决明子中橙黄决明素检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 决明子分析 决明子的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为豆科植物决明Cassia obtuse folia L. 或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。 【功能与主治】清热明目，润肠通便。用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；检测波长为284 nm；理论板数按橙黄决明素峰计算应不低于3000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~15 40 60 15~30 40→90 60→10 30~40 90 10 对照品溶液的制备：精密称取大黄酚对照品和橙黄决明素对照品适量，加无水乙醇-乙酸乙酯(2：1)溶液制成每1mL含大黄酚30 ug、橙黄决明素20 ug的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL， 称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL， 蒸蒸，加稀盐酸溶液30mL，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30mL， 合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，浅渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2：1)溶解，转移至25 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 2.决明子药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中决明子的含量测定以大黄酚、橙黄决明素为质量评价依据，其在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：在流动相组成为乙腈-0.1%磷酸溶液系统时，流动相的比例对大黄酚、橙黄决明素及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙腈的比例在40%(0~15 min)、40%→90%(15~30 min)、90%(30~40min)时，其分离度最好，车前子色谱图中杂质峰较少且与大黄酚、橙黄决明素相比含量很低，可以获得较好的分离度及分析效果；柱温对大黄酚、橙黄决明素的保留时间及与相邻色谱峰的分离度也有一定乜影响。经过考察，在流动相比例为乙腈-0.1%磷酸溶液40%：60%(0~15 min)、→90%：60%十10%：40%(15~30 min)、90%：10%(30~40 min)， 柱温25℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。使用Inertsil ODS-4(4.6×250 mm，5 um)柱亦可得到良好分析效果。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 决明子 样品来源：本品为豆科植物决明Cassia obtuse folia L. 的干燥成熟种子。产地：安徽。 对照品：大黄酚(中国药品生物制品检定所，批号：110796-200513，含量：98%)， 橙黄决明素(成都曼斯特生物科技有限公司，批号： A0417，含量：98%)。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，蒸干，加稀盐酸溶液30mL， 置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷振完提取4次， 每次30mL， 合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯(2：1)溶解，转移至25mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：精密称取大黄酚对照品和橙黄决明素对照品适量，加无水乙醇-乙酸乙酯(2：1)溶液制成每1mL含大黄酚30 pg、橙黄决明素20ug的混合溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3(4.6×250 mm， 5 um) 柱温：25℃ 检测波长：284 nm 流 速：1.0mL/min 进样量： 10 uL 流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~15 40 60 15~30 40→90 60→10 30~40 90 10 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器 DGU-20A，脱气机 CTO-20AC温箱 CBM-20A 系统控制器 对照品 对照品 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 橙黄决明素 21.497 344260 62192 22248 0.99 大黄酚 35.113 885407 112221 411063 1.08 橙黄决明素标准曲线 重复性数据如下： 橙黄决明素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 21.491 1350814 21.887 1223404 2 21.497 1344260 21.858 1221718 3 21.473 1343717 21.791 1236190 Average 21.487 1346264 21.845 1227104 RSD% 0.06 0.29 0.23 0.65 浓度 mg/mL 大黄酚标准曲线 大黄酚 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 35.12 888481 35.139 1747859 2 35.113 885407 35.125 1745081 3 35.117 888155 35.108 1735885 Average 35.117 887348 35.124 1742942 RSD% 0.01 0.19 0.05 0.36 浓度 mg/mL *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6 x 250 mm, 5um)柱温：25°C检测波长：284nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液 梯度洗脱