芦荟萃取物中抗脂质氧化作用检测方案(微波萃取仪)

第18卷 第4期2006年12月塔 里 木 大 学 学 报Journal of Tarim UniversityVol 18 No 4Dec 2006 白红进等：芦荟超声-微波协同萃取物抗脂质氧化作用的研究选第4期63 芦荟超声-微波协同萃取物抗脂质氧化作用的研究 1，2 2白红进汪河滨 杨翔 (1 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室，新疆阿拉尔 843300)(2 塔里木大学文理学院，新疆阿拉尔 843300) 摘要 目的：研究芦荟不同溶剂超声微波协同萃取提取物对菜籽油、猪油、棉籽油及葵花油的抗氧化作用。方法：以无水乙醇、蒸馏水及无水乙醇-蒸馏水(体积比为1：1)为溶剂，采用超声微声协同萃取提取，采用743 Rancimat食用油氧化稳定性测定仪分别测定提取物对菜籽油、猪油、棉籽油及葵花油的抗氧化作用。结果：不同溶剂提取物对油脂的抗氧化性存在差差；无水乙醇提取物抗氧化作用明显，并随提取物加入量的增加抗氧化性有提高的趋势，但对不同的油脂抗氧化性也存在一定的 差异。结论：芦荟无水乙醇提取物可以作为菜籽油的抗氧化添加物，具有研究开发价值。 关键词 芦荟；超声-微波协同萃取；抗氧化作用 中图分类号：O657.72 文献标识码：A Research of Anti- oxidation of the Extractions Extracted by M eans ofUltra sound and M icrowave- a ssisted Extraction from Aloe onLipid Bai Hongjin Wang HebinYang Xiang (1. Key Laboratory of Protection and U tilization of B iological Resources in Tarm Basin of XinjiangProduction & Construction Group， Tarim University， Alar， Xinjiang 843300)(2 College of A rts and Science， Tarm University， A lar， Xinjiang 843300) Abstract Objective： This paper studied anti-oxidation of the extracts from A e on oil Method： The extracts from A loe were extrac-ted by means of ultrasound and microwave-assisted synergism extraction with anhydrous ethanol， distilled water and anhydrous ethanol- distilled water respectively. It's effects of antioxidant activities on rapeseed oil， lard， cotton- seed oil and sunflower- seed oil weredetemm ined by RancimatMode1743. Result D ifferent extracts showed different anti- oxidation on lip id. The anhydrous ethanol extrac-tion showed higher antioxidant activities on rape- sees oil and lard than others Conclusion： The anhydrous ethanol extraction can beused as antioxidant additive of rap oil Key words A loes； ultrasound and microwave-assisted synergism extraction； anti- oxidant activity 芦荟系百合科(Liliaceae)芦荟(Ale)属多年生肉质植物，其名称源于阿拉伯语(Anoeh)。 