甘草中黄酮检测方案(微波萃取仪)

食品研究与开发检测分析2006.Vol.27.NO.8127 超声一微波协同萃取法提取甘草黄酮的研究 罗锋'，汪河滨，杨玲2，周忠波 (1.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室，新疆阿拉尔843300；2.塔里木大学文理学院，新疆阿拉尔 843300) 摘 要：采用超声-微波协同萃取法，从甘草中提取黄酮，用分光光度法测定黄酮含量。结果：用超声-微波协同萃取法提取，测得甘草中黄酮的含量为2.04%，平均回收率为97.64%(n=6)。结论：甘草黄酮的提取可优选超声-微波协同萃取法。 关键词：甘草黄酮；超声-微波协同萃取；含量测定 STUDYING ONULTRASONIC-MCROWAVE SYNERGISTIC EXTRACTION FLAVONOIDS OF GLYCYRRHIZA LUO Feng， WANG He-bin， YANG Ling， ZHOU Zhong-bo (1.Xinjiang Production & Construction Corps Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological.Resources in Tarim Basin， Alar 843300， Xinjiang， China； 2. College of Art and Science， TarimUniversity， Alar 843300， Xinjiang， China) Abstract： The extraction and content determination of flavonoids of Glycyrrhiza were studied. Ultrasonic-mi-crowave synergistic extraction technique applied in flavonoids of Glycyrrhiza were obtained， content determinationwith colorimetry. Using ultrasonic- microwave synergistic extraction the flavonoids content of Glycyrrhiza is2.04 %， recovery rate is 97.64 %， RSD=1.19%(n=6). Ultrasonic-microwave synergistic extraction technique ap-plied in extracting flavonoids of Glycyrrhiza is better than regular method. Key words：Glycyrrhiza flavonoids； ultrasonic- microwave synergistic extraction； content determination 甘草是豆科 Leguminosae) 甘草属(Glycyrrihiza L.)植物"，具有清热解毒、止渴祛痰、补脾和胃、调和诸药等功效。中医处方离不开甘草，俗称“十方九草”，自古至今，广为药用，兼有“药之国老、众药之王”的尊号，是临床最常用的中草药品种，其主要有效成分为甘草酸和甘草黄酮。据报道，甘草黄酮是一类生物活性较强的物质，有抗溃疡、抗菌、抗炎、解痉、降血血、镇痛等作用用，1986年以来还发现甘草黄酮具有防治艾滋病的功效。对甘草黄酮的研究越来越引起人们的注意和重视。本研究利用超声-微波协同萃取法提取甘草中的黄酮并测定其含量。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 材料：乌拉尔甘草塔里木盆地人工载培) 试剂：芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)，乙醇 ( 基金项目：塔里木大学校长重点基金项目2004-6) ) ( 作者简介：罗锋1971-)，男汉)，讲师，硕士，研究方向：天然产物化学。 ) (天津市化学试剂二厂)；硝酸铝北京化工厂)；氢氧化钠北京化工厂)；亚硝酸钠北京化工厂)均为分析纯。 1.2 仪器 Sartorious 电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)； 超声-微波协同萃取仪(上海新拓微波溶样测试有限公司)； T6-紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)等。 1.3 方法 1.3.1 对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥至恒温的芦丁对照品25.00 mg，加适量70%乙醇在水浴微热溶解，放冷后转移至250 mL容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度为 0.1 mg/mL 的标准品溶液，备用。 