玄参中哈巴俄苷检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 玄参分析 玄参的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl. 的干燥根。冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，晒或烘至半干，堆放3~6天，反复数次至至燥。 【功能与主治】清热凉血，滋阴降火，解毒散结。用于热入营血，温毒发斑，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，骨蒸痨嗽，目赤，咽痛，白喉，瘰疬，痈闸疮毒。 【含量测定】照高效液相色谱法(附录VID)测定。 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以0.03%磷酸溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为210 nm。理论板数按哈巴俄苷与哈巴苷峰计算均应不低于5000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~10 3→10 97→90 10~20 10→33 90→67 20~25 33→50 67→50 25~30 50→80 50-20 30~35 80 20 35~37 80→3 20→97 对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品与哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇制成每1mL含哈巴苷60 ug、哈巴俄苷20ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(分三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，浸泡1小时后，超声处理(功率500 W， 频率40 kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 uL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含哈巴苷(CisH4010)和哈巴俄苷(Cz4Ho0，)的总量不得少于0.45%。 2.玄参药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中玄参的含量测定以哈巴苷和哈巴俄苷为质量评价依据，其在Inertsil ODS-4中的色谱特点为：在流动相组成为乙晴 0.03%磷酸溶液梯度洗脱系统时，流动相乙腈的比例对哈巴苷和哈巴俄苷及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，随着乙腈的比例提高哈巴苷和哈巴俄苷的保留时间均明显缩短；乙腈的初始比例也会影响二者的分离效果，乙 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 腈初始比例越低时，二者与相邻色谱峰的分离能明显提高。柱温较高时有利于缩短哈巴苷和哈巴俄苷以及其他杂质峰的保留时间同时对分离度的有所改善。经过考察，使用下表所示的流动相，柱温45℃的色谱条件下，使用Inertsil ODS-4(4.6×150mm， 5pm)柱能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um)柱亦可得到良好分析效果。 时间(分钟) 流动相A(乙腈%) 流动相 B(0.03%磷酸%) 0~10 3→10 97→90 10~20 10→33 90→67 20~25 33→50 67→50 25~30 50-80 50→20 30~35 80 20 35~37 80→3 20→97 玄参 样品来源：本品为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl. 的干燥根。产地：山东 对照品：哈巴苷(上海同田生物制品有限公司，批号：20905769-1，含量：98%)哈巴俄苷(上海同田生物制品有限公司，批号：215398335，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品本末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL， 密塞，称定重量，浸泡1小时后，超声处理(功率500W，频率40 kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品与哈巴俄哈对照品适量，精密称定，加30%甲醇制成每1mL含哈巴苷60 ng、哈巴俄苷20 pg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-4 (4.6×150 mm， 5 um) 流动相：乙腈(A)：0.03%磷酸溶液(B)梯度洗脱 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~10 3→10 97→90 10~20 10-33 90-67 20~25 33→50 67-50 25~30 50-80 50-20 30~35 80 20 35~37 80-3 20-97 柱 温： 45℃ 检测波长：哈巴苷210 nm、哈巴俄苷280 nm 流 速：1.0 mL/min 进样量：10pL 推荐使用条件范围： 色谱柱：Intersil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um) 流动相：乙腈(A)：0.03%磷酸溶液(B)，梯度洗脱 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~10 3→10 97→90 10-20 10→33 90→67 20~25 33→50 67→50 25~30 50→80 50→20 30~35 80 20 35~37 80→3 20-97 柱温：25~45℃ 检测波长：260nm 流速：1.0mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 CTO-20AC 柱温箱 DGU-20A，脱气机 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 对照品 对照品 实际样品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 哈巴苷 11.528 355761 40952 36034 1.11 哈巴俄苷 25.719 254303 43708 359409 1.17 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 哈巴苷标准曲线 重复性数据如下： 哈巴苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 11.488 201667 11.689 94214 2 11.485 202092 11.694 96335 3 11.484 197494 11.694 94194 Average ]1.486 200417 11.692 94914 RSD% 0.02 1.2 0.03 1.2 哈巴俄苷标准曲线 哈巴俄苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 25.721 426861 25.801 30548 2 25.722 424768 25.801 30548 3 25.727 426060 25.796 30281 Average 25.724 425896 25.800 30459 RSD% 0.01 0.25 0.01 0.51 浓度 mg/mL *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-4 (4.6 x 150 mm, 5um)流动相：乙腈(A):0.03%磷酸溶液(B)梯度洗脱柱温：45 ℃检测波长：哈巴苷210 nm、哈巴俄苷280 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul