盐酸氢吗啡酮注射液中无菌检查的方法验证检测方案(集菌仪)

维普资讯 http：//www.cqvip.com研究报告www， zgys. org 维普资讯 http：//www.cqvip.com中国药师2006年第9卷第7期China Pharmacist 2006， Vol.9 No.7 盐酸氢吗啡酮注射液无菌检查的方法验证 程 樱 张春瑛 (湖北省药品检验所 武汉430064) 乐晓红 (宜昌人福药业有限责任公司) 摘 要 目的：验证盐酸氢吗啡酮注射液无菌检查的方法。方法：采用中国药典2005年版无菌检查法中的薄膜过滤法(附录XI H)。结果：盐酸氢吗啡酮注射液对生孢梭菌存在抑制作用，以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，至少需要0.1%的蛋白胨水溶液600 ml冲洗。结论：经方法学验证，该方法准确可靠，可作为盐酸氢吗啡酮注射液的无菌检查方法。 关键词 盐酸氢吗啡酮注射液；无菌检查；方法验证 中图分类号：R927.11 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2006)07-0634-03 Verification for Sterility Test of Hydromorphone Hydrochloride Injection Cheng Ying， Zhang Chunying(HuBei Provincial Institue for Drug Control， Wuhan 430064，P. R. China)； Yue Xiaohong(Yichang Ren-fu Pharmaceuticl Co. Lid.) ABSTRACT Objective： To verify the sterility test of Hydromorphone Hydrochloride injection. Method： Verification test in Pharma-copeia of P. R. China(Chp)2005 was used. Result： Clostridium Sporogenes was restrained by Hydromorphone Hydrochloride injection.It was washed down by more than 600 ml of 1%-pancreatic digest of casein.Conclusion： This method is accurate. It can be used forsterility test of Hydromorphone Hydrochloride injection. KEY WORDSIHydromorphone Hydrochloride Injection；Sterility Test；Verification 无菌检查法是用于检查药品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。为保证检验质量，对所采用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的准确可靠。同其他分析方法一样，无菌检查法也应验证所采用的检验方法和检验条件是否适合于供试品，以确保该检查方法的完整性及检验结果的准确性、有效性和重现性。在方法验证试验中，当建立无菌检查法或药品的组分及原检验条件发生改变时，都必须进行方法学验证。 现以盐酸氢吗啡酮注射液为例，对其无菌检查法进行方法学验证。 1 材料和仪器 1.1 供试品 盐酸氢氢啡酮注射液(规格：10 ml：10 mg；批号： 051003；宜昌人福药业有限公司生产)。 1.2 培养基及冲洗液 无菌检查用硫乙醇酸盐液体培养基(批号：031110)；改良马丁培养基(批号：050822)；营养肉汤培养基(批号：030923)；营养琼脂培养基(批号：050520)；0.1%蛋白胨水溶液等，均由北京三药科技开发公司提供。 