黄嘌呤类等中强极性化合物，疏水性化合物检测方案(液相色谱柱)

CAPCELL PAK ADME键合金刚烷基色谱柱的使用攻略 C18色谱柱在反相色谱中应用最广泛，适用于分析很多化合物，但是在反相模式下很难对强极性化合物进行分析。而且随着药物代谢产物分析技术的发展，在以药代动力学为代表的多个相关领域中，对于含有多种成分的强极性代谢产物与强疏水性代谢前体进行共同分析的需求也越来越多。 对此，敝社开发了导入与迄迄为止的常规 C18基团结构完全不同的金刚烷基填料。这种填料的官能团结构虽然与常规 C18色谱柱的烷基不同，但仍然是烷基，因此完全可以作为反相色谱柱来使用。 代谢产物和代谢前体的同时分析 在常规液相色谱分析中，反相 C18 (ODS) 色谱柱可满足绝大多数化合物的分析。但是大家应该也遇到过强极性物质保留弱/不保留的情况。这种情况下，般的思路是： ★调整流动相 ★尝试其他种类反相柱(C8、C4、CN、C1等) ★在100%水相流动相条件下，使用高极性色谱柱进行分析 ★改变分离模式―—从反相模式到 HILIC 模式 上面的方法对于极性化合物的分析也许有效，但如果是强极性化合物和疏水性化合物共同分析，怎么办?有个简单有效的方法，您想尝试吗? 在原来开发的反相条件下，仅通过更换色谱柱，就能对多种极性不同的化合物进行同时分析，且能得到良好保留与分离，如果您有这种需求- CAPCELL PAK ADME 色谱柱 你、值得拥有~ 今天 YoYo 将结合各种分析例，阐释 CAPCELL PAK ADME 色谱柱与常规C18柱相比，对于多种极性不同化合物同时分析时的优势~ 一、金刚烷基填料的特长 CAPCELL PAK ADME 色谱柱键合立体笼状结构官能团――金刚烷基团，因此具有与常规 C18色谱柱完全不同的表面特性，在极性较强化合物的分析中有独特的优势，兼具疏水选择性和笼状结构的立体选择性，能够对一些具有微小差异的化合物进行有效分离，在药物代谢分析中也表现出明显的优势。 键合立体笼状结构官能团――金刚烷基团同时采用聚合物包被技术进行表面处理 兼具高表面极性和一定疏水性适用于高极性物质和疏水性物质的共同分析 ▲CAPCELL PAK ADME 色谱柱和常规 C18色谱柱对10种标准物质的分析色谱图 如上图，可以看到，具有极性部位的苯甲酸甲酯保留程度较苯更强。CAPCELL PAK ADME 色谱柱对强极性化合物(峰1-4)具有较强保留，同时，对萘的保留留度与 C18色谱柱相当。 同时我们注意到，苯甲酸甲酯和苯在 C18与 ADME色谱柱上的出峰顺序也发生了翻转，也印证了 ADME 与 C18截然不同的保留模式，而这种特殊的保留模式，也许将为您的分析带来意想不到的收获。 CAPCELL PAK ADME 色谱柱在对极性化合物进行良好保留的同时，对疏水性化合物也能有良好保留。 二、ADME与常规 C18柱的比较 CAPCELL PAK ADME 色谱柱可在反相模式下使用，因具有特殊的疏水性和表面极性，所以可以实现常规 C18色谱柱所无法实现的分离。 下面将通过黄嘌呤类化合物和色氨酸代谢物的两个分析例，将 ADME 与常规 C18色谱柱的分析行为进行比较。 以下两个数据中对比用色谱柱分别为以下色谱柱： ★CAPCELL PAK ADME S5 色谱柱 ★CAPCELL PAK ADME S3 色谱柱 ★常规的5 pm 粒径 C18色谱柱 ★可在100%水相条件下使用的 5 um 粒径 C18色谱柱(高极性 C18色谱柱) 黄嘌呤类化合物的分析(等度) 对咖啡因，可可碱，茶碱和他们的代谢产物产物1，7-二甲基尿酸，1-甲基黄嘌呤及3-甲基黄嘌呤进行共同分析，结果表明， CAPCELL PAK ADME色谱柱所得分离度和理论塔塔数均较好，与常规C18色谱柱和高极性 C18色谱柱相比，对高极性化合物能得到更好的保留与分离。 ▲CAPCELL PAK ADME 和 C18色谱柱对黄嘌呤类化合物的分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱规格：4.6mm i.d. x 150mm 流动相：：0.1 vol%甲酸，水/乙腈=90/10 流速：1mL/min柱 温：40°C 检测器：：UV254 nm 进样量：5pL 样 品：1.3-甲基黄嘌呤 2.1-甲基黄嘌呤 3.可可碱 4.1，7-二甲基尿酸 5.茶碱 6.咖啡因 犬尿氨酸代谢路径中色氨酸代谢产物的分析(梯度) 在梯度条件下对色氨酸及其代谢产物进行分析， CAPCELL PAK ADME色谱柱对极性较强的代谢产物得到良好保留与分离，此数据表据 ADME 也非常适合梯度分析。 ▲CAPCELL PAK ADME 和 C18色谱柱对色氨酸代谢产物的分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱规格： ADME S3； 4.6 mm i.d. x 100 mmADME S5； 4.6 mm i.d. x 150 mm 流动相： A)10 mmol/L 甲酸铵缓冲液(pH4) B)乙腈 [S3]B 5%(0 min)-> 25% (13.3 min)-> 5%(13.4 min) [S5] B 5% (0 min) -> 25%(20.0 min) -> 5% (20.1 min) 流速：： 11mL/min柱 温：40°C 检测器：UV 254 nm 进样量：1pL 样 品：1.