本草纲目"木部三十四卷写道“卢会(即芦荟)，又名象胆，，乃掇阴经药也。其功专于杀虫清热。杀小儿疳蛔，主吹鼻，杀脑疳，除鼻痒”。现代药理学研究也证实芦荟具有多种医疗效能，主要表现在：抗炎、 抗菌作用，抗胃溃疡作用，降血糖作用，抗癌、抗肿瘤作用，抗病毒，抗爱滋病作用2。目前已知的芦荟化学成分有160多种，主要有蒽醌及苷的衍生物、萘酮类，树脂，有机酸，糖类(单糖，多糖及聚合体)，蛋白质，草酸钙和纤维等3]。美国芦荟在日化、食品和医药行业中被广泛利用。芦荟和芦荟制品的营销 ( 收稿日期：2006-08-25 ) ( 基金项目：新疆维吾尔自治区高等学校科研科划创新研究群体基金项目(编号：XJEDU2005G07)；塔里木大学校长基金重点项目(编号： TDZKZD05002) ) ( 作者简介：白红进(1967-)，男，副教授，硕士，主要研究方向为天然产物化学。 杨翔为动物科技学院动物医学专业206-3班本科生 ) 额为20亿美元。芦荟的功效得到了美国食品和药物委员会 FDA以及医疗界的认可。油脂和富含油脂的食品如果长时间地暴露在空气中，易被氧化，生成有害人体健康的过氧化物，防止脂氧化目前最简便易行的是添加一些抗氧化剂41。 抗氧化剂有合成的和天然的提取物。随着科学的进步，越来越多的人认识到化学合成抗氧化剂的危害，故而人们需要高效无毒的天然油脂抗氧化剂。 多年来通过人们大量的研究表明芦荟汁中含有抗脂质过氧化和消除自由基的有效物质，它的抗脂质过氧化作用与清除氧自由基，氢自由基的效应有关，可明显降低大鼠肝组织自发性的丙二醛的生成，减轻 CC14和 Fe、Vc所致的肝脏脂质过氧化损伤 文献报道芦荟抗氧化活性成分的提取方法有：以无水乙醇作溶剂，采用超声波辅助提取；以甲醇作溶剂，采用超声波辅助提取。。但未见文献报道采用超声-微波协同萃取提取芦荟抗氧化物质。本文首次采用超声-微波协同萃取新技术提取芦荟抗氧化物质并测定其抗脂质氧化作用，为芦荟抗氧化产品的深度开发和应用提供技术支撑。 材料与方法 1.1 材料、仪器与试剂 材料：新鲜芦荟，购于塔里木大学智能温室室内栽培种，经鉴定为百合科(Liliaceae)芦荟属(Aloe)多年生肉质植物中国芦荟。 试剂：菜籽油、棉籽油、葵花籽油(市售未加任何添加剂)、猪油(市售板油自制)、维生素E(白求恩医科大学制药厂)、维生素 C(石家庄格瑞药业有限公司)、无水乙醇(分析纯，天津市化学试剂三厂)，苯甲酸钠等试剂均为国产分析纯。 仪器：SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂)；DZKW-4型电子恒温水浴锅(上海金桥科析仪器厂)；RE52-A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)； CW -2000型超声-微波协同萃取仪(上海新拓微波溶样测试技术有限公司)；OEM型电子分析天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；101-3A型真空干燥箱(北京光明医疗仪器厂)；743型油脂氧化稳定性测定仪(瑞士万通公司)。 1.22方法 1.2.1 活性物质的提取 取新鲜芦荟叶片 100 g，剪碎、研磨，转入500ml萃取瓶中，加入无水乙醇200ml，放入超声微波协同萃取仪中进行萃取(条件设置为：时间800 s.功率100w、超声开、微波开、恒定温度为73℃)。待冷却后取出，真空过滤。滤渣再提取一次，合并两次滤液。将滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩。