乳品中香兰素检测方案(固相萃取仪)

PreeKem屹尧科技编号：SUF1501 PreeKem屹尧科技 全自动固相萃取-液相色谱法检测奶粉中香兰素、乙基香兰素的测定 摘要： 本文建立了奶粉中香兰素、乙基香兰素素的 ASPE-HPLC (ASPE， AutomaticSolid-Phase Extraction)测定方法。奶粉中分别添加浓度为5ug的香兰素、乙基香兰素的标准物质，经纯水提取后进行 ASPE 净化。 HPLC检测显示：香兰素、乙基香兰素在0.5-10 u g/mL范围内，线性关系均良好，平均回收率分别为香兰素105.8%、乙基香兰素102.5%，平行测定三次添加回收的相对标准偏差 (RSD)为香兰素0.57%、乙基香兰素 0.76%。该方法回收率、重复性和精密度好，适用范围广，满足香兰素、乙基香兰素检测的要求。 关键词：奶粉，香兰素，乙基香兰素， ASPE-HPLC 01 香兰素亦称香草素、香草醛等，学名为3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，广泛地应用于香料、化妆品、奶粉、食品的生产，香兰素是一种合成香精，通常分为甲基香兰素和乙基香兰素，具有香荚兰香及浓郁的奶香，乙基香兰素香气较甲基香兰素更浓。在药物合成及金属涂料等工业中也得到广泛利用。根据欧盟专家委员会2000年2月24日报到，大剂量可导致头痛，恶心，呕吐，呼吸困难，甚至损伤肝肾功能。我国《食品添加剂使用标准 GB 2760-2011》明确规定0到6个月婴幼儿配方食品中不得添加任何食用香料。 图1 香兰素结构图 1.1样品提取 (1)称取奶粉样品1.0g (2)加入10mL水溶液，置于摇床振摇(300r/min)30min (3) 冷冻离心(5℃，1000r/min)5min，取上清液5mL待净化 1.2样品 ASPE 净化 (1)待净化液采用EXTRA-ASPE 进行净化 (2)在 HLB (60mg，3mL)小柱上装上3 mL柱密封塞 (3)将塞好密封塞的固相萃取小柱放入 EXTRA全自动固相萃取仪的3 mL SPE 架上。 (4)将溶剂瓶S1 中装入500 mL 甲醇溶液；溶剂瓶V1中装入800 mL水溶液。 (5)在控制 EXTR-ASPE 系统的 PC软件方法设置界面上，设置奶粉中香兰素、乙基香 兰素的固相萃取方法(详细步骤参见表1)。 (6)将待净化样品放入样品架内。 (7)设置运行界面，开始样品净 化操作。 (8)固相萃取完成后，洗脱液经0.002mol/L 乙酸铵定容至5mL，混匀后上 HPLC分析 动作 位置 溶剂 体积(mL) 抽溶剂速度(mL/min) 打溶剂速度(mL/min) 清洗 外针 水 6 120 120 活化 甲醇 3 15 1.5 上样收集 样品 5 15 1.0 空气 1 15 2.0 清洗 外针 水 6 120 120 淋洗 水 20 15 1.5 空气 6 60 60 上样收集 甲醇 1 8 1.0 空气 6 60 60 建立了 APSE-HPLC 法测定奶粉中香兰素、乙基香兰素的分析方法。实验显示：香兰素的平均回收率为105.8%、方法精密度为0.57%，乙基香兰素的平均回收率为 102.5%、方法精密度0.76%。 色谱柱： CNW Athena C18-WP 4.6mm*250mm， 5um柱温：30℃检测器： DAD检测波长：273nm流动相：乙乙：0.1甲酸水溶液=33：67流速：1.0mL/min进样量：10uL 3.1香兰素、乙基香兰素的标准色谱图(见图1) 化合物名称 标准加入量(ug) 平均回收率(%) RSD (%) 香兰素 5 105.8 0.57 乙基香兰素 5 102.5 0.76 3.2女奶粉中香兰素、乙基香兰素的标准添加色谱图(见图2) 平行测定3次添加实验，计算方法的平均回收率及相对 标准偏差(RSD)如表2 实验结果表明：该方法准确可靠，操作方便，重m性好。适合奶粉中香兰素、乙基香兰素的快速、 春兰索乙基春兰素#19 奶加-1 UVVIS 1WVL：273 nm 7.00 蒙香兰素乙基香兰素#23 1PPM UV_VIS_1WVL 273 nm 7.00-2-香兰素-6.7376.00 1-香兰-6.743 6.00-5.00 5.004.00 4.00v3-乙基香素-10.6932.Z香兰素1070383.00 3.001x2.002 2.00-1.00：1.0063730.000.00--1.00儿-100JJL0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.00.0 20 4.0 6.0 8.0 10.0 120 14.0 16.0 180 20.CTime Imin EXTRA 全自动固相萃取仪