尿嘧啶 2.3-羟基犬尿氨酸 3.犬尿氨酸 4.色氨酸 5.3-羟基-2-氨基苯甲酸 6.邻氨基苯甲酸 三、CAPCELL PAK ADME 的保留行为 CAPCELL PAK ADME 对于强极性化合物能实现良好保留与分离， 下图为对实际生药样品的保留。 ▲CAPCELL PAK ADME 色谱柱和 C18色谱柱对天然物质(生药)的分析色谱图 【色谱条件】 色谱柱规格：4.6 mm i.d. x 150 mm 流动相：A)水 B)乙腈 B) 10% (0 min)-> 50% (15 min)-> 80% (20 min) 流速：：1mL/min柱 温：40°C 检测器：：UV 248 nm 进样量：5pL CAPCELL PAK ADME S3 色谱柱与 C18色谱柱相比，整体保留更强，且能得到更好分离。 四、使用 CAPCELL CORE ADME 快速分析 分别使用全多孔型填料的 CAPCELL PAK ADME 核核壳型填料的CAPCELL CORE ADME 两款色谱柱，对胆固醇生物合成路径的8种甾类激素和炔雌醇进行分析。 ▲胆固醇生物合成路径 ▲8种甾类激素和炔雌醇的分析色谱图 【色谱条件】 流动相：A)5mmol/L甲酸铵 B)乙腈 ①B20%(0 min)-> 55 %(30 min) -> 20 %(30.1 min) ②2 B 20 %(0 min) -> 55%(10 min) -> 20%(10.1 min) 流速：：①1mL/min ②400 pL/min柱 温：40°C 检测器：：UV 220nm 进样量： ①5pL ②25pL 样 品： 1.醛固酮 2.氢化可的松 3.可的松 4.泼尼松龙 5.雌二醇 6.睾酮 7.雌酚酮 8.炔雌醇 9.17α-羟孕酮 将：CCAPCELL CORE ADME 色谱柱的流速提升一倍时，可得到与 CAPCELLPAK ADME色主柱同等程度的分离效果，缩短分析时间。 因此，如果您使用 CAPCELL PAK ADME 色谱柱开发了合适的分析方法，直接将色谱柱更换为I CAPCELL CORE ADME， 同时提高流速，这样的做法可以实现快速分析，提高分析效率。 五、CAPCELL CORE ADME 对肽类的分析 四肽 Arg-Gly-Asp-Ser是细胞吸附性蛋白质所共有的细胞吸附活性配列 (Arg-Gly-Asp)。以下是四肽和五肽的分析示例。 ▲CAPCELL CORE ADME 色谱柱对肽类的分析色普图 【色谱条件】 色谱柱规格：2.1mm i.d.x100 mm 流动相： A) 0.1vol%三氟乙酸，水 B)0.1 vol%三氟乙酸，乙腈 B) 1%(0 min)->10%(10 min)->1%(10.1min) 流速：200 pL/min柱温：：335°C 检测器：FPDA210 nm 进样量：1pL 样 品：1.四肽 Arg-Gly-Asp-Ser (M.W.433.4) 2.五肽 Gly-Arg-Gly-Asp-Ser (M.W.490.5) 对强极性小分子肽得到了充分保留，四肽与五肽得到了良好分离。 综上，我们对导入金刚烷基团的 CAPCELL PAK ADME 色谱柱对于极性化合物的保留行为进行了考察，，可以看出 CAPCELL PAK ADME 色谱柱对强极性化合物的保留作用良好。 另外，核壳型色谱柱CAPCELL CORE ADME 对于强极性化合物也能得到良好的保留与分离，通过分析条件平移，可实现较 CAPCELL PAK ADME 色谱柱更快速的分析。 因此可以得出结论， CAPCELL PAAKK AADDMMEE 和 和CAPCELL CORE ADME 色谱柱可以对常规 C18色谱柱所无法保留的强极性化合物进行良好保留，并且因其能在反相模式下使用，故可作为改善 C18色谱柱分离效果的“第二选择”色谱柱。 -总结- 由于 ADME色谱柱具有其他类型色谱柱所不具备的特殊表面极性和疏水性，因此最适用于常规 C18色谱柱(ODS)无法实现的强极性化合物与疏水性化合物同时保留的情况。 当使用 C18色谱柱分析保留弱、无法取得分离的时候，使用 ADME 色谱柱，在原色谱条件下也能改善分离效果。因此， ADME 是您分析时的第二选择色谱柱。 CAPCELL PAK ADME 介绍+说明书 http：//www.sanyofine.com.cn/product/hplc/lizijiaohuanzhu/2017/0703/144.html *因为我们比较谦虚，本文中所有“第二选择”色谱柱的范围仅限于大曹三耀产品线~第一选择当然是MGII啦~ 由于ADME色谱柱具有其他类型色谱柱所不具备的特殊表面极性和疏水性，因此最适用于常规C18色谱柱（ODS）无法实现的强极性化合物与疏水性化合物同时保留的情况。当使用C18色谱柱分析保留弱、无法取得分离的时候，使用ADME色谱柱，在原色谱条件下也能改善分离效果。因此，ADME是您分析时的第二选择色谱柱。