50℃真空干燥恒重，得样一。采用同样方法，分别以蒸馏水、无水乙醇与蒸馏水(体积比为1：1)混合物为溶剂进行提取，得样二、样三。 1.2.2 抗氧化活性测定 以维生素C、维生素E、苯甲酸钠为阳性对照.以空白油脂为阴性对照，用PVC稳定性测定仪采用活性氧法(AOM法)，按 ISO5555标准采样，120℃条件下测定不同提取物对菜籽油、猪油、棉籽油、葵花籽油的抗氧化稳定性。 2 结果与分析 2 1 对菜籽油的抗氧化实验 当加入菜籽油质量1%的提取物样一、样二、样三时，测得的抗氧化作用结果见图 1。加入菜籽油质量0.5%的提取物样一时，其抗氧化作用结果见图2. 由图2可知，当加入0.5%的样一时，也具有一定的抗氧化作用，其抗氧化作用高于苯甲酸钠和 VE，但次于 Vc。所以添加1%以上无水乙醇提取物时，对菜籽油都具有较明显的抗氧化作用，并且随着提取物添加量的增加其抗氧化能力也呈增加趋势。 22 对猪油的抗氧化实验 当加入猪油质量 1%的样一、样二、样三时，其抗氧化作用结果见图3.加入猪油质量2%的样一时，其抗氧化作用结果见图4. 由图3可知，当加入猪油质量1%的样品时，样一、样三对猪油的都具有抗氧化性作用，其中样一抗氧化性比样二、样三、维生素E都强，仅次于苯甲酸钠和维生素C。样三的抗氧化性不是很明显，样二反而诱导猪油的氧化。 由图4可知，当加入猪油质量2%的样品时，样一具有明显的抗氧化作用，抗氧化性仅次于维生素 C，样二、样三则没有抗氧化作用。即添加1%一2%的无水乙醇提取物时，对猪油都具有明显的抗氧化作用。 当添加1%的无水乙醇与蒸馏水(体积比为1：1) 时，具有轻微的抗氧化作用。 h 图1 加入1%不同提取物时对菜籽油抗氧化作用的测定结果 菜籽油/空白 菜籽油/样一0.015g 菜籽油/维生素E0.03ml菜籽油/苯甲酸钠0.015g 菜籽油/维生素C0.015g h 图2加入0.5%样一对菜籽油抗氧化作用的测定结果 样- 样二 样三 维生素C 图3 加入1%不同提取物时对猪油抗氧化作用的测定结果 图4 加入2%不同提取物时对猪油的抗氧作用的测定结果 2.3 对棉籽油的抗氧化实验 当加入棉籽油质量1%的样一时，其抗氧化结 果见图5.加入棉籽油质量0.5%的样一时，其抗氧化结果见图6. 棉籽油/维生素C0.03g 棉籽油/维生素E0.03g 棉籽油/苯甲酸钠0.03g 图5 加入1%样一时对棉籽油抗氧化作用的测定结果 棉籽油/样一0.015g 棉籽油/空白 棉籽油/维生素E0.015ml棉籽油/苯甲酸钠0.015g 棉籽油/维生素C0.015g 图6 加入0.5%样一时对棉籽油抗氧化作用的测定结果 由图5可知，当加入棉籽油质量1%的样一时，其对棉籽油的抗氧化性比维生素E强，基本等同于苯甲酸钠，仅次于维生素 C，但对棉籽油抗氧化作用不明显。 由图6可知，当加入棉籽油重量0.5%的样一时，样一、苯甲酸钠维生素E对棉籽油都没有抗氧化性，只有维生素 C具有抗氧化性。即添加 0.5%~1% 无水乙醇提取物时，对棉籽油的抗氧化作用不明显，但添加1%样一和0.5%样一时，前者对棉籽油的抗氧化作用好。 2.4 对葵花籽油的抗氧化实验 当加入葵花籽油质量 1%的样一时，其抗氧化作用见图7。加入葵花籽油质量0.5%的样一时，其抗氧化作用结果见图8. 葵花子油/维生素C0.03g 葵花子油/维生素E0.03ml 葵花子油/苯甲酸钠0.03g 图7 加入1%的样一时对葵花籽油抗氧化作用的测定结果 由图7可知，当加入葵花籽油质量 1%的样一时，对葵花籽油的抗氧化作用比维生素E和苯甲酸 钠都强，但其抗氧化作用次于维生素C。 葵花子油/空白 葵花籽油/样一0.015g 葵花籽油/维生素E0.015ml 葵花籽油/维生素C0.015g 葵花籽油/苯甲酸钠0.015g 图8 加入0.5%的样一时对葵花籽油抗氧化作用的测定结果 由图8可知，当加入葵花籽油重量0.5%的样一时，样一、苯甲酸钠、维生素E都对棉籽油没有抗氧化性，只有维生素 C对其具有抗氧化性。