细菌，经食物链的网络转换与流动，不可逆的富集在可食性贝类体内，从而影响浮游动物、鱼类、鸟类和海生哺乳动物，造成毒害。 【样品预处理】 称取5g试样于50mL离心管中，加入5 mL甲酸溶液(5%)，涡旋混匀1 min， 超声提取 5 min，10 000r/min 离心10 min， 移出上清液至另-一50mL塑料离心管中，残渣中再加入4.5 mL 甲酸溶液(0.5%)重复提取两次，合并上清液，用甲酸溶液(0.5%)定容至15 mL。提取液加入20 mL乙酸乙酯，涡旋混合30 s， 10 000 r/min， 弃去上层溶液。再向提取液中加入20mL三氯甲烷，涡旋混合30s，，10 000 r/min 离心 10 min； 取3mL上层溶液加入已活化固相萃取柱中，过柱速度控制在1滴/s，收集流出液至 10 mL刻度离心管中，再加1mL甲酸溶液(0.5%)至固相萃取柱中，收集流出出至3.5 mL。向流出液中再加入4.5 mL乙腈，混匀后放置5 min， 10 000 r/min 离心10 min， 取1mL上清液(相当于0.125g试样)至超滤离心管中，10000 r/min 离心 20 min， 所得滤液供液相色谱-串联质谱测定。 【溶液配制】 麻痹性贝类毒素混合标准中间液，准确一区各组分标准溶液，用水稀释定容，配制GTX4、GTX3、dcGTX3 质量浓度为 500 ng/mL， STX、dcSTX、neoSTX、GTX5 质量浓度为 1.0 ug/mL， GTX1质量浓度为：1.5 ug/mL、GTX2 质量浓度为 1.3 ug/mL、dcGTX2 质量浓度为 2.2 ug/mL 的混合中间液， 4℃避光保存。 【分析条件】 色谱柱： TSKgel Amide-80 (2.0 mmI.D.x25 cm， 5 um) 流动相A：甲酸铵缓冲溶液(5mmol/L) 流动相B：酸酸乙乙(0.5%甲酸) 流速：0.25mL/min 柱温：30℃ 进样体积：20uL 样品盘温度：5℃ 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b)扫描方式：正离子扫描； c)监测方式：多反应监测模式，麻痹性贝类毒素的母离子、子离子和碰撞能量见表2； d)喷雾电压：4500V e) 离子传输毛细管温度：300℃ f)锥孔电压：-10V g) 雾化气流速：：111.7L/min h)辅助气流速： 1.7 L/min i)碰撞气压力：：1.5 mTorr 梯度洗脱表见表1. 表1.流动相梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 0 30 70 3 30 70 3.1 40 60 16.0 40 60 19.0 94 6 23.0 94 6 27.0 30 70 35.0 30 70 表2.10种麻痹性贝类毒素母离子、子离子和碰撞能量 目标化合物 母离子/(m/z) 子离子/(m/z) 碰撞能量/eV GTX2 396.1 316.1 20 298.0 25 GTX3 396.1 298.1 19 316.1 13 GTX1 412.1 332.1 19 313.9 13 GTX4 412.1 *313.9 23 332.1 19 GTX5 380.1 *300.1 7 282.1 15 NcoSTX 316.1 298.0 20 220.0 25 STX 300.1 204.0 21 282.0 22 dcSTX 257.1 221.9 21 126.0 22 dcGTX2 353.3 254.9 18 272.9 18 DcGTX3 353.3 272.9 18 254.9 18 *定量离子。 分析结果： RT：0.00-25.03 图1.10种麻痹性贝类毒素标准溶液的多反应监测色谱图 图2.青蛤样品添加麻痹性贝类毒素特征离子流图 结论 采用 TSKgel Amide-80(2.0 mmI.D.x25 cm， 5 um)配合串联质谱多级反应监测，可实现10种麻痹性贝类毒素的选择性分离检测和定量分析。 参照食品安全国家标准GB 5009.213-2016，采用TSKgel Amide-80(2.0 mmID X 25cm,5um)配合串联质谱多级反应监测，可实现10种麻痹性贝类毒素的选择性分离检测和定量分析。