黑果枸杞中多糖检测方案(微波萃取仪)

西北农业学报 2007，16(1)：157~158，175Acta Agriculturae Boreali-occi dentalis Sinica 西 北 农 业 学 报.15816卷 超声-微波协同萃取法提取黑果枸杞多糖的研究 汪河滨，白红进1.，王金磊* (1.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室，新疆阿拉尔 843300；2.塔里木大学文理学院，新疆阿拉尔 843300) 摘 要：采用超声一微波协同萃取法从黑果枸杞中提取多糖，并用蒽酮一硫酸比色法测定多糖含量。结果表明用超声声微波协同萃取法提取，测得黑果枸杞多糖含量为10.89%，平均回收率为100.07%，RSD=1.89%(n=3)。该方法简单快速、准确。 关键词：黑果枸杞；多糖；超声一微波协同萃取；含量测定 中图分类号：Q658.2 文献标识码： A 文章编号：1004-1389(2007)01-0157-02 Studying on Ultrasonic-Microwave Synergistic ExtractionPolysaccharides in Lycium rethenicum Murr wAN G He-bin， BAI Hong-jin2and WANGJin-lei * (1. Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Resources in Tarim Basin， Xinjiang Production & Construction CorpsAlar Xinjiang 843300 ，China； 2. College of Arts and Sciences， Tarim University， Alar Xinjiang 843300， China) Abstract ： Polysaccharide was extracted from Lycium rethenicum Murr and the content was deter-mined. Ultrasonic- microwave synergistic extraction technique applied in polysaccharide of Lycium rethenicum Murr were obtained， content determination with anthrone-sulphuric acid colorimetry. Re-sults showed content of polysaccharide was 10.89 %， recovery rate is 100.07%，RSD=1.89%(n= 3). The method was simple， rapid and accurate. Key words ： Lycium rethenicum Murr； Polysaccharides； Ultrasonic- microwave synergistic extraction；Determination content 黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)是一种荒漠植物，属茄科(Solanaceae)枸杞属(LyciumL.)是我国西北部分地区一种特有的野生植物资源。其浆果球形，成熟后为紫黑色，无毒有甜味，是一种亟待开发的野生植物资源21. 本文采用超声一微波协同萃取法及蒽酮-硫酸比色法对黑果枸杞多糖进行提取及含量分析，以期为综合开发利用黑果枸杞提供理论依据。 仪器与试药 1.1 仪器 试验采用的仪器有SartoriusBS210S电子天 平(北京塞多利斯天平有限公司)；超声微波协同萃取仪(上海新拓微波溶样测试有限公司)；T6一紫外可见分光光度计(北京普析通用有限公司)。 1.2 试药 黑果枸杞干果(2005年采自新疆塔里木盆地)，葡萄糖(上海化学试剂采购供应分厂，AR)，蒽酮(上海化学试剂采购供应五联化工厂，AR)，95%乙醇(天津市北方化玻销购公司)，浓硫酸(乌鲁木齐天岳化学试剂有限公司，AR)。 2 方法与结果 ( *收稿日期：2006-08-02 修回叵期：2006-09-15 ) ( 基金项目：新疆维吾尔自治区高等学校科研计划资助项目(No. XJEDU2005 G07)；塔里木大学校长基金重点资助项目(No.T D Z- KZD05002)。 ) ( 作者简介：汪河滨(1980-)，男，甘肃会宁人，硕士，讲师，研究方向为天然产物化学。Email： wanghebin329 @163.com *为植物科技学院生物技术专业2008届本科生。 ) 2.1 标准曲线的制备3] 2.1.1 标准溶液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1006g，用蒸馏水定容至100mL 的容量瓶中，摇匀，得葡萄糖标准溶液。分别移取2.50 mL、5.00 mL、7.50 mL 、10.00mL的标准溶液置100mL容量瓶中。 2.1.2 蒽酮-硫效溶液的配制 精密称取0.3067g蒽酮，缓慢加入100 mL 浓硫酸，边加边搅拌，直至溶解后呈黄色透明溶液，将其置棕色瓶中于冷暗处保存(现配现用)， 2.1.3 标准曲线的制备 分别移取1mL系列标准溶液于具塞试管中，以1mL蒸馏水作空白，每管再加入4mL蒽酮-硫酸溶液，立即摇匀，置冰水浴中，然后一起置沸水浴中加热7 min，之后用流动水迅速冷至室温，放置10 min 后，于620 nm处测定吸光度值，以葡萄糖浓度(C)对其吸光度(A)作回归处理，得回归方程： A=0.006C+0.0054，R=0.9996。