何首乌中大黄素甲醚检测方案(液相色谱柱)

中国药典2010年版对应高效液组色谱方法图库(第一册)65163引领分析沂技.在北尿谱oaQQ40061 .中国药典2010年版对应高效液色谱方法图谱库(第一册) 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 何首乌分析 结合蒽醌 何首乌的高效液相色谱 《中国药典》收载情况 【来源】本品为蓼科植物何首乌Polygonum nultiflorum Thunb.的干燥块根。秋、冬二季叶枯萎时采挖，削去两端，洗净，个大的切成块，干燥。 【功能与主治】解毒，消痈，润肠通便。用于瘰疬疮痈，风疹瘙痒，肠燥便秘；高血脂。 【含量测定】色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80：20)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取大黄素对对品、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成制1mL含大黄素80pg，大黄素甲醚40pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL， 称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5mL作为供试品溶液A(测游游蒽醌用)。另精密量取续滤液25mL，置具塞锥形瓶中，挥去溶剂，精密加8%的盐酸溶液20mL， 超声处理(功率100W， 频率40kHz)5分钟， 加三氯甲烷20 mL， 加热回流1小时，取出，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，取酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次15mL， 合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B(测总蒽醌用)。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与上述两种供试品溶液容10pL，注入液相色谱仪，测定，即得。 结合蒽醌含量=总蒽醌含量一游离蒽醌含量 本品按干燥品计算，结合蒽醌以大黄素(C15H10O5)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计，不得少于0.10%。 何首乌药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】《中国药典》中何首乌的含量测定以结合蒽醌为质量评价依据之一，何首乌在Incrtsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为甲醇-0.1%磷酸溶液系统时，流动相的比例对大黄素、大黄素甲醚与相邻色谱峰的分离具有显著的影响，选择甲醇比例在75~85%(v/v)之间均可以获得满意的分离度，考虑到分析时间长短，仍选用流动相比例为甲醇-0.1%磷酸溶液(80：20)；柱温对大黄素、大黄素甲醚与相邻色谱峰的分离基本无影响较大，故选用40℃柱温。 何首乌 样品来源：本品为蓼科植物何首乌Polygonun multiflorum Thunb.的干燥块根。秋、冬二季叶枯萎时采挖，削去两端，洗净，个大的切成块，干燥。产地：四川。 对照品：大黄素(上海同田生物技术有限公司，批号：09021821，含量：99.37%)大黄素甲醚(上海同田生物技术有限公司，批号：08080522，含量：98.686%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5mL作为供试品溶液A(测 引领分析沂技.在北尿谱oaQQ4006165163 何首乌 游离蒽醌用)。另精密量取续滤液25mL，置具塞锥形瓶中，挥去溶剂，精密加8%的盐酸溶液20mL， 超声处理(功率100W，频率40kHz)5分钟，加三氯甲烷20mL， 加热回流1小时，取出，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，取酸液再用三氯甲烷振摇提取3次， 每次15mL， 合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液B(测总蒽醌用)。 对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含大黄素80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6× 150 mm，5pm) 流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80：20) 柱温：40℃检测波长：254 nm流速：1mL/min 进样量：10pL ※此条件同样适用于lnertsil ODS-4 (4.6×150mm，5 u m) 推荐使用条件范围： 仪器配置： 色谱柱： Inertsil ODS-3 (4.6× 150 mm， 5pm)流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(75~25：85~15)柱温：35~40℃检测波长：254nm流速：1.0mL/min LC-10ADvp 高压泵 DGU-14A脱气机 SPD-M10Avp二极管阵列紫外可见光半微量检测器 CTO-10ASvp柱温箱 SIL-HTc 自动进样器 标准样品 实际样品 名称 保留时间(min) 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 大黄素 9.253 3295352 198418 6943 1.07 大黄素甲醚 18.310 640225 22155 9079 1.07 引领分析科技技京谱朋ro阴dQQ4006165163 大黄素标准曲线 大黄素甲醚标准曲线 浓度mg/L 浓度mg/L 重现性数据如下 大黄素 No. 标准样品 保留时间 峰面积 实际样品 保留时间 峰面积 1 2 9.091 6007427 3295352 3294237 3289196 9.093 6032201 3 9.088 6031947 9.253 3289196 AverageRSD% 9.091 6023858 9.254 3292928 0.027 0.23 0.025 0.099 大黄素甲醚 No. 标准样品 保留时间 峰面积 实际样品 保留时间 峰面积 1 2 3 18.214 82435518.201 82269418.277 829791 18.310 640225 18.319 635780 18.306 637772 AverageRSD% 18.231 8256130.22 0.45 18.312 637925 0.036 0.35 *本数据山北京人学医学部陈世忠教授课题组提供 中国药典word版exe版pdf版及培训资料精华帖http：//www.yaojia.org/forum. php?mod=viewthread&tid=fromuid= 色谱柱Inertsil ODS-3 (4.6 x 150 mm, 5μm) 流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(80:20 )柱温: 40℃检测波长254 nm 流速1ml/min 进样量10μL※此条件同样适用于Inertsil ODS-4 (4.6 x 150 mm, 5μm)