1.3.2 供试液的制备 取1.00g 甘草粉末，精密称定，加70%乙醇50mL，称重，超声-微波协同萃取2次，每次30 min， 称重，补 足损失重量，过滤，收集滤液，即得。 1.3.3 最大吸收峰的确定 精确吸取芦丁对照品溶液2mL，加70%的乙醇至.5 mL， 然后加入5%的NaNO，溶液1mL，室温放置6min，再加入10%的Al(NO；)31mL，混匀，室温放置6min， 加入4%的 NaOH 10 mL，用水稀释至25mL，混匀，放置15 min， 在分光光度计上扫描波长从400 nm~600 nm之间的吸收度，结果在510 nm波长处有最大吸收值。 1.3.4标准曲线的绘制 精确吸取芦丁对照品溶液0，1，2，3，4mL，分别加70%的乙醇至5mL，然后加入5%的 NaNO溶液1mL， 室温放置6 min， 再加入 10%的 Al(NO)1 mL，混匀，室温放置6 min，加入4%的 NaOH 10 mL，用水稀释至25mL，混匀，放置15 min， 以不加样品的溶液为参比液，在510 nm处测定其吸光度值。测定结果计算得直线方程： A=0.017 7C+0.000 2，r=0.9996 2结果与分析 2.1样品含量测定 2.1.1 常规方法 取1.00g甘草粉末，精密称定，加70%乙醇 50mL，称重，索氏提取两次，每次60 min，称重，补足损失重量，过滤，合并收集滤液，按标准曲线同样的方法测定其吸光度值，计算黄酮的含量。结果见表1。 2.1.2超声-微波协同萃取法 取1.00g 甘草粉末，精密称定，加70%乙醇50mL，称重，超声-微波协同萃取2次，每次 30 min，称重，补足损失重量，过滤，合并收集滤液，按上述方法测定其吸光度值，计算黄酮的含量。结果见表1。 表1甘草中黄酮的含量 提取方法 测定次数 黄酮含量(%) 平均含量(%) RSD(%) 1 1.77 常规方法 2 1.78 1.78 0.86 3 1.80 1 2.02 超声-微波协 同萃取法 2 2.05 2.04 1.02 3 2.06 2.2 重复性试验 取6份甘草粉末，精密称定。分别加入70%的乙醇50mL，称重，超声-微波协同萃取2次，每次30 min，称重，补足损失的重量，过滤，收集滤液。各取上述样品溶液1mL，分别加70%的乙醇至5mL，然后加入5% 的NaNO溶液1mL，室温放置6 min，再加入10%的Al(NO3)1 mL，混匀，室温放置6 min，加入4%的 NaOH10mL，用水稀释至25mL，混匀，放置 15 min， 在510 nm处测定其吸光度值。试样中黄酮百分含量的RSD=1.50%6 n=6)。测定结果见表2. 表2 重复性试验结果 试样号 1 2 3 4 5 6 百分含量%) 2.00 2.05 2.02 2.03 2.04 2.09 2.3 稳定性试验 精密吸取标准品溶液1mL，样品溶液1mL，同标准曲线和样品测定的操作，在15、30、45、60 min 测定吸光度。结果表明，标准品和样品溶液在60 min 内都基本稳定。 2.4 回收率试验 取已知黄酮含量的供试品溶液1mL于25mL容量瓶中，再加入不同量的标准品溶液，依法测定，结果平均回收率为97.64%，RSD=1.19%(n=6)。结果见表3. 表3回收率试验结果 样品 对照品 测得总黄酮 回收率%) 平均 RSD %) 编号 加入量(mg) 的量(mg) 回收率%) 1 0.100 0.192 6 96.30 2 0.100 0.1980 99.00 3 0.100 0.1961 98.05 97.64 1.19 4 0.200 0.2964 98.80 5 0.200 0.2917 97.23 6 0.200 0.2893 96.43 3讨论 3.1超声-微波协同萃取法使样品介质内各点受到的作用一致，降低目标物与样品基体的结合力，加速目标物从固相进入溶剂的过程；经超声-微波协同萃取法提取甘草中总黄酮的含量为2.04%，较常规法高出近0.3%。 3.2超声-微波协同萃取法在甘草黄酮类成分的提取中已经显示出明显的优势，具有省时、节能、提出率高等优点。所以甘草黄酮的提取可优选超声-微波协同萃取法。 ( 参考文献： ) ( 中国植物志[M].北京：科学出版社，1998，24(2)：167~175. ) ( 中华人民共和国药典(一部) [ M.北京：人民卫生出版社，1990：71~72. ) ( 金宏.浅谈甘草药理作用[].时珍国医国药，2000，11(1)：78~79. ) ( 国家医药管理局中草药情报中心站.植物学有效成分分册[M].北 京：人民卫生出版社，1986：465~4 6 5. ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved http：//www.cnki.net