黑果枸杞中色素清除自由基活性的研究检测方案(微波萃取仪)

科学研究2006.Vo1.27.NO.11 食品研究与开发-8 食品研究与开发科学研究2006.Vol.27.NO.119 黑果枸杞色素清除自由基活性的研究 汪河滨宾，白红进1.2，王金磊，褚志强，王奇 (1.新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室，新疆阿拉尔843300：2.塔里木大学文理学院，新疆阿拉尔843300) 摘 要：利用超声-微波协同萃取法提取黑果枸杞色素，并用分光光度法检测黑果枸杞色素对DPPH 自由基、羟自由基 ·OH)和超氧阴离子自由基O·)的清除能力。结果表明，黑果枸杞色素溶液对 DPPH自由基、OH和O·均具有较好的清除作用。 .关键词：黑果枸杞色素；DPPH自由基；羟自由基·OH；超氧阴离子自由基 O) STUDY ON SCAVENGING FREE RADICAL ACTIVITY OF PIGMENT IN LYCIUMRETHENICUMMURR WANG He-bin'， BAI Hong-jin?，WANG Jin- lei'，CHU Zhi-qiang'，WANG Qi' ( 1.Xinjiang Production & Construction Corps， Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Resources in TarimBasin，Alar 843300， Xinjiang， China； 2. College ofArts and Sciences， TarimUniversity，Alar 843300， Xinjiang， China)Abstract： The paper using ultrasonic-microwave synergistic extraction technique extract pigment of Lyciumrethenicum Murr. The scavenging quality of DPPH free radical， hydroxyl free radical (.OH) and superoxide freeradical ( O) in pigment by spectrophotometry.Results show that pigments have good scavenging effect onDPPH·，·OH and O· Key words： pigment of Lycium ruthenicum Murr；DPPH free radical；hydroxyl free radical；superoxide free radical 黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr) 是茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium L.) "的多年生耐盐、抗旱植物，分布于我国西北地区，其成熟浆果富含紫红色素，是一种珍稀的天然花色苷类色素?资源，具有很好的利用前景。 近年的研究结果表明，在生物体内，需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟自由基，可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，损伤膜结构及功能并引起各类疾病；超氧自由基能损伤生命大分子而导致各种疾病。目前，自由基的研究方法有电化学法、电子自旋共振法和光度法等B。本文采用分光光度法对黑果枸杞色素的 DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力进行了初步的探讨。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 ( 基金项目： 新 疆维吾尔自治区高等学校科研计划资助项目( XJE- DU2005G07)；塔里木大学校长基金重点资助项目 TDZKZD05002) ) ( 作者简介：汪河滨1980-)，男汉)，硕士，讲师，研究方向：天然产物化学。 ) 1.1.1 仪器 SartoriusBS210S电子天平：北京塞多利斯天平有限公司；超声一微波协同萃取仪：上海新拓微波溶样测试有限公司；超纯水仪：美国 Millipore 公司；T6一紫外可见分光光度计：北京普析通用有限公司。 1.1.2 材料与试剂 1.1.2.1 材料 黑果枸杞干果：采自新疆塔里木盆地。 1.1.2.2 试剂 二苯代苦味苦基自由基 (DPPH·)： Sigma 公司；抗坏血酸 Ve)； Ve； Tris- HCl缓冲液 pH8.2)；邻苯三酚；硫酸亚铁；水杨酸；双氧水；乙醇；盐酸均为分析纯)。 