1.3 验证试验用菌种(第三代) ①金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]；②铜绿假单录菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B)10104]；③枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]；④生孢梭菌(Clostridium sporogenes) [ CMCC(B)64941]；⑤白色念珠菌( Candida albicans) [ CMCC(F)98001]；⑥黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]；以 2.4 敏感度分析 药物经济学中的变量通常较难准确地测算出来，经济学中应用的数据具有不确定性和潜在的偏倚。这种不确定性和偏倚可直接影响费用和结果的精确度，为了测量分析中所用的变量，必需采用不同假设或估算数据。敏感度分析就是为了验证不同假设或估算对分析结果的影响程度。本文假设药费下降15%，检验及诊疗费下调10%或上调5%对C/E和 AC/AE 的影响，结果对比值的大小顺序没有影响。 3 讨论 尼卡地平为第2代血管选择性二氢吡啶类钙拮抗药，其静脉制剂已广泛用于高血压急症及围手术期高血压治疗，是一种安全、有效的降压药物。表1显示进口尼卡地平比国产尼卡地平的总有效率高，但无显著性差异。表4显示A组即 国产尼卡地平治疗6h组费用最低且成本效果比值最低。因此国产尼卡地平已经达到进口尼卡地平降压的临床疗效，而且费用低，国产尼卡地平在静注后持续静脉滴注维持血压时，不需要滴注 24 h，6h 即可达到预期效果。 ( 参 考 文 献 ) ( 王文.第六届国际高血压及相关疾病学术研讨会纪要[J]、高血压杂志， 2004，12(6)：490-491 ) ( 2 徐军，王立军，张启高，等.重症高血压静滴乌拉地尔后血压监测和效应分 析[J]. 医 学研究生学报，2004，17(8)：714-716 ) ( 3 程晓明.卫生经济学[M].北京、人民卫生出版社，2003.329 ) ( 陈洁、 药 物经济学[M].成都：成都科技大学出版社、2000.96 ) ( 5 宋小骏，黄鬼.脑梗塞4种药物治疗方案的成本-效果分析[J].药物经济 学，2003，14(2)：87-89 ) 上菌种均由中国药品生物制品检定所提供。 1.4 仪器和滤器 HTY-2000A 集全仪，全封闭无菌试验过滤培养器(批号20050105杭州高得医疗器械有限公司)。 2 方法与结果 按照《中国药典》2005年版二部无菌检查法(附录XH)方法验证进行试验。 2.1菌液制备 取经35℃培养18~24h的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌的肉汤新鲜培养物1ml，加加0.9%无菌氯化钠溶液9ml，10倍稀释至10-5~10-为50~100 cfu/0.1ml，备用。 取经35℃培养18~24h的生孢梭菌硫乙醇酸盐液体培养物1ml，加人0.9%无菌氯化钠溶液9 ml，10 倍稀释至10°约为50~100 cfu/0.1 ml，备用。 取经25℃培养18~24h的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml，加人0.9%无菌氯化钠溶液9 ml，10倍释至至10约为 50~100 cfu/0.1 ml，备用。 取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10 ml，将孢子洗脱后，吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗(湿热灭菌)过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液。取此菌原液0.1 ml，加0.9%无菌氯化钠溶液9.9ml，稀释至10约为 50~100 cfu/0.1 ml，备用。 2.2 菌液计数 每种菌液接种2个平皿，取其平均值。 