即添加1%的无水乙醇提取物时，对葵花籽油没有明显的抗 氧化作用。 3 讨论 ( 3.1 提取溶剂不同，芦荟提取物的抗氧化性存在较 ) 大的差异 由实验可知，无水乙醇提取物对油脂具有明显的抗氧化作用；用蒸馏水，蒸馏水与无水乙醇1：1提取的物质基本上对油脂没有抗氧化性，只有对猪油的抗氧化性实验中，蒸馏水与无水乙醇提取物对猪油具有轻微的抗氧化性，这是因为在实验条件下，芦荟中的抗氧化物质在无水乙醇中的溶解度大，这与文献报道芦荟抗氧化物质采用无水乙醇作溶剂相吻合9]。因此提取芦荟抗氧化物质宜采用无水乙醇作溶剂。 3.2 芦荟提取物对油脂的抗氧化活性与其浓度呈量效关系 随着提取物浓度的增高对油脂的抗氧化性也逐渐增强，随着其浓度的降低对油脂的抗氧化性也逐渐减弱，但浓度大到一定时，其量效关系并不明显，这与文献报道相一致。 3.3 芦荟提取物对不同油脂抗氧化作用的强度也不同 在实验条件下，芦荟提取物对菜籽油的抗氧化性相对较强，对猪油的抗氧化性相对较弱，对棉籽油和葵花籽油几乎没有抗氧化作用，这是因为不同油脂所含不饱和脂肪酸的相对含量不同，被氧化的难易也不同造成的。因此，芦荟提取物可以做菜籽油的抗氧化添加物，但不适宜做猪油、棉籽油和葵花籽油的抗氧化添加物。 3.4 本文首次采用超声-微波协同萃取提取芦荟 (上接第50页) 据相关报道，年龄3~8岁之间的牛的超排效果较好，可用胚数较多。而本试验所用的供体牛为11岁的老年牛，获得可用胚为10枚，与报道有一定差距，其原因可能是由于牛的饲养管理较好，产犊间隔时间较为合适。通过调查得知该牛在超排前有3个月的空怀期。 4.3 关于双胎 本实验两头受体牛共产出5头母犊，其中2头为胚胎移植后代，3头为人工授精后代。由于缺乏对多胎牛的接产经验，使1头犊牛在生产中死亡，其中1头双胎受体牛胎衣不下。AI+MOET技术的并用获得多胎的机率较高，但是受体牛都有早产的趋 抗氧化物质，并测定其抗脂质氧化作用 研究表明，该方法兼顾超声协助萃取和微波协助萃取方法的优点，具有安全、高效、环保、经济的特点，适宜于用极性溶剂来提取的活性成分的提取。 ( 参考文献 ) ( [1] 李时珍.本草纲目[M].北京：人民卫生出版社， 1978.45. ) ( [2] 李锦馨.冯梅.芦荟的药用功效及其开发利用[J].宁 夏农学院学报，1999，(4)：72~76. ) ( [3] 万金志，乔悦.芦荟的化学成分及其研究[J].中草药， 1999，30(2)： 1 51~153. ) ( [4 ] 王蜀秀.芦荟多糖的研究[J].植物学报，1989，31(5)： 389~392. ) ( [5] 李文享，帅海波.芦荟药理研究新进展[J].特产研究， 1998，8(3)：53~56. ) ( [6] 张尊听，杜勇军，刘谦光，等.芦荟抗氧化作用的测定 [J].天然产物研究与开发，2001，13( 6 )：46. ) ( [7]] 陈丹，刘文英，包国荣，等.芦荟中芦荟苷清除超氧阴 离子自由基的ESR研究 [J].中国现代应用药学杂 志，2005，22(1)：13. ) ( [8] 侯冬岩，回瑞华，吴师，等.芦荟花中芦荟苷的 HPLC 分析及抗氧化性能测定[J].浙江大学学报(理学 版)，2004，31(4)：439. ) ( [91 黄丽英，林新华，陈伟，等.芦荟大黄素、芦荟素清除氧 自由基作用的研究[J].中国医院药学杂志，2006，26 (1)：13. ) 势，本实验两头受体牛分娩日期均早于预产期1个月左右。犊牛的体重在23kg左右，虽体重较轻，但均发育正常。 ( 参考文献 ) ( [1] 郭志勤主编.家畜胚胎工程[M].北京：中国科学技术 出版社，1998，69~94. ) ( [2] George E Seidel and S a rah Moore Seidel T ra ining man-ual for embryo t ransfer in cattle [M]. 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