盐酸二甲双胍中主要成分及杂质分析检测方案(液相色谱柱)

数为3200-3300，既满足要求，工作效率也提高了。 CAPCELL PAK SCX 色的柱的使用及维护 ——-盐酸二甲双胍分析例合辑 相信大家在使用离子交交模式或离漓交换色谱柱时，难免会遇到一些问题， YoYo一直想给大家分享一些特殊色谱柱珀使用注意事项及维护方法的干货帖，正巧最近好多客户纷纷反馈了使用大曹三耀CAPCELL PAK SCX 色谱柱对盐酸二甲双胍进行分析得到的良好数据，也许能帮助到大家~ 所以今天 YoYo 将以盐酸二甲双胍为分析例，阐释 一、、LCP SCX 色谱柱的选型及使用方法 二、SCX柱常见问题及解决方案 三、针对二甲双胍的 SCX 柱替代方案 本篇科普贴的阅读时间大约需要10min~准备好了吗~Let's go~ 二甲双胍 溶液。照高效液相色谱法(通则0512)试验，用磺酸基阳离子交换键合硅胶为填充剂，以 1.7%磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节 pH 值至3.0)为流动相，检测波长为218nm。取盐酸二甲双胍与三聚氰胺，加水溶解并稀释制成每1ml中含盐酸二甲双胍0.25mg与三聚氰胺0.1mg的溶液，取1ml，用流动相稀释至50ml，摇匀，取 10pl注入液相色谱仪，记录色谱图，二甲双胍峰与三聚氰胺峰的分离度应大于 10.0。精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品品液各10pl，分别注人液相色谱仪，记录色谱图至二甲双胍峰保留时间的2倍。供试品溶液 上图为2015年版《中国药典》盐酸二甲双胍的有关物质分析方法，黄色部分是关键点： 1、使用磺酸基阳离子交换色谱柱， 即 SCX 色谱柱 2、二甲双胍和三聚氰胺分离度应大于10.0 3、记录色谱图至二甲双胍峰保留时间的2倍 接下来就分几种分析情况进行逐一说明~ 1.【常规分析】要求：常规条件下，保持良好分离 使用 CAPCELL PAK SCX UG80 S5； 4.6 mm i.d. × 150 mm色谱柱，严格按照中国药典方法进行分析，盐酸二甲双胍与三聚氰胺分离度为21.62，远远超过药典分离度大于10的要求，双氰胺也得到充分保留，与溶剂峰基本分离。 1 ▲系统适用性图谱 *峰1：三聚氰胺，峰2：二甲双胍，峰3：双氰胺 色谱柱： CAPCELL PAK SCX UG80 S5； 4.6mm i.d. ×150 mm 流动相：1.7%磷酸二氢铵(磷酸调节 pH3.0) 流 ：速：1.0mL/min 柱E 温：35℃波样 长：218 nm 品：盐酸二甲双胍 5 ug/mL， 三聚氰胺2 ug/mL 进样量：10pL 使用150mm柱长的SCX 色谱柱，在保证分离的前提下，二甲双胍主峰保留时间又不至过长，较250mm 的常规柱型来说分析效率更高。 2.【快速分析】要求：快速分析+良好分离 若想进一步缩短分析时间，可以在不改变方法的前提下，使用柱长更短的4.6 mm i.d. ×100 mm 规格 SCX色谱柱进行分析，如下图，二甲双胍峰保留时间 19.34min， 峰底宽约3分钟，拖尾因子为1.04，与三聚氰胺之间分离度为18.5，同样满足药典要求! Total 121820 100.000 ▲系统适用性图谱 Peak# S/N 1 双氰胺 1.604 34289 90.433 1.469 -- 2255 186.15 2 2.219 3627 9.567 1.328 3.210 1280 10.21 Total 37916 100.000 ▲双氰胺图谱 使用 100mm 柱长进行分析，每针分析时间仅需 40min， 和150mm 柱长结果相比，分析效率又有了显著提升~ 3.【杂质分析】要求：各杂质间取得良好分离 如果样品中要求分离的杂质较多，也可以选用长柱，即 CAPCELL PAK SCX UG80 S5； 4.6mmi.d. × 250 mm 进行分析。为缩短分析时间，可将流动相盐浓度调整为 20mmol/L，pH调至2.8，在此条件下，二甲双胍保留时间为 18.183min， 且与三聚氰胺及其杂质 E、C、B间亦取得了良好分离结果。 ▲二甲双胍与相关杂质的分离 使用250mm 柱长的 SCX 色谱柱，通过调整分析条件，也可实现杂质的良好分离，同时兼顾保留时间不至过长。 4.【溶出分析】要求：缩短分析时间，提高工作效率 如果您做溶出，为提高工作效率，还可以进一步缩短柱长——使用4.6 mmi.d. × 50 mm规格的 SCX色谱柱，做二甲双胍的溶出度分析，浓度0.25 mg/mL， 进样5pl， 理论塔板 至此，我们将基于药典方法对盐酸二甲双胍分析的几种情况及其对应的色谱柱规格做了总结，感谢相关客户提供的良好反馈结果~YoYo 认为很具有参考意义，不知道有没有帮助到大家呢~ 接下来， YoYo 想对于使用 SCX色谱柱进行分析时的常见问题及对应解决方案进行介绍，仍然结合盐酸二甲双胍分析中出现的问题进行说明，希望可以帮助大家解决以下可能遇到的问题： ★基线下降、不稳 ★峰形不佳、柱效下降 ★杂质分离度不佳 二、SCX 柱常见问题及解决方案 ①基线问题——平衡 基线不平、下降、漂移等现象通常是由于色谱柱平衡不充分造成的。 