上述6种菌液在试验的同时，金黄色葡萄球菌液、铜绿假单菌液、枯草芽孢杆菌液、生抱梭菌液用约18ml营养琼脂注皿(1ml)或平板涂布(0.1ml)35℃培养(生孢梭菌置厌氧培养箱中培养)；白色念珠菌、黑曲霉菌菌液液约18ml 改良马丁培养基注皿(1ml)或平板涂布(0.1ml)，25℃培养后，计数。菌液计数结果见表1。 表1 细菌和真菌计数结果 菌 种 cfu 黑曲霉菌 金黄色葡 枯草芽 铜绿假 生孢梭菌 白色念 萄球菌 孢杆菌 单胞菌 珠菌 计数1 80 次数2 94 注：菌数为2个平皿的平均数 2、3 供试液制备 取供试品原液。 2.4 薄膜过滤法 取供试品5支混混后，取10 ml(每支供试品最少取2ml)按薄膜过滤法过滤，在约50 ml冲洗液中加入上述试验菌，同法过滤，按规定将相应的培养基加至封闭式薄膜滤器内，作为供试品管；另取一封闭式薄膜滤器，不过滤供试品，其他操作同上，同法加人相同的等量试验菌，作为菌液对照管。6种试验菌同法操作；阴性对照：取两个封闭式薄膜滤器，各过滤0.9%无菌氯化钠溶液100 ml 后，分别加入硫乙醇酸盐培养基和改良马丁培养基培养基100 ml，不加对照菌液，上述各滤器均按规定的温度培养3~5d，每天观察并记录结果，见表2。 表2 盐酸氢吗啡酮注射液无菌检查法验证试验结果 菌种及培养基 试验 菌数 供试品管培养(d) 菌液对照管培养(d) 次数 1 23 4 ：5 1 23 4 5 金黄色葡萄球菌、硫乙醇 11 64 ++ + ++ + 十 酸盐流体培养基、35℃ 2 71 铜绿假单菌、硫乙醇酸盐1 71 流体培养基，35℃ 2 68 枯草芽孢杆菌、硫乙醇酸 1 88 盐流体培养基、35℃ 2 73 生梭菌、硫乙醇酸盐流 81 体培养基、35℃ 2 95 白色念珠菌、改良马丁培 1 62 养基25℃ 2 ：58 1 80 黑曲霉、改良马丁培养 基、25℃ 2 94 + + + + + + 两个阴性对照管均无微生物生长，两种培养基均澄清透明。 2.5结果分析 除加入生孢梭菌的供试品管外，其余5种菌在规定的条件下，供试品管与菌液对照管比较，均生长良好，且培养结果相似，而加入生孢梭菌的供试品管观察5d仍未生长，说明该检验量的供试品在该检验条件下对生孢梭菌有抑制作用，需要进行冲洗来消除其抑菌成分。 另取供试品5支混匀后，取10ml(每支供试品最少取2ml)按薄膜过滤法过滤，用0.1%的蛋白胨水溶液200ml冲洗(每次100ml)，振摇，在最后一次冲冲洗液中加入少于100 cfu 生孢梭菌，同法过滤，按规定将相应的培养基加至封闭式薄膜滤器内，作为供试品管；另取一封闭式薄膜滤器，不过滤供试品，同法加入等量的试验菌，作为菌液对照管。35℃培养48 h，供试品管及生孢梭菌对照管均生长良好，且培养结果相似。试验结果见表3。 表3生孢梭菌验证试验结果 菌种 培养基 温度 试验 菌数 供试品管培养(d) 菌液对照管培养(d) 次数 1 2 34 5 1 2 34 5 生孢硫乙醇酸盐 35℃ 1 62 + + + + + + 梭菌流体培养基 2 82 -+++++ ++++ 根据上述验证试验可知：盐酸氢吗啡酮注射液对生孢梭菌存在抑制作用，按照中国药典2005年版二部无菌检查法中的薄膜过滤法(附录X H)检验：以金黄色葡萄球菌为阳性对照菌，至少需要0.1%的蛋白胨水溶液600 ml 冲洗。 3 讨论 因为考虑盐酸氢吗啡酮注射液是化学类药品，所以前两次的验证试验均采用没有进行冲洗的薄膜过滤法，结果该检验量的盐酸氢吗啡酮注射液在该检验条件下对生孢梭菌有抑制作用，改用0.1%蛋白胨水溶液冲洗后才消除其抑菌成分，从而避免出现假阴性结果，提高了药品阳性检出率，保证检验结果准确可靠。综上所述，①在药品无菌检查中，需要用冲洗液进行冲洗的品种不能简单地按照药品的用途来分类，即不仅仅只局限于抗菌素，还包括抗病毒、抗肿瘤及精神类镇痛药品等；②通过上述试验再次证明了方法验证试验的重要性，即验证所采用的检验方法和检验条件是否适合于供试品的无菌检查，既确定了该检验方法下供试品的抑菌性，又确定了合适的检验方法和检验条件，它比抑细菌和抑真菌的试验具有更广泛的意义。 依贝沙坦分散片的制备、含量测定及溶出度考察 郭凌云 (武钢职工医院 武汉430000) 摘 要 目的：研制依贝沙坦分散片，并进行溶出度考察以及含量测定。