大血藤中大黄素含量检测方案(液相色谱仪)

摘要:　 大血藤为木通科植物大血藤Sargentodoxacuneata (Oliv1) Rehd1et wils 的干燥藤茎。别名红藤、血藤、大活血等,具有清热解毒、活血祛风等功能,用于肠痈腹痛,经闭痛经,风湿痹痛,跌扑肿痛。但是在某些地方,人们常拿鸡血藤伪品作大血藤用,为了保证临床用药安全,所以很有必要控制它的质量。据文献[1 ,2 ]报道,大血藤中含有大黄素、大黄酚等蒽醌类成分,本文研究建立了大黄素的反相高效液相色谱含量测定法,为大血藤饮片质量控制提供依据。 建立反相高效液相色谱法测定大血藤中大黄素含量的方法。方法　选用DiamonsilTMC18色谱柱(200 mm ×4.6 mm ,5μm) ;流动相:甲醇- 0.1 %磷酸水溶液(80∶20) ;检测波长:254 nm;流速:1.00 mL/ min ;柱温:35 ℃。结果　大黄素进样量在0.0416～0.2080μg 范围内线性关系良好,r = 0.9997 ,平均加样回收率为10.14 % ,10 批大血藤饮片中大黄素的含量范围为6.72～13.71μg/g。结论　该方法操作简便,快速,准确,重现性好。 1 　仪器与试药 111 　仪器 大连依利特P200Ⅱ型液相色谱仪或P230液相色谱仪及相应的工作站、在线脱气机、柱温箱、、电子天平。 112 　试药 6 个产地的10 批大血藤饮片,分别购自湖南、浙江、湖北、江西、江苏、河南,经北京中医药大学中药学院生药系阎玉凝教授鉴定为大血藤Sargento2doxa cuneata (Oliv1) Rehd1et wils ;甲醇、磷酸(均为分析纯) 、纯净水;对照品大黄素( Emodin) :购自中国药品生物制品检定所,批号为0756 - 9908。 2 　方法与结果 211 　对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品5.20 mg ,置50 mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取大黄素对照品1 mL 置5 mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成每1 mL 含20.8μg 的大黄素对照品溶液。 212 　供试品溶液制备方法的考察 曾经考察过索氏提取3 h (提取已经完全) 与超声30 min 2 种方法,结果无显著差异。进一步又考察了超声15 、30 、45 min 3 个时间段大黄素的含量,经测定超声30 min 已经提取完全,45 min 与30 min无显著差异,故采用超声30 min 的提取方法。 213 　供试品溶液的制备 取河南产大血藤饮片粉末(过60 目筛) 约6 g ,精密称定,精密加入甲醇50 mL ,称定重量,超声30min ,放冷,补足重量,滤过,精密吸取续滤液25 mL蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至2 mL 容量瓶中,用甲醇定容,摇匀,用0.45μm 微孔滤膜滤过,即得。 214 　检测波长的选择 吸取大黄素对照品溶液适量,以甲醇为空白,在200～600 nm 扫描,测定其紫外吸收光谱。λmax = 254nm ,因此选定254 nm 作为检测波长。 215 　色谱条件 DiamonsilTMC18色谱柱(200mm ×4.6 mm ,5μm) ;流动相:甲醇：0.1 %磷酸水溶液(80∶20) ;检测波长:254 nm;流速:1.00 mL/ min ;柱温:35 ℃。 2. 6 　方法的专属性 在拟定的色谱条件下,分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定,得到特征峰,与其他峰基本分离,结果见图1。                  A 大黄素对照品　B 河南产大血藤样品　1 大黄素                                  图1 　HPLC色谱图 217 　线性关系考察 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μL 依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值( A) 与进样量( X) 进行线性回归,得回归方程为: A= 283512 X - 518476 , r = 0.9997 ,结果表明大黄素在0.0416～0.2080μg 范围内与其色谱峰峰面积呈良好的线性关系。 218 　样品精密度试验 精密吸取供试品溶液15μL ,连续进样5 次,测定峰面积,大黄素峰面积RSD = 2.6 % ,说明精密度良好。 219 　稳定性试验 精密吸取供试验品溶液分别在0、1、2、3、4 h 进样15μL ,记录峰面积,结果显示样品在4 h 内基本稳定,其RSD 为2.7 %。 3 　小结 由于河南产大血藤性状与药典记载得极为相近,所以本文选河南产大血藤饮片作方法学考察。由于大黄酚含量比大黄素还低,所以色谱图上没有它的峰。另外根据文献报道的含大黄素制剂中大黄素的含量测定条件[3 ,4 ] ,本文对流动相比例进行了调整,结果甲醇- 0.1 %磷酸水溶液(80∶20) 、柱温35 ℃时,大黄素色谱峰分离良好。本文首次建立了大血藤饮片中大黄素的含量测定方法,该法简便,快速,准确,重现性好,对大血藤及其复方的质量标准研究提供科学依据。 参　考　文　献 1 　王兆全,王先荣,杨志华. 红藤化学成分的研究. 中草药,1982 ,13(3) :7～9 2 　李珠莲,巢志茂,陈　科. 红藤脂溶性成分的分离和鉴定.上海医科大学学报,1988 ,15(1) :68～69 3 　张　云,宋旭峰. 高效液相色谱法测定轻身减肥片中大黄素与大黄酚的含量. 中国实验方剂学杂志,2002 ,8(5) :4～6 4 　曹　红,刘　云. 高效液相色谱法测定金薏尿石颗粒剂及大黄药材中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素的含量. 药物分析杂志