下图为平衡不充分导致基线下沉的例子，可以看到，在经过30h 的充分平衡后，可以得到良好稳定的基线。 ▲充分平衡前后的基线对比 ▲经过 30h 的平衡，基线良好，二甲双胍峰形正常 -关于 SCX柱流动相置换- 由于 SCX 为强阳离子交换色谱柱，故所需平衡时间较长，同时，出厂封存液为100%乙乙，而盐酸二甲双胍药典方法流动相条件为盐溶液，因此，为避免盐析，流动相的置换就显得尤为重要。 (1)20%乙腈水溶液——冲洗 0.5h (2)低浓度盐溶液(流动相稀释10倍))——冲洗1h(*10倍柱体积~42mL~42min) (3)流动相——过夜平衡 -SCX柱的保存- (1)短期保存：流动相封存(酸性盐溶液) (2)长期保存：冲洗-置换为100%乙腈 *注意：堵头一定要拧紧，常温保存。 ②色谱峰峰形异常——冲洗 在实际样品分析中，色谱柱在经过一段时间的使用后，可能会出现峰形变差的现象，通常是样品基质或杂质在色谱柱中蓄积或盐析带来的影响。 ▲峰形变差(客户反馈) 上图为客户反馈的峰形变差色谱柱，将该柱寄回实验室，进行柱效测定的结果如下图，峰形变差，理论塔板数降低明显。 ▲柱效测定结果 ▲柱头颜色发暗，有白色结晶，怀疑为盐析 通过低盐溶液的长时间冲洗，峰形及理论塔板数均能得到明显改善。 Minutes ▲经过冲洗后得到恢复的柱效测定结果 (1)注意色谱柱及液相系统的保存液与流动相之间的溶解性及置换 (2)连续几天分析时，过夜时，可对色谱柱进行小流速通液操作 客户关注杂质B和C的分离情况，如下图，杂质B和杂质C在14min 左右出峰，两杂质峰完全重合。 ▲杂质B、C峰完全重合 色谱柱：CAPCELL PAK SCX UG80 S5； 4.6 mm i.d. × 150 mm 流动相：4%磷酸二氢铵 (pH3.0)流速：1.0 mL/min柱温：35℃波长：218nm样品：客户提供系统适用性样品进样量：20pL 调整流动相 pH可有效改善杂质B和C的分离度。如下图， pH为2.8时，杂质B和C之间分离度为1.80， 满足要求。 ▲调节pH 对杂质B、C分离度的影响 如下图，客户使用250mm 柱长的 SCX 色谱柱进行分析，二甲双胍主峰与杂质E的分离效果不理想。 ▲系统适用性图谱-二甲双胍与杂质E分离不理想 色谱柱 ： CAPCELLPAK SCX UG80 S5；4.6mm i.d. ×250mm 流动相：1.7%磷酸二氢铵(磷酸调节pH3.0) 流速：1.0mL/min柱波 温：25℃ 长：218nm 样品：客户制备提供 进样量：10pL 降低 pH可有效改善杂质E与二甲双胍之间的分离度。 ▲系统适用性图谱-调节 pH对分离度的影响 *SCX色谱柱的 pH使用范围为2-7， 在pH2.0条件下可以稳定使用。 以上就是使用 SCX 色谱柱分析例及使用注意事项的汇总，以盐酸二甲双胍这一典型项目为分析例进行了详细说明。 接下来，对于二甲双胍这个项目，还有个发散出来的分支数据—；——不使用 SCX 色谱柱，也可以分析吗? 感兴趣就往下翻吧~ 三、针对二甲双胍的 SCX 柱替代方案 使用离子交换色谱柱分析，平衡时间太长，如果不拘泥于药典方法，也可以选择 CAPCELLPAK 大家族里的另一款“奇葩”·-键合立体笼状结构D金刚烷基色谱柱———(CAPCELLPAK ADME， 也能得到良好分离与保留~ 0 2 4 6 8 10Minutes 12 ▲系统适用性图谱-ADME色谱柱 *峰上标数字由下至上依次为理论塔板数、分离度与不对称因子。 色谱柱： CAPCELL PAKADME S5； 4.6mm i.d. ×250 mm 流动相：20mmol/L 磷酸二氢钠水溶液 流速：1.0mL/min柱波样 温：35℃ 长：225nm 品：双氰胺、三聚氰胺和二甲双胍浓度均为 0.01mg/ml (50%甲醇溶解，流动相稀释) 进样量：5pL 使用 ADME 色谱柱进行分析，平衡时间较短，且能保证良好保留与分离~是不是很优秀~ 附： 相信大家在使用离子交换模式或离子交换色谱柱时，难免会遇到一些问题，YoYo一直想给大家分享一些特殊色谱柱的使用注意事项及维护方法的干货帖，正巧最近好多客户纷纷反馈了使用大曹三耀CAPCELL PAK SCX色谱柱对盐酸二甲双胍进行分析得到的良好数据，也许能帮助到大家~所以今天YoYo将以盐酸二甲双胍为分析例，阐释：一、CP SCX色谱柱的选型及使用方法——如何缩短分析时间，提高分析效率，同时保证分离度二、SCX柱常见问题及解决方案——使用离子交换色谱柱遇到疑难杂症？解决方法在这里~三、针对二甲双胍的SCX柱替代方案——不想用离子交换色谱柱？没关系~我们还有ADME~想知道更深入的信息，请下载资料哦~