1.2 黑果枸杞色素提取物的制备 称取黑果枸杞粉末 5.00g， 加70%乙醇100 mL，在50℃下超声声微波协同萃取两次，每次15 min， 过滤后将残渣用70%乙醇洗涤两次，洗涤液并入量瓶中，定容作为供试液。 1.3 抗氧化性实验 1.3.1 黑果枸杞色素对 DPPH 自由基的清除实验 DPPH溶液的配制：准确称取 44 mgDPPH，用无水 乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中， DPPH 浓度为120 umo1/L， 避光保存(0℃~4℃)。 将黑果枸杞色素提取液稀释400倍后取 0.1 mL与3mL120 umo1/L DPPH溶液加入同一试管中，摇匀，在黑暗中放置 30 min， 以无水乙醇为空白在517nm测定其吸光度 A，并以下式计算其清除率： 式中： Ac： 0.1 mL 无水乙醇加3.0 mLDPPH 溶液的吸光度 Ai： 0.1 mL 待测液加3.0mLDPPH 溶液的吸光度 按照上面公式计算清除率，清除率越大抗氧化能力越强。 1.3.2 黑果枸杞色素对羟羟由基 ·OH)的清除实验 按照 Smirnof (1989)的方法，利用HO与Fe混合产生·OH在体系内加入水杨酸捕捉·OH并产生有色物质，该物质在510 nm 下有最大吸收④。 反应体系中含9.8 mmol/L HO， 2 mL， 9 mmol/LFeSO2 mL，9 mmol/L 水杨酸-乙醇2mL，不同浓度的黑果枸杞色素溶液2 mL。最后加HO启动反应，37℃反应 30 min， 以超纯水为参比，在510 nm 下测量各浓度的吸光度。考虑到色素本身的吸收光值，以9 mmol/LFeSO2 mL， 9 mmol/L水杨酸-乙醇2mL，不同浓度的色素溶液2mL 和2mL 超纯水作为色素的本底吸收。 清除率计算公式为： 式中： Ao：为空白对照液的吸光度； Ax： 为加入色素溶液后的吸光度； Axo： 为不加显色剂 HO色素溶液本底的吸光度。 1.3.3 黑果枸杞色素对超氧阴离子自由基Oz)的清除实验 1.3.3.1 采用邻苯三酚自氧化法的测定 取5mL， pH8.2， 50 mmol/L Tris- HCI 缓冲液。2 mL超纯水，混匀后在25℃水浴中保温20 min。取出后立即加入在25℃预热过的3 mmol/L 邻苯三酚0.5mL(以10 mmol/L HCI 配制， 空白管用10 mmol/L HCI代替邻苯三酚的 HCI 溶液)，迅速摇匀后倒入比色杯，420nm下每隔 30 s测定吸光度值。 1.3.3.2 样品活性测定羽 在加入邻苯三酚前，先加入一定体积的色素溶液，超纯水减少，然后按采用邻苯三酚自氧化法测定的方法操作，并计算抑制率。抑制率(I%)计算公式为： ( A：不含样品的吸光度值； ) Az：不含样品和邻苯三酚的吸光度值； A：含有样品的吸光度值； A4：含样品，但不含邻苯三酚的吸光度值。 2 结果与分析 2.1 黑果枸杞色素对 DPPH·的清除作用 取黑果枸杞色素超声——微波协同萃取)三份，每份1mL，按1.3.1的方法自将黑果枸杞色素提取液稀释400倍后取 0.1 mL 与3 mL120 umo1/L DPPH 溶液加入同一试管中”起依法测定，并计算其清除率，结果见表1。 表1 黑果枸杞色素对 DPPH·的清除作用 样品质量 g) 浓度 mg/mL) 清除率%) 5.00 0.125 14.25 5.00 0.125 15.07 5.00 0.125 13.96 由表1可知，黑果枸杞色素对 DPPH·具有较好的清除作用。 2.2 不同抗氧化剂清除 DPPH 自由基的比较 分别取黑果枸杞色素(超声一微波协同萃取)、Vc、Ve 三种抗氧化剂0.1 mL 与3 mL 120 umo1/LDPPH 溶液加入同一试管中，按1.3.1的方法自摇匀，在黑暗中放置 30 min”起依法测定，并计算其清除率，结果见表2。 表2不同抗氧化剂清除 DPPH自由基的比较 抗氧剂类别 浓度 mg/mL) 清除率%) 黑果枸杞色素 0.125 14.25 Vc 0.100 23.98 VE 0.100 6.2 由表2可以看出，在浓度基本相同条件下，黑果枸杞的抗氧化能力强于 Ve，但比Vc弱。 2.3 黑果枸杞色素对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力 对黑果枸杞清除自由基能力的测定分析结果见表3。 表3 黑果枸杞清除自由基能力的测定 编号 浓度(mg/mL) ·OH清除率%) O·清除率%) 0.25 36.63 3.91 0.50 42.34 6.80 0.75 42.89 8.77 1.00 43.97 20.14 5 1.25 48.06 35.45 从黑果枸杞色素清除自由基能力的测定分析结果看，色素对羟自由基和超氧阴离子自由基都有清除能 油茶肉质果和肉质叶营养成分及食用安全性的研究 朱必凤，彭凌，罗莉菲，刘静华，何秋东 (韶关学院英东生物工程学院，广东韶关512005) 摘 要：采用常规方法测定了油茶肉质果和肉质叶的蛋白质、脂肪、还原糖、总糖、总氮、茶皂素等；使用原子吸收光谱法测定矿物元素；使用氨基酸自动分析仪分析氨基酸含量；使用高压液相层析法测定维生素； Horn 法、小鼠微核试验和小鼠精子致畸试验分析食用安全性。