血竭中鉴别检测方案(液相色谱仪)

两种“柬龙牌”血竭的鉴别 摘要：目的：对两种“柬龙牌”血竭进行鉴别。方法TLC、UV和HPLC色谱进行分析：结集两种“柬龙牌 血竭的化学成分具有显著不同 结论TLC、UV和HPLC法可作为龙血竭的真伪鉴别的方法。 关键词：龙血竭；TLC；UV；HPLC 血蝎具有活血散瘀、消炎止痛、收敛止血、生肌敛疮等功效，为名贵中药材之一，我国中医药学中的记载和应用已有1500余年的历史。1999年国家药品监督管理局颁布的国家标准中收载了国产(广西)血竭，并定名为“龙血竭”。龙血竭为百合科龙血树属植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis(Lour．)S．C．Chen的古脂木材提取物，目前龙血竭的原料生产厂家主要有广西中医学院制药厂生产的“芒果牌”广西血竭和中国科学院版纳华胜制药厂生产的“柬龙牌”血竭等。现发现在安国药材市场上出现冠以中国科学院版纳华胜制药厂生产的 柬龙牌”血竭伪品，我们对市场上两种 柬龙牌”血竭进行鉴别。 1 材料和仪器 1．1 材料：“柬龙牌”血竭正品，购自毫州药材公司．为百合科龙血树属植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis(Lout．)S．C．Chen的树脂提取物。“柬龙牌”血竭伪品，购自安国药材市场(由胡迎庆鉴定)。 1．2 仪器与试剂：日本岛津-1601紫外分光光度仪。日本岛津LC-1OAT高教液相色谱仪．SPD-10A紫外检测仪，C-R8A记录仪，CTO-10AS柱箱。剑叶龙血树C、7，4'-二羟基黄酮、7-羟基-4'-甲氧基黄烷和龙血素A、龙血素B、紫檀蔑、白藜芦醇对照品自剑叶龙血树木材中提取分离(自制．经峰面积归一化法测得纯度为98.0%以上)。GF254薄层层析硅胶，青岛海洋化工厂。所用试剂为分析纯或色谱纯。 2 薄层层折 龙血竭的化学成分研究表明，剑叶龙血素C 、7，4’-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、7-羟基-4’-甲氧基黄烷、紫檀芪和白藜芦醇为其主要化学成分，我们选择这些化合物作为对照品进行鉴别。 2．1 供试品溶液的制备：取“柬龙牌”血竭正品和伪品各10 mg，加甲醇1 mL溶解，制成每毫升含10mg的溶液，作为供试品溶液。 2．2 对照品溶液的制备：取剑叶龙血素C 、7，4’-二羟基黄酮、龙血素A、龙血素B、7-羟基4’-甲氧基黄烷、紫植蔑和白藜芦醇对照品，制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。 2．3 薄层色谱 2．3．1 分别吸取上述供试品溶液和剑叶龙血素C对照品溶液各2μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，展距10cm，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，“柬龙牌”血竭正品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的荧光斑点；伪品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上无荧光斑点。 2．3．2 分别吸取上述供试品溶液和龙血素A、龙血素B、7一羟基4’-甲氧基黄烷、紫植蔑对照品溶液各2μL，点于同一以羧甲基纤维索钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚-甲苯(8：1)为展开剂，展开，展距10cm，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，“柬龙牌”血竭正品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的荧光斑点；伪品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上无荧光斑点。 2．3．3 分别吸取上述供试品溶液和白藜芦醇、7，4'-二羟基黄酮对照品溶液各2μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为牯合剂的硅胶GF254薄层板上．以氯仿-甲醇(8：1)为展开剂，展开，展距10cm，取出，晾干，置紫外灯(254nm和365nm)下检视，“柬龙牌”血竭正品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的荧光斑点；伪品供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上无荧光斑点。 3 紫外光谱 取“柬龙牌”血竭正品和伪品各15mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，吸取该溶液过滤，滤液1mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，在220～450nm范围内进行扫描，记录紫外吸收光谱。 4 高效液相色谱 4．1 供试品溶液的制备：取“柬龙牌”血竭正品和伪品各50mg，置25mL量瓶中。加甲醇溶解并稀释至刻度，用0.45μm 滤膜滤过，作为供试品溶液。 4．2 色谱条件 4．2．1 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-1%冰醋酸溶液(24：76)为流动相；室温24℃．流速为1mL／min，检测波长为330nm。分别吸取“柬龙牌”血竭正品和伪品供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录HPLC色谱图。 4．2．2 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-1%冰醋酸溶液(34：66)流动相；室温24℃．流速为1.5mL／min，检测波长为280nm。分别吸取“柬龙牌”血竭正品和伪品供试品溶液各2OμL．注入液相色谱仪，记录HPLC 色谱图。 5 结果 薄层色谱表明，正品“柬龙牌”血竭与伪品在化学成分上具有显著差异；正品“柬龙牌”血竭含黄酮、黄烷、二氢查耳酮和芪类等化合物，薄层色谱上具有明显斑点，而伪品在与对照品色谱相应位置上却无荧光斑点，说明伪品 柬龙牌”血竭不含黄酮、黄烷、二氢查耳酮和蘸类等化合物。 紫外光谱中，正品 柬龙牌”血竭在284nm 有最大吸收并在330nm处有一肩峰，280nm和330nm左右为黄酮、黄烷、二氢查耳酮和蘸类的特征吸收，伪品血竭中不含这类化合物，故紫外光谱中不显示各类化合物的特征吸收。 高效液相色谱图中，在330nm 检测时可见正品血竭的黄酮类、蘸类化合物的色谱峰，伪品在330 rim处的吸收趋于零，未见有龙血竭黄酮类、蘸类化合物的特征色谱峰，330nm时与紫外光谱相吻合；280nm有龙血竭的二氢查耳酮类等化合物的特征色谱峰，伪品血竭未见特征色谱峰与280nm检测时与紫外光谱和薄层色谱一致；以上结果为鉴别龙血竭的真伪提供了依据。 参考文献： [1] 王雪莽，唐人九，卢文杰．等．剑叶龙血树化学成分的研究I剑叶龙血素C的结构测定[J]．广西中医药．1993．16(1)：39． [2] 王锦亮，李兴从，江东福，等．云南血竭的化学成分及抗真菌活性[J]．云南植物研究．1995，17(3)：336