奶粉中三聚氰胺检测方案(固相萃取仪)

Preekem 全自动固相萃取-高效液夜色谱-质谱/质谱法检测奶粉中的三聚氰胺 编号： SUFET-2-J 摘要： 以GB/T 22388-2008为参考依据，建立了奶粉中三聚氰胺的ASPE-LC/MS (ASPE， Automatic Solid-PhaseExtraction) 检测法。采用内标法，在奶粉中添加量为100 ng的三聚氰胺标准和Ns-三聚氰胺内标物， ASPE净化后。 LC/MS/MS检测显示：三聚氰胺回收率为111.4%。该方法回收率和重复性好，适用范围广，满足奶粉中三聚氰胺检测要求。 关键词：奶粉，三聚氰胺，15Ns-三聚氰胺，ASPE-LC/MS 1奶粉样品处理 1.1奶粉样品提取 称取奶粉样品1g 8 mL 1%三氯乙酸溶液，2mL乙腈，超声提取10min， 振荡提取 10min， 4000 r/min 离心 10 min，上清液过滤 1%三氯乙酸溶液定容至25mL， 取5 mL滤液，用5mL水混匀做待测液。 经用阳离子 SPE 小柱， 经EXTRA-ASPE净化。 1.2奶粉样品ASPE 净化 (1)洗涤液采用 EXTRA-ASPE 进行净化。 (2)在阳离子交换 SPE (Solid-Phase Extraction) 小柱上装上3mL 柱密封盖。 (3)将塞好密封盖的固相萃取小柱放入 EXTRA 全自动固动萃取仪的3mL SPE 架上。 (4)将溶剂瓶 S1 中装入500 mL去离子水溶液，S2 中装入 500 mL甲醇溶液， S3中装入500 mL 5%氨化甲醇溶液；溶剂瓶 V1中装入800 mL去离子水，用来清洗探针。 (5)在控制EXTRA-ASPE 系统的 PC软件方法设置界面上，设置奶粉中三聚氰胺的固相萃取方法(详细步骤参见表1)。 表1ASPE 净化详细方法列表 动作 位置 溶剂 体积 抽溶剂速度 打溶剂速度 清洗 外针 水 6mL 120mL/min 120 mL/min 活化 甲醇 3.0mL 15 mL/min 1.0 mL/min 空气 0 mL 活化 水 5.0 mL 15 mL/min 1.5 mL/min 空气 0.5mL 15 mL/min 5.0 mL/min 上样 样品 5.0mL 15 mL/min 1.5mL/min 空气 0 mL 清洗 外针 水 9.8mL 120mL/min 120mL/min 淋洗 水 3.0 mL 15 mL/min 1.5mL/min 空气 0.5 mL 15 mL/min 5.0 mL/min 淋洗 甲醇 3.0 mL 15 mL/min 1.5 mL/min 空气 9.8 mL 60 mL/min 60 mL/min 洗脱 5%氨化甲醇 6mL 15 mL/min 1.0 mL/min 空气 5mL 60 mL/min 60 mL/min (6)将待净化样品放入样品架内。 (7)设置运行界面，开始奶粉样品净化操作。 (8)固相萃取完成后，净化液于50℃下氮吹蒸发至干，用流动相溶液定容至1mL，用于液相色谱/质谱/质谱分析。 2.液相色谱/质谱检测条件 2.1液相色谱条件： 色谱柱： C18柱，150mmx4.6 mm， 5 um 流动相：A：乙腈+0.1%甲酸， B： 5mmol/L乙酸铵水溶液+0.1%甲酸 流速：600uL/min 柱温：40℃ 进样量： 10 uL 梯度洗脱程序 时间 (min) 流速 (mL/min) 流动相A (%) 流动相B (%) Curve 0 0.6 5 95 6 3 0.6 5 95 6 3.01 0.3 5 95 6 4 0.3 95 5 6 4.02 0.6 95 6 6 0.6 95 5 6 6.3 0.6 5 95 6 10 0.6 5 95 6 2.2质谱条件 离子源：电喷雾 ESI 扫描方式：正离子 检测方式：多反应监测 电喷雾电压：2.8KV 雾化温度：380℃ 锥孔气流速：70L/h； 雾化气流速：900L/h； 驻留时间：0.4sec 母离子、子离子及对应的锥孔电压和碰撞电压见表1 化合物 母离子 子离子 锥孔电压(V) 碰撞电压(V) 三聚氰胺 127 68 35 22 85* 35 17 15N3-三聚氰胺 130 87 35 17 注： “*”为定量离子 图1三聚氰胺及其内标物的标准 LC/MS/MS色谱图 图2三聚氰胺加标回收 LC/MS/MS 色谱图 表2样品加标回收实验 序号 化合物名称 标准加入量(ng) 实测值 (ng/mL) 回收率(%) 1 三聚氰胺 100 111.4 111.4 3.结论 建立了 APSE-LC/MS/MS 法测定奶粉中三聚氰胺残留量的分析方法。实验显示：奶粉中三聚氰胺的回收率为111.4%。 实验结果表明：该方法准确可靠，操作方便，重现性好。适合奶粉中三聚氰胺残留量的快速、准确检测。