线形范围：25.15~100.6ug。 取样品溶液按标准曲线制备项下的方法测其吸光度，每隔0.5h测定1次，结果表明，样品溶液2h内稳定性良好。 2.2 黑果枸杞多糖的制备与精制 称取黑果枸杞粉末10.00g，用70%乙醇100mL 在50℃下提取2次，每次 15 min ，过滤后将药渣加水 100 mL 在75℃下提取2次，每次15 min。合并两次提取液，过滤，减压浓缩至1/5~1/4体积，然后加入95%的乙醇使溶液中乙醇含量达到80%，低温静置过夜，抽滤，将沉淀用少量水溶解，再加入乙醇进行二次醇沉，低温静置过夜，抽滤，滤渣在60℃真空干燥，备用。 2.3 换算因子的测定 精密称取黑果枸杞多糖7.2 mg、7.6 mg两份，置50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀作贮备液。精密吸取贮备液1.0mL，照标准曲线制备项下的方法依法测定。按下式计算换算因子，f=W/CD。其中W 为黑果枸杞多糖质量(mg)； C为多糖液中葡萄糖的浓度(mg ·L儿)；D为多糖的稀释因素。取两者平均值，计算得f=1.644. 2.4 黑果枸杞中多糖的提取与测定 2.4.1 常规法提取与测定 称取黑果枸杞粉末 10.00 g，加70%醇醇100 mL，在50℃水浴中提取2次，每次15 min，过滤后将药渣中加水100 mL于75℃水浴提取2次，每次15 min。合并两次提取液，移至100mL量瓶中，将残渣用水洗涤2次，洗涤液并入量瓶中，定容作为供试液。精密吸取供试液0.02mL，加蒸馏水 0.92mL，按照标准曲线制备项下的方法自“加入4mL蒽酮-硫酸溶液"起测定。根据回归方程计算浓度C，按下式计算多糖含量。多糖含量%=CDf/W ×100%。其中W为黑果枸杞干果的质量(mg)；f为换算因子，C为多糖液中葡萄糖的浓度 mgL；D为多糖的稀释因素。常规方法测定3次的多糖含量分别为9.68%、9.53%、9.41%，平均为9.54%，RSD=1.41%。 2.4.2 超声一微波协同萃取法提取与测定 称取黑果枸杞粉末10.00 g，加70%乙醇100mL，超声一微波协同萃取法(提取条件：温度50℃，微波频率2450MHz，功率自动；超声波频率40KHz，功率50 W)提取2次，每次15 min ，过滤后将药渣中加水100mL，超声-微波协同萃取法(提取条件：温度70℃，微波频率2450 MHz，功率自动；超声波频率40 KHz，功率50 W)提取2次，每次15 min，合并2次提取液，移至100 mL量瓶中，将药渣用水洗涤2次，洗涤液并入量瓶中，定容作为供试液。作为供试液。按照2.4.1自“精密吸取供试液0.02mL"起依法测定。3次测定的多糖含量分别为10.91%、10.77%、10.98%，平均为10.89%，RSD=0.98%。 2.5 回收率测定 精密称取黑果枸杞样品粉末10.00g，加入一定量干燥至恒重的黑果枸杞多糖，按照2.4.2自“用70%的乙醇100mL，超声一微波协同萃取法在50℃下提取2次，每次15 min，”起依法提取、测定。计算回收率，结果为100.7%(n=3)，RSD=1.89%。 3 讨论 3.1 超声一微波协同萃取法使样品介质内各点受到的作用一致，降低目标物与样品基体的结合力，加速目标物从固相进入溶剂的过程；经超声一微波协同萃取法提取黑果枸杞多糖的含量为10.89%，较常规法高出1.35% 3.2 超声微波协同萃取法具有省时、提取率高等优点，而且所用仪器简单，操作方便。所以黑果枸杞多糖的提取可优选超声一微波协同萃取法。 ( (下转第175页) ) 氧化酶类，如 PPO、POD、抗血血酸酶等，同时抑制微生物的活动。影响漂烫的因素有温度和时间，本试验中漂烫时间因素对 POD 活性影响大于温度因素。因此严格控制漂烫时间就能钝化POD活性，降低高温对芦笋外观品质的影响，提高速冻产品的商品性。 3.3 漂烫也引起蛋白质变性、分解、氨基酸氧化和转化，导致蛋白质和氨基酸有较大损失。而未经漂烫直接速冻的芦笋，虽然避免了漂烫引起的蛋白质和氨基酸损失，但是芦笋冷藏期间蛋白质和氨基酸会逐渐被分解，而经过漂烫处理的芦笋速冻后在冷藏期间蛋白质损失很少，含量保持稳定，能够长期贮藏。 ( 参考文献： ) ( [1 ] 郭志义.芦笋老化内因初探[J].天津农业科学，1995，1 (2)：10~12. ) ( [2] 金同铭.CA 贮藏对新鲜石刁柏的影响[J].华北农学报， 1995，7(3)：117~122. ) ( [3] 黄光荣.芦笋 MAP保鲜研究[J].食品科学，2000，21(7)： ) (上接第158页) ( 参考文献： ) ( [1] 章英才，张晋宁.两种盐浓度环境中的黑果枸杞叶的形态结构特征研究[J].宁夏大学学报(自然科学版)，2005，25(4)： 365~367. ) ( 50~54. ) ( [4] 李安妮.芦笋的速冻技术[J].广东农业科学，1997，(6)：15 ~16. ) ( [5] 高俊凤.植物生理学实验技术[M].西安：世界图书出版公 司，2000. ) ( [6] 王璋.食品酶学[M].北京：轻工业出版社，1990. ) ( [7] Ganthavorn C ， Nagel C W，Po w ersJ R. 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