红景天中红景天苷检测方案(液相色谱仪)

第27卷增刊2008年5月Vol.27. Suppl.2008-5分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory第27卷增刊2008年5月Vol.27. Suppl.Sur2008-5 HPLC 法测定红景天除鞣质后红景天普含量的变化 杨晓艳，芦启琴，张晓峰*1 (1.中国科学院西北高原生物研究所，西宁810008；2.中国科学院研究生院，北京100049) 摘 要：建立测定红景天溶液除鞣质前后红景天普含量变化的 HPLC法。采用Therm-Ci8 (4.6 mm X200 mm， 5 um)为色谱柱，V(甲醇)：V(水)=15：85为流动相，流速1.0mL/min，检测波长275 nm，柱温255℃。红景天苷的线性范围为1.16~5.8ug；平均回收率分别为100.16% (RSD=0.62%)。所建立的HPLC 法可用于测定红景天中红景天苷的含量。 关键词：红景天；红景天天；HPLC；含量变化 红景天是景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodida)植物，其根、根茎或全草既可作药用也可作保健食品，素有“高原人参”的美称，具有滋补强壮、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗癌、延缓衰老及适应原样等作用。红景天的主要有效成分是红景天苷。目前，红景天饮料及保健品大量出现，但是由于红景天中含有大量鞣质21，严重影响了红景天溶液的口味和澄清度。为矫正其涩味，提高澄清度，需除去其中的鞣质。目前，红景天饮料及食品大多用明胶澄清法去除鞣质，用HPLC法测定除鞣前后红景天含量变化的报道尚未见，本文参考中国药典红景天中红景天苷含量测定的方法，以红景天苷为对照品，建立 HPLC法测定除鞣前后红景天苷含量的变化，本法简便准确，为红景天在新的保健及药用领域的运用提供理论依据。 实验部分 1.1 仪器与试剂 Agilent1100 高效液相色谱仪： Thermo-Cl8(4.6mm X200 mm， 5 {m)色谱柱，Agilent 1100 G1315A二极管阵列检测器， Agilent 1100 G1311A四元泵，Agilent 1100配套化学工作站。KQ-250DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)， Mettler ToledoXS205 电子天平。 对照品：红景天(批号：110818-200404)由中国生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯，水为超纯水。红景天样品由我所张晓峰研究员鉴定为红 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱： Thermo-Ci8(4.6 mm X200 mm，5um)，流动相：V(甲醇)：V(水)=1585，流速1 mL/min，柱温25℃，检测波长275 nm，进样量8L。对照品及样品在此色谱条件下的色谱图，见图1~图3。 图1 红景天苷对照品色谱图 图2 红景天药材样品色谱图(除鞣质前) ( * 作 者简介：杨晓艳(1981-)，女，硕士研究生； E-mail： ya n gxiaoyan9999 @163.com ) 图3 红景天药材样品色谱图(除鞣质后) 2.2 样品溶液的制备 2.2.1 未除鞣质样品溶液的制备 将本品红景天根粉碎，过60目筛，精密称取0.5g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞称重，超声处理0.5h，取出冷至室温，称重，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，过0.45 um滤膜，作为样品溶液待用。 2.2.2 除鞣质样品溶液的制备 将本品红景天板粉碎，过60目筛，精密称取1.0g，用甲醇配成浓度为 0.05 g/mL的溶液，加入明胶除鞣质(明胶用量为0.7%)不停搅拌，待明胶与鞣质充分反应后离心，8500 r/min ， 18 min 。离心后去除沉淀得澄黄色透明溶液。取除鞣质后红景天溶液10 mL，密塞称重，超声处理0.5h，取出冷至室温，称重，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，过0.45 um滤膜，作为样品溶液待用。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品5.8 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度别为0.58 mg/mL 的对照品溶液。 2.4 标准曲线制备 精密吸取“2.3”配制的红景天苷对照品溶液，分别精密吸取2，4，6，8，10uL，进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对红景天普进样量做线性回归。回归方程为y=261.34x +25.716，r=0.9996。结果表明红景天苷进样量在1.6~5.8 ug范围内与峰面积有良好的线性关系。 2.5 精密度试验 精密吸取“2.3”配制的对照品溶液8uL，重复进样5次，按上述色谱条件操作，测峰面积，以峰面积计算 RSD 为 0.52%，结果表明，本方法精密度良好。 2.6 重现性试验 分别精密称取同一批次样品0.5g，按“2.2“样品溶液的制备方法制备6份供试液，进样，按上述色谱条件测定除鞣质前红景天苷的平均含量为1.38%， RSD 为 0.92%，除鞣质后红景天苷的平均含量为1.36%， RSD 为0.83%。结果表明，本方法重现性良好。 2.7 回收率试验 取“2.6"项下样品，精密称取6份(各0.5g)，精密加入红景天苷对照品(1.856 mg)，放入10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。测定结果见表1，RSD为0.62%。 表1 红景天苷回收率实验结果(n=6) 样品含量/mg 加入量/mg 理论值/mg 实测值/mg 回收率/% 平均值/% RSD/% 1.804 1.856 3.6600 3.639 99.43 1.815 1.856 3.6710 3.6843 100.37 100.16 0.62 1.822 1.856 3.6780 3.6949 100.46 1.704 1.856 3.6500 3.6265 99.36 1.829 1.856 3.6850 3.7025 100.47 1.836 1.856 3.6920 3.7242 100.87 2.8 样品测定 分别取红景天除鞣质前后的样品，按样品溶液制备方法处理后在上述色谱条件下测定，以外标法计算含量，结果见表2。 样品名称 红景天苷平均含量/% 未除鞣质红景天 1.38 除鞣质红景天 1.36 3 结果与讨论 (1)对红景天对照品溶液在200~400nm范围内进行扫描，结果在223 nm 和275 nm附近有最大吸收，但在275 nm 附近出峰较稳定，且杂质干扰少，故选择275nm作为检测波长。 (2)采用明胶澄清法去除红景天中的鞣质，不影响红景天苷的含量。 (3)超声技术已经广泛应用于红景天苷的提取，可以大幅度地提高红景天苷的提取率，不仅节省溶剂而且极大地缩短了提取时间。超声提取一般在常温条件下进行，避免了红景天苷的高温分解。考虑到超声提取方法简单，耗时短，提取率高，所以本实验选择超声提取法。 (4)目前红景天饮料等保健品大量出现，但由于含有大量鞣质，严重影响了口感及澄清度，加工过程中经常用明胶除去溶液中的大量鞣质， 但是除鞣后是否影响有效成分红景天普含量的报道尚未见，本文采用 HPLC 法测定除鞣前后红景天苷的含量变化，结果表明除鞣后不影响红景天的含量。该方法简便易行、灵敏准确、重现性好，可为红景天饮料及保健品中红景天苷的含量分析提供一个很好的色谱参考条件。 ( 参考文献 ) ( 1 宋月英，马玉珍，韩慧文等.中草药，2004，35(2)： 235 ) ( 12 张伶俐，陶 静，李玉娟等.华西药学杂志，2000， 15(6)：483 ) 3] 王 洋，张 璞.植物研究，2001，21(1)：1134 ( 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部.北京：北京化学出版社，2005.106 ) —China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net