结果表明；成熟的肉质果叶)水分为91.36%( 91.58%)、酸度0.35%( 0.46%)、100g干重样品含蛋白质 7.81 g( 6.56g)、脂肪3.7g2.90g)、还原糖30.41g( 21.83g)、总糖37.23g( 29.28 g)、茶皂素2.44 g( 1.46g)、灰分 3.45 g( 4.55g)、矿物元素359mg 411.3mg)、锰 33.06 mg 31.35 mg)、16种氨基酸；所测的6 种维生素中， Vc 和叶酸含量较高。毒性试验结果显示样品为无毒性。微核试验和致畸试验结果表明：小鼠微核率与对照组比较，差异无显著性 P>0.05)。小鼠精子致畸率与阳性对照组比较无显著性差异 P>0.05)。证明油茶肉质果、肉质叶是一种食用安全的野生果和食品资源。该结果是首次报道，为该样品的食用和开发提供了依据。 关键词：肉质果；肉质叶；油茶；营养成分；微核试验；致畸试验 STUDIES ON NUTRITIONAL COMPONENTS AND EDIBLE SECURITY IN FLESHY FRUIT AND FLESHY LEAF OFCAMELLIA OLEIFERA ABEL ZHU Bi- feng， PENG Ling， LUO Li- fei， LIU Jing- hua， HE Qiu- dong ( Ying-dong College of Biotechnology， Shaoguan University， Shaoguan 512005， Guangdong， China)Abstract： To study the nutritional components in fleshy fruit and fleshy leaf of Camellia Oleifera Abel and theiredible security. Protein， fat， reducing sugar， total sugar， total nitrogen and teasaponin were assayed by conven-tional methods. Mineral elements were determined by atomic absorption spectrometry. Amino acid and vitaminwere analyzed by high pressure liquid chromatography. To investigate the edibal security using Horn method mi- ( 基金项目：香港霍英东基金(No.HK314-140436) ) 力，清除效果与色素浓度成正比。 3 讨论 3.1 黑果枸杞色素对 DPPH 自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基都有清除能力。在一定浓度范围内，色素对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除效果与色素浓度成正比。 3.2 黑果枸杞色素具有较好的清除羟基自由基的活性，而清除超氧阴离子自由基能力不如清除羟基自由基的能力。 3.3 黑果枸杞色素含量较高，提取工艺简单，重复性好，而且对环境无污染，着色能力强，并能有效清除自 由基，具有很高的开发利用前景。 ( 参考文献： ) ( [1] 章英才，张晋宁.两种盐浓度环境中的黑果枸杞叶的形态结构特 征研究[.宁夏大学学报(自然科学版)，2005，25(4)：365~367. ) ( [2] 蔺定运，甘青梅，李炜，等.黑果枸杞色素初步研究[].中国食品添 加剂，1995(2)：5~9. ) ( [3] 崔文新，张静静，耿越.几种天然植物色素清除自由基能力比较研 究[].山东师范大学学报(自然科学版)，2006，21(2)：105~107. ) ( [4] 颜军，郭小强，邬晓勇，等.银耳多糖的提取及其清除自由基作用 [].成都大学学报，2006，25(1)：35~38. ) ( [5] 韩强，林惠芬.一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清 除作用[].日用化学工业，2000，30(3)：14~17. ) ( 收稿日期：2006-08-22 ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. 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