方法：采用溶出度测定法测定同一批号依贝沙坦分散片的溶出度，并与市售依贝沙坦片进行比较，利用高效液相色谱法测定不同批号的依贝沙坦分散片的含量。结果；本品溶出均一性好，累积溶出百分率在20 min 达90%以上且含量测定稳定。结论：依贝沙坦分散片分散均匀，溶出度比普通片快且含量测定结果符合限度要求。 关键词 依贝沙坦分散片；高效液相色谱法；含量测定；溶出度 中图分类号：R944.4 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2006)07-0636-02 依贝沙坦(Irbesartan)为血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体AT1的阻断药，它可阻止 Ang Ⅱ所引起的血管收紧及醛固酮释放，对轻中度高血压的降压效果显著，不逊于现有降压药物，又可逆转高压所引起的心肌肥大，且不良反应少11.21。自血管紧张素转换酶抑制药(ACEI)被推荐为一线降压药以来，已广泛应用于高血压病、充血性心力衰竭以及高血压相关的各种并发症和合并症的治疗。分散片是一种能在水中迅速崩解并能均匀分散的片剂。为了便于临床使用，我们研制了依贝沙坦分散片并进一步考察依贝沙坦分散片溶出度及测定依贝沙坦分散片含量。 1仪器与试剂 1.1 药品与试剂 依贝沙坦原料药(南京京华生物工程有限公司，含量99.8%)；依贝沙坦对照品(中国药品生物制品检定所)；依贝沙坦分散片(自制，75mg/片)；依贝沙坦市售片(Sanofi 公司，300 mg/片)；乙腈(色谱纯，天津科密欧化学试剂开发中心)；所用辅料均为药用辅料；其它试剂均为分析纯。 1.2 仪器 ZRS-8智能溶出试验仪(天津大学精密仪器厂)；片剂四用测定仪(上海黄海药检仪器厂)；高效液相色谱仪(日本岛津公司)；单冲异型压片机(上海制药机械三厂)；电子天平(上海精密仪器厂)。 2 方法与结果 2.1 处方与制备工艺 2.1.1 处方 依贝沙坦75 g，微晶纤维素 72.5 g，乳糖72.5 g，交联聚乙烯吡咯烷酮 25 g，2% PVP适量，硬脂酸镁2.5go 2.1，2 制备工艺 依贝沙坦和辅料均过100目筛，按上处方量称取依贝沙坦微晶纤维素，乳糖及交联聚乙烯吡咯烷酮(pvpp)， 混合均匀后用适量2%PVP水溶液制软材，以40目尼龙网制粒，于干燥箱内60(2℃的温度干燥3h，加入1% ( 梦 考 文 献 ) 硬脂酸镁30目筛整粒，放置密闭容器内，检验合格后压片。共制1000片，每片重250mg含主药75 mg。 2.2 分析方法的建立 2.2.1 测定波长的确定 将适量依贝沙坦对照品和按处方比例的全辅料分别加到量瓶中，用0.1mol·L盐酸溶液溶解至刻度，分别在200~400 nm 波长范围内进行紫外扫描。结果表明：依贝沙坦在0.1 mol·L盐酸溶液中的最大吸收波长为270 nm，而且辅料在此波长处无吸收。 2.2.2 色谱条件 色谱柱为 NucleosilC}g柱(4.6 mm×250mm，5pm)，流动相为乙腈-水(50：50，磷酸调pH 2.40)，流速1.0ml·min，测定波长270 nm，柱温为室温。 2.2.3 辅料干扰性试验 分别取分散片辅料和依贝沙坦原料药及辅料各适量配成水溶液，取溶液20 ul注人色谱仪分析，色谱图见图1、2。结果表明辅料对依贝沙坦测定无干扰。 图1 辅料色谱图 图2 药物+辅料色谱图 2.2.4 标准曲线 精密称取取贝沙坦对照品约80 mg，置100 ml量瓶中，加流动相适量，超声15 min 使溶解，稀释至刻度，摇匀，精密量取4ml至50 ml量瓶中，定容，精密量取1，3，5，7，9 ml至10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，取20pl注入色谱仪中，分别以药物峰面积对浓度进行线性回归。结果表明：依贝沙坦在6.4 ~57.6 pg'ml"的浓度范围内的回归方程为：A=12 008C-5350.6，线性关系良好(r=0.9999)。 ( 3 1 许华玉，李智勇，王国荣.2005版中国药典无菌检查法修订内容的介绍 [J].中国药品标准，2005，6(2)：39-41 ) (稿 回) (稿)